趋化因子受体CX3CR1基因T280M多态性在云南彝族人群中的分布
趋化因子受体CX3CR1基因T280M多态性在云南彝族人群中的分布
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摘要:
目的 研究云南省晋宁县彝族人群CX3CR1基因T280M多态性分布的情况, 为探讨CX3CR1基因相关性疾病的发病机制奠定基础.方法 采用PCR-RFLP技术对居住在云南省晋宁县268例彝族健康个体的CX3CR1基因T280M多态性进行分析, 计算MM、MT、TT基因型频率和M、T等位基因频率, 与其他人群该位点多态性进行比较.结果 云南省晋宁县彝族CX3CR1基因的MM、MT、TT基因型频率分别为1.12%、11.94%和86.94%, M和T等位基因频率分别为7.09%和92.91%.与汉族、维吾尔族、希腊、法国、塞尔维亚、印度、意大利和高加索人群比较, 无论是基因型分布还是基因频率差异有统计学意义 (P<0.05) p="">0.05) .结论 CX3CR1基因T280M多态性分布存在民族、种族差异, 且种族间的差异大于民族间的差异.
Abstract:目的 研究云南省晋宁县彝族人群CX3CR1基因T280M多态性分布的情况, 为探讨CX3CR1基因相关性疾病的发病机制奠定基础.方法 采用PCR-RFLP技术对居住在云南省晋宁县268例彝族健康个体的CX3CR1基因T280M多态性进行分析, 计算MM、MT、TT基因型频率和M、T等位基因频率, 与其他人群该位点多态性进行比较.结果 云南省晋宁县彝族CX3CR1基因的MM、MT、TT基因型频率分别为1.12%、11.94%和86.94%, M和T等位基因频率分别为7.09%和92.91%.与汉族、维吾尔族、希腊、法国、塞尔维亚、印度、意大利和高加索人群比较, 无论是基因型分布还是基因频率差异有统计学意义 (P<0.05) p="">0.05) .结论 CX3CR1基因T280M多态性分布存在民族、种族差异, 且种族间的差异大于民族间的差异.
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Key words:
- CX3CR1 gene /
- Genetic polymorphism /
- Yi nationality /
- Distribution
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原发性干燥综合征（primary sjögren’s syndrome，pSS）是一种复杂的异质性自身免疫性疾病，主要累及女性。而抑郁是pSS的常见合并症，可能加重病情，影响患者生活质量[1]。多个研究发现，pSS可合并焦虑、抑郁障碍，且焦虑、抑郁的发病率高于类风湿关节炎患者[2-5]。
脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）属于神经营养蛋白家族，在中枢神经系统（central nervous system，CNS）和免疫系统（如单核细胞和B细胞）中均有表达[6-7]。BDNF首先以pre-proBDNF的形式存在，然后裂解为BDNF前体蛋白（proBDNF）。proBDNF在细胞内的弗林蛋白酶、转化酶 PCSK6 和 PC5-6B或细胞外的组织纤溶酶原激活物（Tissue Plasminogen Activator，tPA）、基质金属蛋白酶蛋白水解酶作用下形成BDNF成熟体蛋白（mature BDNF，mBDNF）。已有研究提示，proBDNF信号通路在免疫介导的炎症性疾病发病机制中也发挥重要作用[8-9]。我们之前的研究表明，血清proBDNF水平升高或mBDNF/proBDNF比值降低可能是抑郁症的标志物[10]。而proBDNF在pSS伴随抑郁症状的患者中发挥的作用研究不多，本研究就pSS患者血浆BDNF水平与抑郁症状的关系进行探讨。
1. 资料与方法
1.1 研究对象
本研究经昆明医科大学第一附属医院伦理委员会审批通过，招募了2022年1月至12月收住昆明医科大学第一附属医院风湿科（门诊和住院）、符合 2016 年美国风湿病协会pSS分类诊断标准[11]，且年龄在20～69岁的患者作为研究对象。排除当前或既往有甲状腺功能障碍、感染、慢性肝病、肾功能不全、代谢性骨病、严重心脑血管疾病和精神病史的患者，以尽量减少其对心理社会变量的潜在混杂效应。同一时期年龄、性别与病例组相匹配的健康体检者作为对照组，招募同时排除患有急性疾病并使用抗抑郁药物的患者和健康受试者。干燥综合征组治疗主要为糖皮质激素和羟氯喹。
