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2023年  第44卷  第10期

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基础医学
过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株的构建
李春桃, 张雪梅, 苏琰迪, 张剑青
2023, 44(10): 1-9. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231016
摘要(1844) HTML (1304) PDF (72)
摘要:
  目的  构建过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株。  方法  根据lncRNA RP11-521C20.3基因序列，设计合成引物并进行扩增。将目的基因与Sbf I和EcoRI酶切的载体连接，构建pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE重组质粒，转染293T细胞，包装含lncRNA RP11-521C20.3质粒重组体的慢病毒。构建shRNA（RP11-521C20.3），连接到AgeI和EcoRI双酶切后的pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE载体上，经鉴定后转染293T细胞。再利用慢病毒介导，构建重组质粒pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE和pSLenti-U6-shRNA（RP11-521C20.3）-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE，导入A549细胞。最后采用RT-qPCR技术在基因水平检测lncRNA RP11-521C20.3的表达。  结果  OV-lncRNA RP11-521C20.3组（过表达组）的lncRNA RP11-521C20.3 mRNA表达量高于NC-lncRNA RP11-521C20.3组（过表达对照组）（P < 0.001），差异倍数为（20.43±0.69）。sh-lncRNA RP11-521C20.3组（敲减组）的lncRNA RP11-521C20.3mRNA表达量低于sh-NC组（敲减对照组）（P < 0.001），差异倍数为（0.21±0.08）。  结论  成功构建了lncRNA RP11-521C20.3过表达及敲减稳转细胞株。为后续研究lncRNA RP11-521C20.3在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病机制中的作用奠定重要基础。
丁酸对TNFα所致肠上皮屏障损伤的保护作用
刘路琼, 陈通, 张永进, 谢振荣, 何成禄, 黄永坤
2023, 44(10): 10-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231021
摘要(1895) HTML (1163) PDF (41)
摘要:
  目的   探讨丁酸对TNFα所致肠上皮屏障损伤的保护作用。  方法  用CCK-8细胞活力检测探索TNFα对Caco2发挥损伤作用的最佳浓度和时间，并以此为基础探索在TNFα发挥损伤作用最佳作用时间附近丁酸对Caco2细胞的保护情况，随后探索TNFα和丁酸共同作用于Caco2细胞时的最佳时间和浓度，并检测Caco2细胞单层上皮屏障的FITC-dextran渗透率，紧密连接ZO-1和Occludin的mRNA表达情况及免疫荧光观察TNFα和丁酸共同作用后细胞的生长情况及ZO-1和Occludin在Caco2中的表达和分布。  结果  100 ng/mL的TNFα刺激48 h能明显降低Caco2的细胞存活率（P < 0.0001）；丁酸作用于Caco2细胞48 h，0.2 mM/L的丁酸能明显提高Caco2的细胞存活率（P < 0.0001）。当TNFα和丁酸共同作用时，与TNFα干预组相比，丁酸可以明显降低TNFα所致的肠上皮单层屏障的FITC-dextran渗透率（P < 0.0001），提高ZO-1（P < 0.01）和Occludin（P < 0.01）的表达及稳定其在Caco2细胞中的分布。  结论  丁酸可以减轻TNFα所致的肠上皮屏障损伤，为进一步明确丁酸在溃疡性结肠炎治疗中作用机制提供实验基础。
Corilagin对OX-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用及对MyD88信号通路表达的影响
陶代菊, 陈鹏, 李雨晴, 陈临宜, 杨仁华, 何波, 沈志强
2023, 44(10): 18-25. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231019
摘要(2250) HTML (1089) PDF (55)
摘要:
  目的  探讨不同浓度和时间的柯里拉京（Corilagin）处理对氧化性低密度脂蛋白（oxidative low-density lipoprotein，ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）损伤的保护作用，以及其对MyD88信号通路表达调控的影响。  方法  体外培养HUVECs复制ox-LDL诱导损伤模型，利用形态学及免疫学方法鉴定HUVECs细胞，MTT法确定复制ox-LDL损伤HUVECs模型的最佳条件，根据不同处理将细胞分为正常组（Normal）、模型组（Model）、Corilagin（3.125、6.25、12.5、25、50 µmol/L）组、阳性对照（VE 10 µmol/L、Simvastain 1 µmol/L）组。观察Corilagin对ox-LDL诱导损伤的HUVECs保护作用；Western blot和RT-qPCR 方法检测HUVECs细胞中MyD88、P65、TNF-α、MCP-1表达变化。  