A（H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法的建立

赵晓南

A（H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法的建立

赵晓南

(云南省疾病预防控制中心,云南昆明 650022)

基金项目: ［基金项目］云南省应用基础研究计划青年项目（2013FD096）

计量
- 文章访问数: 3091
- HTML全文浏览量: 753
- PDF下载量: 437
- 被引次数: 0
出版历程
- 刊出日期: 2020-09-27

Establishment of Detection Method for R292K and N294S Mutation Sites in H3N2 Influenza A Virus with TaqMan-MGB Probes

Zhao Xiao Nan

(Yunnan Centers for Disease Control and Prevention,Kunming Yunnan 650022,China)

摘要

摘要: ［摘要］目的　建立A（H3N2）亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法．方法由NCBI获取的6株流感疫苗株及2012年～2015年本实验室分离的17株，共计23条A（H3N2）亚型毒株NA基因全序列．根据序列比对结果，特异性设计针对R292K和N294S突变位点的TaqMan-MGB探针及引物进行3重realtime RT-PCR检测方法．使用倍比稀释的方法检测其敏感性．并利用临床标本，其他亚型流感及其他常见呼吸道病毒验证该方法的特异性．结果　设计的TaqMan-MGB探针可以检测到107（1000 copies）稀释度的对应模板，使用其他亚型流感病毒与常见呼吸道病毒验证该引物无交叉反应．通过对57份日常监测分离毒株进行检测，未发现耐药位点突变株．结论　建立了A（H3N2）亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法；验证了该引物探针具有较高的敏感性与特异性，具有实际应用潜力．
- [关键词]H3N2 /
- 突变 /
- 实时荧光RT-PCR
Abstract: ［Abstract］Objective　To establish a detection method to R292K and N294S mutation sites in H3N2 influenza A virus with TaqMan-MGB probes. Method　NA gene sequences of 23 A（H3N2） influenza strains were acquired from NCBI database and lab isolations. According to sequence alignment results， specific TaqMan-MGB probes and primers were designed for R292K and N294S mutation sites in multiple realtime PCR method. The sensitivity was detected using the ten times dilution method. Clinical specimens， other subtypes of influenza and other common respiratory viruses were used to verify the specificity of the method．Results　The designed probes could detect 107 （1000 copies） dilution of the corresponding template. Other subtypes of influenza virus and common respiratory viruses showed no cross reaction. Through the detection of 57 strains isolated from annual survey， no drug resistance mutations were found. Conclusions　In this study，the A（H3N2） subtype influenza virus R292K and N294S mutation site TaqMan-MGB probe detection method bas been established. It is proved that the primer probe has high sensitivity and specificity with particular application potential.
- ［Key words］H3N2 subtype influenza virus；Mutation；Realtime RT-PCR /

HTML全文

参考文献(0)

相关文章(20)

[1]	郑喜, 马金珠, 李琴春, 高瑜, 潘颖, 宋贵波. Car-R/Ceph-S的铜绿假单胞菌OprD基因突变分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230121
[2]	张冉, 杨洁, 冯恩梓, 袁晓凤, 王清. 甲状腺乳头状癌基因突变与其侵袭性相关性研究, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230223
[3]	苟海梅, 方莉, 钟晓武. KRAS、NRAS及BRAF基因突变与结直肠癌肝转移的关系, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230106
[4]	胡滔, 吴怡, 耿文达, 章意坚, 贺瑄, 李珊珊, 习杨彦彬, 邓丽玲. 自主运动训练通过调节Caspase-3的活性抑制人BRCA1突变乳腺癌的增殖与生长, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230419
[5]	吴茂芳, 周永春, 蔡静静, 莫欣, 李瑛玮, 毛佳惠. 云南地区多结节肺腺癌EGFR突变及其临床意义, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220215
[6]	陈连勇, 茹浩浩, 杨星, 闫双群, 陈涛, 倪沁璇, 许琳. 云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220803
[7]	王娟, 苏国苗, 潘国庆, 边莉, 杨哲, 曾定涛. 云南地区非小细胞肺癌EGFR、ALK和ROS1基因突变联合检测, 昆明医科大学学报.
[8]	普冬, 李晓非, 余婷婷, 王红英, 张润武, 李丽华, 白经, 丁彩梅, 李冬玲, 杨永锐. 昆明地区慢性乙型肝炎患者替诺福韦酯耐药突变位点情况调查, 昆明医科大学学报.
[9]	钟敏, 李娅, 何增品, 张慧, 段勇. 昆明地区HIV/HCV共感染人群基因型耐药突变的特点, 昆明医科大学学报.
[10]	李晓琴, 周敏, 王霖, 曾海燕, 骆鹏举, 李颖, 冉丽权. 结核分枝杆菌利福平耐药突变基因检测与BD960药敏的对比, 昆明医科大学学报.
[11]	朱中山, 严文辉, 李小兵, 杨洲, 白鹏. 200例肺腺癌脑转移患者驱动基因突变情况及预后关系, 昆明医科大学学报.
[12]	李琦. 云南337名非综合征型聋患者CIB2基因196C>T, 272T>C和297C>G突变分析, 昆明医科大学学报.
[13]	钱璐, 边莉. 肺癌EGFR基因突变以及靶向药物耐药机制的研究进展, 昆明医科大学学报.
[14]	杜飞, 李榕, 何睿, 曾水芹, 段开文, 李承文. 实时定量PCR检测白色念珠菌方法学的建立, 昆明医科大学学报.
[15]	钟芳芳. 运用ARMS法检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变, 昆明医科大学学报.
[16]	马立宇. 云南白族人群13个快速突变（RM）Y-STR基因座多态性研究, 昆明医科大学学报.
[17]	高菊玲. RT-PA静脉溶栓治疗急性心机梗死临床分析, 昆明医科大学学报.
[18]	石柔. 云南地区2型糖尿病患者线粒体tRNALeu(UUR)3243A/G突变的筛查, 昆明医科大学学报.
[19]	周婷婷. 关于定量PCR技术中模板使用浓度的研究, 昆明医科大学学报.
[20]	吴云鼎. 实时定量PCR的数据归一化方法, 昆明医科大学学报.