1.2 研究方法
获得病人的知情同意后，采用自制的人口学问卷及抑郁症筛查量表（PHQ-9）、简易应对方式问卷（SCSQ）、社会支持评定量表（SSRS）进行调查和评分，欧洲抗风湿病联盟干燥综合征疾病活动指数量表（EULARSS disease activity index，ESSDAI）评估pSS疾病活动度。并检测及比较所有研究对象外周血proBDNF水平；检测并比较pSS伴或不伴抑郁症状患者球蛋白、IgG、IgA、IgM、C3、C4、ESR、CRP实验室指标及心理状态。
1.2.1 病活动指数（ESSDAI）评分
根据ESSDAI评分对SS疾病活动度进行全面评估，评分越高，表示疾病活动度越高。
1.2.2 抑郁评分调查
PHQ-9的总分范围为0～27，0～4分无抑郁症状，5～9分为轻度，10～14分为中度，15分以上为重度，本研究中以5分判断为具有抑郁症状，将总pSS组分为无抑郁症状组（pSS组）和伴随抑郁症状组（pSS-D组）。
1.2.3 应对方式调查
简易应对方式问卷（SCSQ）是国内测量应对方式的重要工具之一，共20个条目，包括积极应对和消极应对两个维度，积极应对维度由条目1～12组成，重点反映了积极应对的特点，消极应对维度由条目13～20组成，重点反映了消极应对的特点。采用0～3 4级评分，积极应对评分越高，表明被调查者越倾向于采用积极的应对方式；消极应对评分越高，表明被调查者越倾向于采用消极的应对方式。
1.2.4 社会支持调查
通过社会支持评定量表（SSRS）评 价，共包含3个维度（10个条目）：客观支持（3 个条目）、主观支持（4 个条目）和对社会支持利用度（3个条目）。总分≤22 分数属于低水平，23～44 分属于中等水平，45～66 分属于高水平。
1.3 实验室检查
在知情同意的前提下，于早晨空腹时用非抗凝负压采血管抽取外周静脉血约 2～5 mL，分离血浆并储存在-80 ℃下备用。血浆中proBDNF水平的检测根据（R&D Systems，Minneapolis，MN，USA）制造商的说明书通过ELISA进行。同时测量其他实验室数据，包括球蛋白、IgM、IgA、IgG、血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）和补体（C3、C4）水平。
1.4 统计学处理
采用SPSS20.0统计学软件处理数据，符合正态分布（
$\bar x \pm s $ ）且方差齐的定量资料采用单因素方差分析，定性资料（%）采用χ2检验；不符合正态分布者以M（P25，P75）表示，统计采用非参数秩和检验，比较有差异后采用Logistic回归分析进行多因素分析，探讨抑郁症状的危险因素，相关性分析采用Spearman相关分析，P < 0.05为差异有统计学意义（双侧）。2. 结果
2.1 对照组、pSS组和pSS-D组一般人口学资料的比较
最终纳入pSS患者42例，以PHQ-9≥5分判断为具有抑郁症状，将42例pSS患者分为无抑郁症状组（pSS组，n = 12）和伴随抑郁症状组（pSS-D组，n = 30）；与之匹配的对照组81例。3组一般人口学资料的比较差异无统计学意义（P > 0.05，定量资料采用Fisher精确检验）。3组在PHQ-9评分中差异有统计学意义，两两比较结果显示，对照组与pSS组PHQ-9得分差异无统计学意义（P = 0.088）， pSS-D组与对照组及pSS组PHQ-9得分差异均有统计学意义（P = 0.001），见表1。
表 1 对照组、pSS组和pSS-D组一般人口学资料的比较[n（%）/M（P25，P75）/（$ \bar x \pm s$ ）]Table 1. Comparison of the demographic data among control group，pSS group and pSS-D group [n（%），M（P25，P75），（$ \bar x \pm s$ ）]项目 对照组 pSS组 pSS-D组 χ2/t/F P （n = 81） （n = 12） （n = 30） 性别
男
女
3（3.7）