结果  经形态学及免疫学方法鉴定，所培养细胞为HUVECs；70 mg/L的ox-LDL刺激12 h是复制ox-LDL损伤HUVECs模型的最佳条件；MTT结果显示，与ox-LDL组比较，Corilagin组细胞活力明显升高（P < 0.01）；RT-qPCR和Western blot结果表明，与Normal组比，ox-LDL组MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达升高（P < 0.01）；与ox-LDL组比较，Corilagin组及阳性对照组的MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达降低（P < 0.01），且Corilagin组呈现剂量依赖下调MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达。  结论  随着时间和浓度的增加，Corilagin能明显提高ox-LDL诱导损伤的HUVECs细胞活力，其保护作用与抑制MyD88信号通路有关。
运动康复对心肌梗死大鼠心脏纤维化及心功能的影响
吴长勇, 王睿, 保苏丽, 李锐洁, 孙煌, 叶雨佳, 徐菲, 彭云珠
2023, 44(10): 26-32. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231004
摘要(2110) HTML (1144) PDF (51)
摘要:
  目的   探究运动康复对心肌梗死大鼠心脏纤维化及心功能的影响。  方法   24只雄性SD大鼠随机分为4组：心肌梗死运动组（MI-E组）、心肌梗死不运动组（MI-Sed组）、假手术运动组（Sham-E组）、假手术不运动组（Sham-Sed组），每组5～7只。采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）制备心肌梗死模型，而假手术组只穿针不结扎。术后1周开始运动训练，包括适应性运动1周和正式运动4周，而不运动组全程不参加运动训练。运动结束后行超声心动图检查，HE、Masson和Tunel染色，以及透射电镜检测。  结果   与Sham组比较，MI组左心室室壁变薄及收缩功能降低，以MI-Sed组明显（P < 0.05）；而MI-E组与MI-Sed组比较，LVESD、LVEF和FS有所改善（P < 0.05）；Sham-E组与Sham-Sed组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。HE染色显示与Sham组比较，MI组心肌细胞呈现不同程度溶解，伴炎性细胞浸润，成纤维细胞增生，而MI-E组损伤较轻。Masson染色显示MI组较Sham组心肌细胞排列紊乱，心肌纤维化明显增加，而MI-E组与MI-Sed组、Sham-E组与Sham-Sed组相比较，胶原容积分数（CVF%）降低（P < 0.05）。Tunel染色显示MI组较Sham组心肌细胞凋亡数增多，而MI-E组与MI-Sed组、Sham-E组与Sham-Sed组相比较，心肌细胞凋亡指数降低（P < 0.05）。透射电镜显示MI组较Sham组心肌细胞及线粒体损伤严重，肌纤维疏松紊乱，而MI-E组较MI-Sed组心肌细胞损伤较轻，线粒体结构较完整，自噬小体形成较多。  结论   运动康复可减少MI大鼠的心肌细胞损伤和细胞凋亡，减少心肌梗死面积，改善心肌纤维化及心功能；运动可适度诱导自噬水平发挥心脏保护作用。
针刀疗法对神经痛大鼠的镇痛作用研究
刘亚南, 杨双, 彭煜航, 陈静, 徐世莲
2023, 44(10): 33-38. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231009
摘要(2400) HTML (1112) PDF (26)
摘要:
  目的  研究针刀疗法对坐骨神经结扎所致神经痛大鼠的镇痛作用，为针刀治疗神经痛在临床的应用和推广提供实验依据。  方法  采用热板测痛仪（Hot-plate）测定伤害性热刺激诱发的大鼠后爪缩爪潜伏期（hindpaw withdrawal lantency，HWL）和压力测痛仪（Randal Selitto）测定压力刺激诱发的大鼠后爪缩爪阈值（hindpaw withdrawal threshold，HWT）作为判断痛阈的指标。左侧坐骨神经干部分结扎（chronic constriction injury，CCI）构建神经痛大鼠模型，将CCI大鼠随机分为模型组、对照组和针刀治疗组，测定各组大鼠的痛阈。CCI大鼠随机分为吗啡组（皮下注射吗啡10 mg/kg）和针刀治疗组（针刀干预），观察各组大鼠痛阈的改变。  结果  与结扎前比较，左侧坐骨神经结扎后10 d（HWL：P左 < 0.01，P右 < 0.01；HWT：P左 < 0.001，P右 < 0.001）、20 d（HWL：P左 < 0.001，P右 < 0.001；HWT：P左 < 0.001，P右 < 0.001）和30 d（HWL：P左 < 0.001，P右 < 0.05；HWT：P左 < 0.001，P右 < 0.001）引起大鼠双侧HWL和HWT 均减小。与对照组比较，针刀组大鼠的HWL（P左 < 0.001；P右 < 0.001）和HWT（P左 < 0.001；P右 < 0.001）均显著延长；与模型组比较，针刀组大鼠的HWL（P左 < 0.001；P右 < 0.001）和HWT（P左 < 0.001；P右 < 0.001）也显著延长。而模型组与对照组比较则差异无统计学意义（P > 0.05）。与吗啡组比较，针刀组对神经痛的镇痛作用稳定，且持续时间长，而皮下注射吗啡组在注射后20～180 min时，镇痛作用显著，但随着时间的延长，其镇痛作用也随之减弱甚至消失。  结论  针刀干预对CCI大鼠具有明显的镇痛作用；与吗啡镇痛作用比较，针刀治疗神经痛的作用稳定且持久。
美洲大蠊提取物对肝癌皮下移植瘤裸鼠自噬和侵袭转移的影响
张雪莎, 周杰, 李彩琳, 吴定宇, 彭芳
2023, 44(10): 39-46. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231018