78（96.3）
0（0）
12（100）
2（6.7）
28（93.3）0.868 0.769 年龄 43.72 ± 9.26 45.50 ± 10.05 47.57 ± 10.51 1.776 0.174 PHQ-9 2.30 ± 0.84 3.08 ± 1.08 7.90 ± 2.06a 216.047 0.001* 病程（月） − 42（2.25，60.00） 24（10.50，72.00） 185.500 0.878 ESDAI评分 − 2（2.00，3.00） 2（2.00，3.00） 144.500 0.271 pSS-D组与对照组及pSS组PHQ-9得分差异均有统计学意义，*P < 0.05。 2.2 对照组、pSS组和pSS-D组之间血浆proBDNF水平的比较
ELISA结果显示，对照组、pSS组与pSS-D组血浆proBDNF水平分别为480（285.65，702.54）pg/mL、596.92（444.40，988.37） pg/mL和541.09（384.51，1069.77） pg/mL。Kruskal-Wallis检验结果为：H = 6.622，P = 0.036，按照α = 0.05的检验标准，可以认为3组血浆proBDNF水平有差别。经过两两比较，对照组与pSS-D组之间患者血浆proBDNF水平差异有统计学意义（调整后P = 0.035），见图1。
图 1 对照组、pSS组和pSS-D组之间血浆proBDNF水平的比较Figure 1. Comparison of plasma proBDNF levels among control，pSS and pSS-D groups*P < 0.05。2.3 pSS组和pSS-D组实验室指标的比较
2组在球蛋白、IgG、IgA、IgM、C3、C4、ESR及CRP检测指标的比较差异无统计学意义（P > 0.05），见表2。
表 2 pSS组和pSS-D组实验室指标的比较[（$\bar x \pm s $ ），g/L]Table 2. Comparison of laboratory indicators between pSS and pSS-D groups [（$\bar x \pm s $ ），g/L]项目 pSS组 pSS-D组 t P 球蛋白 36.54 ± 2.82 36.86 ± 1.54 −0.107 0.916 IgG 19.60 ± 1.94 19.72 ± 1.04 −0.060 0.952 IgA 2.55 ± 0.36 2.64 ± 0.35 −0.161 0.873 IgM 1.37 ± 0.24 1.44 ± 0.16 −0.239 0.812 C3 1.01 ± 0.06 1.05 ± 0.04 −0.499 0.621 C4 0.19 ± 0.02 0.23 ± 0.02 −1.169 0.250 ESR（mmH2O/h） 26.08 ± 6.70 32.07 ± 4.90 −0.677 0.503 CRP（mg/L） 4.27 ± 1.44 3.00 ± 0.55 1.010 0.319 2.4 pSS组和pSS-D组之间SCSQ 、SSRS总分及SSRS量表3个维度（客观支持、主观支持和对社会支持利用度）得分之间的比较
pSS组和pSS-D组在SSRS总分及客观支持维度之间差异有统计学意义（P < 0.05），见表3。
表 3 pSS组和pSS-D组在SCSQ 、SSRS总分及SSRS3个维度得分间的比较（$\bar x \pm s $ ）Table 3. Comparison of SCSQ，SSRS total score and SSRS scores between pSS and pSS-D groups （$\bar x \pm s $ ）项目 pSS组（n = 12） pSS-D组（n = 30） t P SCSQ 10.916 ± 5.248 9.067 ± 4.989 1.070 0.291 SSRS总分 45.09 ± 9.137 37.39 ± 8.135 2.614 0.013* 主观支持 10.45 ± 4.156 9.29 ± 3.133 0.971 0.338 客观支持 25.82 ± 3.816 21.45 ± 6.115 2.745 0.010* 对社会支持