摘要(2351) HTML (1151) PDF (20)
摘要:
  目的  研究美洲大蠊提取物CII-3和脱脂膏对肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU自噬和侵袭转移的影响以及初步的作用机制。  方法  对接种肝癌敏感细胞BEL-7402和肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的移植瘤裸鼠，通过索拉菲尼、CII-3和脱脂膏药物处理后，观察给药后裸鼠血清生化指标，裸鼠瘤块变化和心、肝、肾、脾等脏器指数的变化，以及肝脏和瘤块病理学改变，同时观察肿瘤组织细胞中的自噬相关因子和侵袭转移相关因子的变化。  结果  CII-3和脱脂膏能使裸鼠体重呈下降趋势，并抑制肿瘤的生长，明显减轻瘤重（P < 0.01）；CII-3能提高脾脏指数和心脏指数（P < 0.05）；与耐药组相比，CII-3组裸鼠血清CR有升高趋势（P < 0.05）；索拉菲尼和CII-3处理组能诱导肿瘤组织坏死，作用优于脱脂膏组；与耐药组相比，除AKT外（P > 0.05），CII-3和脱脂膏给药组均能明显抑制自噬和侵袭转移相关因子（P < 0.05）。  结论  美洲大蠊提取物CII-3和脱脂膏均能抑制肝癌耐药细胞的自噬和侵袭转移，同时具有较好的抑瘤作用。其对裸鼠肝癌移植瘤的肝肾损伤有待进一步观察。
hsa-let-7a-5p调控牙周膜干细胞增殖及凋亡
张晔琳, 马丽娅, 彭旭晖, 杨禾丰, 佘睿
2023, 44(10): 47-54. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231028
摘要(1807) HTML (994) PDF (23)
摘要:
  目的  探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）增殖及凋亡的影响。  方法  将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs，通过RT-qPCR测定转染效率，通过CCK-8、细胞周期、EdU实验检测let-7a-5p对PDLSCs增殖的影响，通过细胞凋亡实验检测PDLSCs的凋亡率。  结果  let-7a-5p成功转染进入PDLSCs。let-7a-5p mimics可抑制PDLSCs增殖能力（P < 0.05），促进PDLSCs凋亡（P < 0.01）。let-7a-5p inhibitor可促进PDLSCs增殖能力（P < 0.05），抑制PDLSCs凋亡（P < 0.01）。  结论  hsa-let-7a-5p可抑制PDLSCs增殖，促进PDLSCs凋亡。
鳜miR-25的时空表达特征及其靶向核心生物钟基因的预测分析
周仪, 米鍇, 冯晓丽
2023, 44(10): 55-59. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231010
摘要(1746) HTML (1129) PDF (21)
摘要:
  目的   研究miR-25在鳜的时空表达特征，预测其靶向核心生物钟基因，对其可能存在的生物学意义进行探讨。  方法   采用实时荧光定量PCR分析miR-25在鳜各组织以及不同阶段胚胎中的表达特征，并利用TargetScan对其靶向核心生物钟基因进行预测分析。  结果   miR-25在鳜红肌和心肌中的表达量较高（P < 0.05），而在鳜脾、肾、肠以及肝中的表达量较低，且这4个组织中的表达量，差异无统计学意义（P > 0.05）；miR-25在鳜胚胎的2细胞期表达量较高（P < 0.05），随着胚胎发育，其表达水平逐渐降低。靶基因预测结果显示，节律基因Arntl2、Nr1d2b mRNA的3’UTR区域存在miR-25的靶位点。  结论   miR-25在胚胎发育过程中呈母源性表达，并且可能在鳜红肌和心肌中具有重要的调控意义，此外miR-25可能通过靶向调节Arntl2、Nr1d2b的表达来调控鳜生物节律，为后续研究miR-25的生理作用以及调控昼夜节律从而预防相关疾病提供参考依据。
二甲双胍通过AMPK/PPAR-γ通路诱导自噬抑制高糖对血管平滑肌细胞的增殖作用
张紫微, 郑甲林, 许晓宇, 王红
2023, 44(10): 60-66. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231026
摘要(1844) HTML (1212) PDF (24)
摘要:
  目的  探讨二甲双胍（Metformin）对高糖培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMCs）自噬、细胞增殖的影响及其调控机制。   方法  用Western blot检测不同处理组微管相关蛋白轻链-3-Ⅱ（LC3-Ⅱ），Becline-1蛋白水平变化，透射电镜观察各处理组VSMCs自噬小体水平；用Western blot检测不同处理组p-AMPK/AMPK、PPAR-γ蛋白表达水平；用EDU法检测不同处理组VSMCs增殖情况。  结果  二甲双胍、雷帕霉素逆转高糖抑制VSMCs自噬的作用（P < 0.001）；Compound C、GW9662增加高糖抑制VSMCs自噬的作用（P < 0.05）；二甲双胍逆转高糖对AMPK/PPAR-γ通路的负调控（P < 0.01）；二甲双胍、雷帕霉素抑制高糖促进的VSMCs增殖（P < 0.001），Compound C、GW9662逆转二甲双胍抑制高糖促VSMCs增殖的作用（P < 0.05）。  结论  高糖促进VSMCs增殖可能是自噬调节相关的，二甲双胍可通过激活AMPK/PPAR-γ通路上调VSMCs自噬水平，抑制高糖促进的VSMCs异常增殖。
EZH2抑制剂与膀胱癌GC化疗药物联用增敏的作用研究
谢峻, 刘绍有, 施鸿金, 毛秋玉, 杨宏
2023, 44(10): 67-76. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231017
摘要(1622) HTML (1129) PDF (20)
摘要:
  目的   探究多梳蛋白zeste基因増强子类同源物2（histone methyltransferase enhancer of Zeke 2，EZH2）抑制剂对膀胱癌治疗中吉西他滨联合顺铂（gemcitabine and cisplatin，GC）化疗方案中的增敏作用。   方法   首先构建 EZH2 siRNA敲低系，然后使用qPCR与WB检测验证siRNA在膀胱癌UCC细胞中的表达水平。根据不同的处理分为对照组（膀胱癌T24细胞正常培养）、GC化疗组（T24细胞+GC化疗药物）、si EZH2转染组（T24细胞+si EZH2转染+GC化疗药物）、GSK126抑制剂组（T24细胞+GSK126 5 μM+GC化疗药物）、UNC1999抑制剂组（T24细胞+UNC1999 5 μM+GC化疗药物）、EI1抑制剂组（T24细胞+ EI1 5 μM+GC化疗药物）、DZNep1抑制剂（T24细胞+DZNep1 5 μM+GC化疗药物）与EPZ005687抑制剂（T24细胞+EPZ005687 5 μM+GC化疗药物），采用CCK-8、平板克隆形成与Annexin/PI等实验分别检测8组细胞增殖率、凋亡率及其对细胞周期影响。随后将30只BALB/C雌裸鼠随机分为对照组（膀胱癌T24细胞正常培养）、T24细胞+ EZH2抑制剂的溶媒缓冲液组、T24细胞+GC化疗组、T24细胞+UNC1999 EZH2抑制剂组与T24细胞+ UNC1999 EZH2抑制剂+GC化疗组，每组6只。裸鼠成瘤实验检测转染后各组UCC细胞移植瘤的生长情况，免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和EZH2的表达，血常规检测白细胞、红细胞及血小板数量裸鼠骨髓抑制情况。   结果   在已转染了siRNA质粒的T24细胞中，siEZH2-1与siEZH2-2在siRNA与蛋白表达水平上与对照组的差异有统计学意义（P < 0.01）。在细胞实验中，与对照组相比，上述7组实验组通过CCK-8、平板克隆与Annexin V/PI双染、Pi单染实验发现EZH2抑制剂可以抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力，早期凋亡细胞比例上调（ P < 0.01）。其中在平板克隆实验中，实验组T24细胞+EPZ005687 5 μM+GC化疗药物组细胞克隆数与对照组相比，差异有统计学意义（ P < 0.05）。小鼠体内实验表明，与对照组相比，经GC化疗药物或EZH2抑制剂的裸鼠瘤体重量减少（ P < 0.05），并且在血常规检测中血细胞含量也有所增高。   结论   EZH2抑制剂能够提高膀胱癌GC化疗方案的敏感性，从而降低膀胱癌细胞的增殖、迁移与裸鼠体内移植瘤的生长。同时，联合用药也能够显著减少其骨髓抑制情况。提示协同治疗在膀胱癌化疗增敏中具有一定的作用。
双歧杆菌三联活菌对小鼠非酒精性脂肪肝模型中肠道微生物组的影响
李春, 周琼, 梅聪, 黄洁杰, 王毅鹏, 周松兰, 郑倩, 唐哲
2023, 44(10): 77-82. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231022
摘要(1699) HTML (1032) PDF (31)
摘要:
  目的   探究双歧杆菌三联活菌在小鼠NAFLD模型中的疗效和对肠道微生物组的影响。  方法  使用C57BL/6J小鼠分为3个实验组别，对照组（n = 10）：小鼠使用普通饮食饲养；NAFLD模型组（n = 10）：使用高脂饮食饲养；双歧杆菌组（n = 10）：使用NAFLD模型小鼠并给予双歧杆菌三联活菌治疗。在实验结束时间点对不同组小鼠肝脏石蜡切片进行HE染色观察病理变化。采用16S rRNA基因测序技术完成对各组小鼠肠道菌群的检测，并进行生物信息学分析。  结果  与对照组相比，NAFLD小鼠肝脏脂肪累积增加，脂滴增多，细胞肥大，并且血清谷丙转氨酶（ALT）水平增加（P < 0.0001）；经双歧杆菌治疗后，NAFLD小鼠肝脏脂肪积累减少并且血清ALT水平降低（P < 0.0001）。肠道微生物群分析在3个组别中鉴定出共有菌种348种。微生物功能分析显示，双歧杆菌组肠道微生物代谢功能水平介于对照组和NAFLD组之间；双歧杆菌治疗能改变NAFLD模型中特定肠道微生物的丰度变化，并且这些肠道微生物可能参与了谷胱甘肽代谢、嘌呤代谢和鞘脂代谢等途径调节机体的代谢功能。  结论  双歧杆菌三联活菌在小鼠模型中可能通过调节肠道微生物组的功能改善NAFLD，并且双歧杆菌三联活菌有改善机体脂代谢紊乱的潜力。
miR-196b靶向ERG促进肺腺癌的增殖和迁移
刘邦卿, 李剑锋, 刘晓辉, 张劲男, 梁金屏
2023, 44(10): 83-91. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231023
摘要(2457) HTML (1056) PDF (17)
摘要:
  目的   探究miR-196b影响肺腺癌（lung adenocarcinoma，LUAD）进展的机制。   方法   通过TCGA数据库分析miR-196b在LUAD组织中的表达水平，利用TargetScan预测其下游靶基因并用双荧光素酶实验进行验证，qRT-PCR检测miR-196b和ETS相关基因（ETS-related gene，ERG）在LUAD细胞系中的表达情况，MTT、划痕愈合和Transwell实验分别检测不同处理后LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况。   结果   miR-196b在LUAD中高表达（P = 3.50e-17）并靶向负调控ERG，过表达miR-196b能够促进LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭（P < 0.05），回复实验证实miR-196b/ERG调控轴能够影响LUAD细胞增殖、迁移和侵袭（ P < 0.05）。   结论   miR-196b靶向ERG促进LUAD进展的分子机制，对开发LUAD新的临床治疗方法具有潜在意义。
扁塑藤素通过调节自噬对口腔鳞状细胞癌细胞CAL-27增殖的影响
杨诗媛, 张昊, 胡图强
2023, 44(10): 92-99. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231024
摘要(1653) HTML (992) PDF (19)
摘要:
  目的  探讨扁塑藤素对人口腔鳞状细胞癌细胞CAL-27增殖能力的影响及其相关作用机制。  方法  CCK8检测不同浓度的扁塑藤素处理CAL-27细胞后的增殖生物活性，计算不同作用时间段所对应的药物浓度水平（IC50）；细胞集落形成实验检测CAL-27细胞克隆形成能力；蛋白质印迹法检测细胞增殖指标PCNA以及相关自噬通量BECLIN1、LC3B-II、LC3B-I蛋白表达水平；扁塑藤素联合自噬激动剂雷帕霉素（RAPA）处理CAL-27细胞，蛋白质印迹法检测PCNA以及相关自噬通量BECLIN1、LC3B-II、LC3B-I蛋白表达水平。  结果  较于空白组，各浓度梯度的扁塑藤素可抑制CAL-27细胞活力（P < 0.05），具有浓度-时间依耐性；相较于空白组，经扁塑藤素处理后细胞中PCNA、BECLIN1、LC3B-II/LC3B-I蛋白表达水平都出现明显上调（P < 0.05）；扁塑藤素联合自噬激活剂雷帕霉素（RAPA）处理CAL-27细胞相较于仅使用扁塑藤素组细胞活性有所增强（P < 0.05），PCNA、BECLIN1、LC3B-II/LC3B-I蛋白的表达水平均出现明显上调（P < 0.05）。  结论  扁塑藤素在体外能够比较显著抑制口腔鳞状癌系CAL-27细胞的增殖，这可能与其下调自噬相关基因BECLIN1、LC3B-II、LC3B-I的表达相关。
云南省8个世居少数民族青年抑郁症状检出情况及影响因素研究
杨亚玲, 李小菊, 张亚访, 王辛平, 黄源, 邵维庆, 邓睿
2023, 44(10): 100-106. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231011
摘要(2253) HTML (1215) PDF (24)
摘要:
  目的   了解云南省少数民族青年抑郁症状发生情况及其影响因素，为不同民族青年群体的心理健康促进提供依据。   方法  采取分层随机抽样，运用9项患者健康问卷，对云南省3个州（市）8个世居少数民族的15～44岁青年进行调查。   结果  在纳入分析的1145名少数民族青年中，抑郁症状检出率为17.29%，经性别标化后，佤族（14.18%）和怒族（11.04%）抑郁症状检出率较高。睡眠障碍是5个少数民族出现抑郁症状的共有危险因素（P < 0.05）；基诺族女性出现抑郁症状的可能性是男性的9.245倍（95%CI：1.062～54.002）；傈僳族的慢性病患者出现抑郁症状的可能性是未患病者的5.796倍（95%CI：1.684～19.944）（P < 0.01）。   结论  云南省8个世居少数民族青年的抑郁症状发生情况和影响因素存在民族差异，未来宜针对不同民族的特有情况精准施策。
基于82782例人群的年龄、疾病与血压相关性的调查分析
张伟强, 雒方, 朱春华, 唐德志
2023, 44(10): 107-113. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231003
摘要(1862) HTML (1136) PDF (36)
摘要:
  目的   探究年龄和疾病与血压的相关性。   方法   采用回顾性研究，将2016年1月到2022年6月在上海沪东医院体检科体检并符合相关标准的82 782例人群纳入研究。按照10岁为1个年龄阶段分组，分为≤20岁组，21～30岁组，31～40岁组，41～50岁组，51～60岁组，61～70岁组，71～80岁组和≥81岁组，比较各组的收缩压和舒张压水平；采用Pearson双变量相关方法，分析BMI与收缩压和舒张压的相关性；再次筛选数据，根据体检结果归类，体检人群分为对照组和疾病组，应用Logistic分析高血压发生与疾病因素的相关性。   结果   收缩压随着衰老发生具有不断增高的趋势，到61～70岁组之前，后1个年龄段组人群的收缩压水平一直高于之前年龄段组（P < 0.01）。舒张压随着年龄增加也具有增加的趋势，51～60岁之间舒张压最高，之后则显著降低。Logistic分析结果显示校正年龄和BMI因素后，代谢综合征对单纯收缩压的影响，差异有统计学意义（ OR = 1.068，P = 0.042）；代谢综合征对收缩压和舒张压均升高的高血压影响，差异具有统计学意义（OR = 1.032，P = 0.038）。   结论   血压变化具有年龄特异性，收缩压随着衰老发生具有不断增高的趋势，舒张压则在51～60岁之间达到最高值，之后不断降低；代谢综合征与高血压的发生具有关联。
云南地区宫颈癌癌前病变患者HPV 56的分子流行病学调查
周紫云, 王莹莹, 严志凌, 赵凌锋, 杨希, 许金美, 张芍
2023, 44(10): 114-121. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231005
摘要(1570) HTML (1174) PDF (19)
摘要:
  目的  研究单一感染HPV56型的癌前病变患者中HPV56 E6、E7和L1基因变异特征，获取云南地区宫颈癌癌前病变患者中HPV56型分子流行病学数据。  方法  随机选取300例宫颈癌癌前病变患者，通过HPV分型试剂盒对患者感染HPV的型别进行检测，并对HPV56型感染患者中HPV E6 E7和L1基因进行测序，最后完成对研究对象所感染的HPV56的谱系分布及HPV56 E6、E7和L1基因的遗传变异进行分析。  结果  研究对象所感染的HPV56病毒主要为A谱系，90%以上为A谱系，约10%为B谱系，HPV56 E6、E7、L1基因中共存在13个变异位点，其中E6基因中6个、E7基因中4个、L1基因中3个。HPV56 E6基因的6个变异位点中有2个为同义突变（T158C（S19S）、G437A（P112P）），4个为非同义突变（A141C（S14R）、A241G（N47S）、A263C（K54N）、G279A（D60N））。HPV56 E7基因的4个变异位点中均为非同义突变（C601A（D10E）、G605A（V12I）、G770C（E67Q）、G802C（Q77H））。HPV56 L1基因的3个变异位点中有2个为同义突变（G6454T（P321P）、A6868C（I459I）），1个为非同义突变（A5867G（N126D））。  结论  初步获得了云南地区宫颈癌癌前病变患者中HPV56 E6、E7和L1基因变异情况，获得了HPV56 E6、E7和L1基因的分子流行学特征，为进一步分析云南地区宫颈癌癌前病变患者中HPV56 E6、E7和L1基因的分子流行病学特征提供了必要的数据。