利用度7.73 ± 2.970 7.68 ± 2.286 0.057 0.995 *P < 0.05。 2.5 pSS患者中抑郁症状危险因素的Logistic回归分析
将表3中pSS组和pSS-D组之间比较存在统计学意义的SSRS量表总分、客观支持维度及关注的变量血浆proBDNF浓度纳入Logistic回归，以评估对pSS是否伴随抑郁症状的影响。得到的Logistic模型具有统计学意义（χ2 = 14.338，P = 0.006），该模型能够正确分类81.0%的研究对象。最终，模型仅纳入SSRS量表总分（OR = 0.693，95%CI 0.494，0.972）。
3. 讨论
免疫系统和神经系统之间存在着密切的相互作用。研究表明，神经营养因子参与了炎症反应，包括炎症和自身免疫性疾病中免疫功能的调节和调控[12]。
PSS是一种全身性自身免疫性疾病，自身反应性B细胞活化是pSS的标志之一[13]。活化的人类T细胞和B细胞在体外产生功能性BDNF[12]。Lapchak等[14]通过在腹腔内注射IL-1β，发现可显著降低大鼠海马中BDNF mRNA的表达水平。Hu等[15]还发现proBDNF-p75NTR信号传导在多发性硬化（MS）患者和实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型的淋巴细胞中表达上调，且抗proBDNF的单克隆抗体（McAb-proBDNF）可减轻临床评分、限制脱髓鞘并抑制EAE小鼠的促炎细胞因子的释放。ProBDNF可通过促进促炎细胞因子的过度表达（如IL-6，IFN-α、TNF-α等），使得与抗炎细胞因子（IL-4、TGF-β等）的比例失衡。但本研究中却发现无抑郁症状的pSS患者与对照组比较，血浆proBDNF虽有升高，但未达到统计学意义，与既往研究有不同[15-16]。其可能的原因是本次入组的pSS患者病情较轻，均未处于疾病的活动期，故血浆中proBNDF的水平较正常人升高不明显。且入组的pSS患者例数较少，检验效力不足，应在更大的样本中进行检验。
其次，笔者还发现伴随抑郁症状的pSS-D患者与对照组及无抑郁症状的pSS患者比较，血浆proBDNF水平升高得最为明显。PSS患者的特征是慢性炎症，这与促炎细胞因子分泌增加有关[17]。这些促炎细胞因子可能会导致抑郁和焦虑的发生[5, 18]，这可以解释我们的发现。ProBDNF不仅可以通过促进促炎症因子的释放加重pSS，亦促进了抑郁症状的发生。Liu等[19]发现，黄芩苷可以通过增加LPS处理后小鼠海马中mBDNF的水平，并提高了mBDNF/proBDNF的比率，到达抑制神经炎症和外周免疫反应引起的炎症来减轻LPS诱导的抑郁样行为。因此，是否可以通过抑制proBDNF的表达来缓解pSS伴随的抑郁症状是今后研究的重点问题。
本次研究发现，pSS-D患者与pSS患者相比，血浆proBDNF虽有升高，但未达到统计学意义。笔者的前期研究发现，proBDNF的水平与抑郁的严重程度成正比[10]，但在本次的研究中却未得出该结果。分析原因可能有3点：（1）本次入组的pSS患者均未处于疾病的活动期（ESDAI评分均较低，有、无伴随抑郁症状2组的病程及实验室指标无差异），治疗药物糖皮质激素、羟氯喹均为低剂量，故对躯体情况及生活质量的影响不严重；（2）pSS-D患者抑郁的程度较轻（PHQ-9的评分为轻-中度），情绪对工作、生活的影响不明显；（3）与入组研究对象例数较少，故各量表的评分未完全反映患者的真实情况。故今后的研究还应扩大样本量，并纳入不同疾病严重程度的病例，以扩大检验效力。
PSS患者多为40岁以上的中年女性，易受经济状况、家庭负担及自身激素水平等多因素的影响，加剧了患者焦虑抑郁情绪的进展。杨敏等[20]在研究中指出，负性生活事件值、社会关心、家庭关心素与pSS患者抑郁状态的发生有关，笔者回归分析的结果与该研究一致。对pSS患者的应对方式和社会支持进行评估后发现，较少的社会支持是pSS伴随抑郁症状的危险因子。故对于pSS患者，尤其是女性患者，家属及社会对患者的关心、支持可以减少出现抑郁症状的发生。
综上所述，proBDNF促进了pSS伴随抑郁症状的发生，靶向BDNF及其信号通路可能是一种新的治疗pSS伴随抑郁症状的策略，且pSS患者合并抑郁症状时需要更多的社会支持。
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