高原脱适应人群外周血淋巴细胞亚群的变化
张立群, 柴敏东, 潘志强, 郑艳芬, 赵坤, 赵鑫, 张琳, 张宁平
2023, 44(10): 122-128. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231012
摘要(1696) HTML (1066) PDF (13)
摘要:
  目的  了解移居高原低氧环境人群返回中海拔地区后外周血淋巴细胞亚群的变化，探讨高原脱适应对健康人免疫功能的影响。  方法  采用流式细胞术检测47例高原人员返回中海拔地区15 d内淋巴细胞亚群的变化。  结果  高原居住时间≥1 a的人员在返回中海拔地区第1天比高原居住时间 < 1 a的人员CD3+T细胞更低、B细胞更高（P < 0.05）；高原居住时间≥1 a的人员在返回中海拔地区第15天比高原居住时间 < 1 a的人员B淋巴细胞更高（P < 0.01）。高原人群返回中海拔地区15 d外周血T淋巴细胞亚群中CD8+T细胞百分含量升高（P < 0.05），CD4+T细胞比CD8+T细胞比率下降（P < 0.05）；自然杀伤（natural killer，NK）细胞百分含量升高（P < 0.05）；细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer ，CIK）细胞百分含量升高（P < 0.01）；CD3+T细胞、CD4+T细胞和B细胞差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  高原脱适应人群外周血淋巴细胞亚群与年龄、海拔及高原居住时间的分析提示高原居住时长会影响机体脱适应期的细胞免疫和体液免疫。高原脱适应期人外周血CD8+T淋巴细胞、NK细胞及CIK细胞百分含量上升，提示高原脱适应主要通过作用细胞免疫和非特异性免疫过程影响机体免疫功能。
6～36月龄幼儿屈光发育状况及影响因素分析
张扬, 茶健美, 李碧桃, 喻璨, 宋璐
2023, 44(10): 129-133. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231001
摘要(2065) HTML (1067) PDF (18)
摘要:
  目的  调查6～36月龄幼儿屈光发育的基本状况，并分析相关影响因素。  方法  挑选6～36月龄562名儿童，采用手持式全自动视力筛查仪对双眼进行非睫状肌麻痹下屈光度检测，获得并比较各年龄段的屈光度及屈光异常患病率。根据问卷调查表用Logistic回归分析屈光发育的影响因素。  结果  平均SE为 0.38（0，0.63）D，DS为 0.75（0.5，1.13）D，DC为 0.75（0.5，1.28）D。其中SE、DS、DC男孩女孩之间，差异均无统计学意义（P > 0.05），DS、DC在左右眼差异有统计学意义（P < 0.05），而SE左右眼差异无统计学意义（P > 0.05）。6～36月龄幼儿屈光状态以远视为主，其中屈光正常者占38.97%，屈光异常者占61.03%（近视前期占42.70%，散光占20.64%，远视占3.91%，近视占1.25%）。不同年龄段的屈光度、屈光异常率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。Logistic回归分析早产是屈光异常的危险因素（P = 0.012，OR = 2.68，95% CI：1.24～5.79），户外活动是避免发生屈光异常的保护性因素（P = 0.008，OR = 0.83，95%CI：0.72～0.95），而其他因素并不构成屈光度的影响因素（P > 0.05）。  结论  6～36月龄幼儿屈光状态以远视为主，散光是主要的屈光异常类型，早产和户外活动是屈光发育的影响因素，屈光发育总体受遗传和环境因素影响较小。近视前期人群要警惕近视低龄化的发生。
临床研究
基于卷积神经网络在卵巢肿瘤良恶性鉴别诊断中的研究
杨志新, 赵丽珠, 邓玥, 杨丽华
2023, 44(10): 134-139. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231027
摘要(1781) HTML (986) PDF (16)
摘要:
  目的  建立卷积神经网络卵巢肿瘤超声诊断模型，探讨其在卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值。  方法  收集2015年6月至2022年9月于昆明医科大学第二附属医院接受超声检查，并获得细胞学或组织病理证实的卵巢良性、恶性肿瘤超声图像各200张，共400张卵巢肿瘤超声图像。图像以1∶3的比例分为训练集和验证集。基于卷积神经网络构建训练并验证VGG16、MobileNet-V2 2个诊断模型，同时选取高年资、低年资2名超声医生进行训练集超声图像诊断，以病理结果为金标准，评估2个诊断模型和超声医生鉴别卵巢良恶性的效能。  结果  VGG16模型诊断卵巢肿瘤良恶性的灵敏度、特异度、准确度分别为80.67%，79.33%，80.00%；MobileNet-V2模型诊断卵巢肿瘤良恶性的灵敏度、特异度、准确度分别为89.33%，93.33%，91.33%；MobileNet-V2模型诊断效能最优，且MobileNet-V2、VGG16模型诊断效能均优于超声医生（P < 0.05）。  结论  卷积神经网络卵巢肿瘤诊断模型具有较好诊断价值，其中MobileNet-V2模型能准确地判断卵巢肿瘤超声图像的良恶性。
妊娠期糖尿病与正常足月儿母亲胎盘菌群DNA的差异
阳情姚, 曾洁, 张卫权, 宁月, 李檬, 李湛华, 刘梅, 熊晶晶, 黄永坤
2023, 44(10): 140-148. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231006
摘要(2300) HTML (1086) PDF (11)
摘要:
  目的  探讨妊娠期糖尿病与正常足月儿母亲胎盘菌群DNA的差异，为今后深入研究提供参考数据。  方法   采集2018年2至9月在昆明医科大学第一附属医院产科分娩的足月儿母亲胎盘组织共30例，按是否伴有妊娠期糖尿病分为妊娠期糖尿病组（A组）与正常足月儿组（B组），通过Illumina MiSeq测序系统对胎盘组织中的细菌DNA进行测序后进行分析，比较2组胎盘菌群DNA的差异。  结果   所测定胎盘组织中都有以变形菌门、放线菌门、厚壁菌门、拟杆菌门等菌门为主的菌群DNA。采用LEfSe分析得出2组胎盘菌群DNA在门、纲水平上差异无统计学意义（P > 0.05），属水平上，丙酸杆菌属、栖热菌属、柯林斯菌属、梭状芽胞杆属IV、另枝菌属、厌氧菌属的相对丰度在妊娠期糖尿病组中显著升高（LDA > 2）。  结论   胎盘组织中可以检测到一定量的细菌DNA，母亲妊娠期糖尿病与正常足月儿其母亲胎盘菌群DNA的组成和丰度存在差异，这种差异可能影响妊娠期糖尿病的发生及预后，值得深入研究。
上下颌轻中度拥挤下iTero Element 1口扫数字化模型的准确性
肖倩, 周锟, 王蕾, 高俊, 陈俊润, 任娅岚
2023, 44(10): 149-154. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231025
摘要(1850) HTML (1046) PDF (27)
摘要:
  目的  评估轻中度拥挤下采用iTero Element 1口内扫描仪获得的数字化模型和传统石膏模型测量数据的准确性。  方法  选取到昆明医科大学附属口腔医院前兴路门诊部就诊的37名患者，使用iTero Element 1口内扫描仪扫描获得数字化模型和藻酸盐取模获得同一患者传统石膏模型，比较数字化模型自动测量和传统石膏模型人工测量牙冠宽度、牙弓宽度、覆盖的差异。  结果  数字化模型和石膏模型的3次重复测量一致性检验ICC值均在0.9以上，均具有良好的可重复性。轻度拥挤组11、16、21、31、36、41、43、46牙冠宽度、14～24牙弓宽度、22覆盖，中度拥挤组11、23、16、31牙冠宽度、14～24牙弓宽度、11、12覆盖差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  iTero数字化模型在轻中度拥挤时部分数据与手工测量石膏模型存在一定差异，可能是由于牙齿排列不齐，导致测量误差，但测量数据差异较小，不影响iTero数字化模型在临床中的应用。
昆明地区357例Gilbert综合征基因变异谱分析
何建萍, 吕梦欣, 秦茂华, 朱丽虹, 党峰博, 孙永波, 罗胜军, 罗兰, 唐健
2023, 44(10): 155-160. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231015
摘要(1833) HTML (1193) PDF (27)
摘要:
  目的   探讨昆明地区Gilbert综合征基因变异谱情况，为该疾病机制研究提供基础数据。   方法   应用高通量测序技术与生物信息学研究方法，对昆明地区357例Gilbert综合征患儿基因变异谱进行分析。   结果   在357例Gilbert综合征患儿中检出UGT1A1基因纯合变异82例，其中c.211G > A纯合变异占93.9%；c.1091C > T纯合变异占3.7%；c.1198A > C纯合变异占2.4%。检出 UGT1A1基因杂合变异275例，其中c.211G > A杂合变异占69.1%；c.1091C > T杂合变异占17.8%；c.1456T > G杂合变异占5.5%；c.1198A > C杂合变异占2.5%；c.1352C > T占1.1%；c.596C > G杂合变异占1.1%；c.1423C > T杂合变异占0.7%；c.1100G > A、c.1389G > C、c.610A > G、c.163C > T、c.715C > T、c.1021C > T杂合变异各占0.4%。   结论   昆明地区Gilbert综合征基因变异谱前3顺位为c.211G > A、c.1091C > T、c.1456T > G，与云南边境地区有所不同。为昆明地区非结合高胆红素血症疾病的诊断、预防及治疗提供了重要的参考依据，同时也为进一步探索非结合高胆红素血症的疾病发生机制提供了基础数据。
法医学研究
TMTC1基因多态性与精神分裂症的关联性
程甜甜, 尹文卅, 王佳, 卢玉梅, 陈炫羽, 聂胜洁, 刘林林
2023, 44(10): 161-167. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231014
摘要(1878) HTML (1296) PDF (24)
摘要:
  目的  探讨TMTC1基因单核苷酸多态性与精神分裂症的相关性。   方法  共纳入207例精神分裂症患者和186例健康对照。采用SNPscan TM多重SNP分型技术，对TMTC1基因7个SNP位点进行基因分型检测，比较等位基因、基因型和单倍型之间的差异，并分析在不同的遗传模式下SNP位点与精神分裂症易感性的相关性。  结果  7个SNP位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡；7个位点的等位基因频率和基因型频率分布在2组间差异无统计学意义（P > 0.05）。不同遗传模式下7个SNP位点多态性均与精神分裂症发病风险无关（P > 0.05）；但rs10332与rs16934358、rs10332与rs2023588、rs16934358与rs2023588、rs16934358与rs7503之间存在高度连锁不平衡。  结论  TMTC1基因rs7503、rs10332、rs2023588、rs16934358、rs2113879、rs679087、rs4931240位点多态性与精神分裂症无关，需要扩大样本量和筛选新的SNP位点进一步分析。
综述
骨修复材料促成骨作用的分子机制
徐云容, 唐梓闻, 何飞
2023, 44(10): 168-179. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231007
摘要(2444) HTML (2852) PDF (129)
摘要:
MAPK、PI3K/AKT、AMPK、TGF-β超家族、Wnt、Hippo、NF-κB、Notch、JAK/STAT、Hedgehog、整合素、OPG/RANKL/RANK、HIF等信号通路都与成骨分化相关，在骨修复材料促进成骨的过程中发挥着一定的调控作用，金属材料、无机材料、有机高分子材料和复合材料等骨修复材料可以通过激活一条或多条成骨相关信号通路促进骨组织再生。进一步了解骨修复材料促进成骨作用的相关分子机制将有助于骨修复材料更广泛地应用于骨组织工程和付诸临床实践，但目前关于骨修复材料促进成骨作用的具体分子机制还未彻底阐述清晰，未来仍需进一步研究。简要介绍现今与成骨分化相关的信号通路，综述骨修复材料在多种信号通路中的研究，为骨修复材料促成骨机制的深入研究提供借鉴。
三阳性乳腺癌的强化辅助治疗方案选择
李晨希, 查卓岑, 李娜, 罗琳, 杨扬, 陈文林
2023, 44(10): 180-188. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231020
摘要(1807) HTML (1440) PDF (41)
摘要:
三阳性乳腺癌（triple-positive breast cancer，TPBC）是以激素受体（hormonereceptor，HR）阳性（HR+）和人类表皮生长因子受体（humanepidermalgrowthfactorreceptor 2，HER2）阳性（HER2+）共表达的一类特殊类型的乳腺癌。因其同时受HR信号通路和HER2信号通路共同调控影响，TPBC的治疗策略选择一直是临床关注的热点。TPBC患者强化辅助治疗选择不一，序贯、联合，内分泌治疗和靶向治疗如何精准的谋局落子，尚缺少系统性理论的支持。综述查阅了PUBMED、美国临床试验数据库（ClinicalTrials.gov）、知网等，梳理出近年来TPBC治疗方面的11项随机对照试验结果，为TPBC的辅助强化治疗策略的选择提供临床参考依据。
抗菌肽作为免疫调节剂治疗细菌感染的潜力
梁国柱, 阮诗媚, 何艳梅, 杨海龙
2023, 44(10): 189-195. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231013
摘要(2262) HTML (1131) PDF (56)
摘要:
自1928年青霉素被用于治疗细菌感染性疾病以来，抗生素拯救了无数患者的生命。然而，随着细菌抗药性的增加，细菌感染性疾病的临床治疗变得愈发困难。抗菌肽因其功能广泛且毒副作用低等特点，被认为是理想的传统抗生素替代品。其中，一些具有免疫调节功能的抗菌肽能够调节机体自身的固有免疫和获得性免疫反应，直接靶向机体免疫系统而非病原微生物，从而避免对病原微生物的选择压力，不易产生耐药性，在抗感染治疗方面具有广阔的应用价值。将从抗菌肽的免疫调节活性、临床治疗中的应用潜力以及局限性等方面进行概述，为新型抗生素的开发利用提供新的视野。
教学研究
RBL教学法对医学研究生批判性思维的影响
冯蕊, 徐世莲, 杨海龙, 杨哲, 杨媛, 李凡, 张筱敏
2023, 44(10): 196-201. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231008
摘要(1692) HTML (1140) PDF (35)
摘要:
  目的  评价基于研究的学习（research based learning ，RBL）这一新的教学法对医学研究生批判性思维能力的影响，以提高医学专业研究生批判性思维能力。  方法  330名医学专业研究生参与研究，分为2组。其中实验组（n = 165）采用RBL教学方式的《科研基本素质培养》课程学习；对照组（n = 165）学生未参与该课程的学习。之后，利用批判性思维能力问卷评价2组学生批判性思维能力的差异。  结果  实验组批判性思维总分高于对照组（P < 0.001），实验组在寻找真相、分析能力、批判性思维的自信心、求知欲、认知成熟度5个维度均高于对照组（P < 0.05）。  结论  RBL教学方式课可提高医学专业研究生批判性思维能力。
护理园地
肺脏超声动态监测在新生儿重症肺炎精准护理中的应用效果
尹丽娟, 宝凌云, 王芳, 袁媛
2023, 44(10): 202-206. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231002
摘要(2488) HTML (1198) PDF (16)
摘要:
  目的   探讨肺脏超声动态监测在新生儿重症肺炎肺实变精准化护理中的应用效果。   方法   选取昆明市儿童医院新生儿重症监护室（neonatal intensive care unit，NICU）科室诊断有重症肺炎的新生儿60例进行研究，以随机数字表法进行分组，分为对照组和实验组各30例，对照组按照新生儿常规护理进行护理，实验组在常规护理的基础上进行床旁超声的动态监测，并对超声发现的肺实变施以精准化的护理措施。观察2组患儿临床呼吸道症状消失的时间、危重症病例呼吸机撤机时间、平均住院日。   结果   在床旁超声动态监测下施以精准化护理措施的肺实变患儿在呼吸道症状消失时间、平均住院日、危重病例撤机时间均短于常规护理组 （P < 0.05）。   结论   肺脏超声能动态监测可以实时了解肺部病变的性质、大小、位置、病变的严重程度，对肺部病变部位施以精准化护理措施后，可以及时了解干预后的效果，并指导下一步护理措施，可以有效提升治疗的效果，操作简单，值得推广。

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