留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

人体混合感染巨片吸虫和巨片吸虫与肝片吸虫的中间型

张勇 白庭富 庄杉杉 李树德 田明 王文林

周勇, 张尊月, 杨继青, 熊普, 王昆华. 海洛因造成呼吸系统损伤研究进展[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(5): 155-161. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220525
引用本文: 张勇, 白庭富, 庄杉杉, 李树德, 田明, 王文林. 人体混合感染巨片吸虫和巨片吸虫与肝片吸虫的中间型[J]. 昆明医科大学学报, 2018, 39(04): 40-46.
Yong ZHOU, Zunyue ZHANG, Jiqing YANG, Pu XIONG, Kunhua WANG. Research Progress of Heroin-induced Respiratory Damage[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(5): 155-161. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220525
Citation: Zhang Yong , Bai Ting Fu , Zhuang Shan Shan , Li Shu De , Tian Ming , Wang Wen Lin . Faschiola gigantica and Intermediate Form between Faschiola gigantica and Faschola hepatica from a Mixed Infected Body[J]. Journal of Kunming Medical University, 2018, 39(04): 40-46.

人体混合感染巨片吸虫和巨片吸虫与肝片吸虫的中间型

基金项目: 

基金: 国家自然科学基金资助项目 (81360252, 81360128); 云南公共卫生与疾病防控协同创新中心基金资助项目 (2014YNPHXT01, 2016YNPHXT05);

Faschiola gigantica and Intermediate Form between Faschiola gigantica and Faschola hepatica from a Mixed Infected Body

Funds: 

基金: 国家自然科学基金资助项目 (81360252, 81360128); 云南公共卫生与疾病防控协同创新中心基金资助项目 (2014YNPHXT01, 2016YNPHXT05);

  • 摘要: 目的 通过线粒体nad1和细胞核ITS1序列, 对从云南省玉溪地区一女性片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫成虫进行虫种鉴定, 获知寄生于人体的片形吸虫种类.方法 片形吸虫标本保存于75%乙醇溶液, 提取全基因组DNA, PCR扩增线粒体基因NADH脱氢酶亚基1 (nad1) 和细胞核r DNA的第一内转录间隔区 (ITS1) 序列, 正反引物双向测序.所测序列与Gen Bank中Fasciola属相关同源序列组成DNA数据集, 进行ITS1单倍型分析和构建nad1的NJ系统发育树.结果测得片形吸虫标本的ITS1和nad1序列长度分别是422 bp和542bp.2条片形吸虫标本的nad1序列完全一致, 属于F.gigantica (Fg型) .但是ITS1单倍型不一致, 标本YXGD01在该基因中属于F.gigantica (Fg型) , 标本YXGD02属于F.hepatica (Fh型) .基于nad1 DNA数据集构建的NJ系统发育树, 明显分为F.gigantica和F.hepatica 2个类群.结论 基于线粒体nad1和细胞核ITS1序列, 从云南省玉溪地区一片形吸虫病患者体内取出的2条片形吸虫属于不同类型, 标本YXGD01鉴定为F.gigantica, 标本YXGD02可能是F.gigantica与F.hepatica杂交生成的中间型个体, 但需要更多的实验证据.
  • 肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是慢性肾脏疾病进展至终末期肾病的必经过程[1],RIF的主要病理特征为大量细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)如纤连蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col Ⅰ)等在肾间质沉积并形成瘢痕,从而破坏肾脏结构,导致肾功能受损[2-3]

    在肾脏损伤过程中,多种因子(如TGF-β1)可诱导肾小管上皮细胞转化为成纤维细胞 /肌成纤维细胞,并导致ECM蛋白沉积的过程被称为上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。大量研究表明,EMT是RIF的发生和发展中重要的病理生理过程,是启动和维持RIF的关键机制[4-5]。芒果苷元(norathyriol,NL)属于双苯并吡喃酮类黄酮化合物,本课题组前期研究发现芒果苷元能降低血尿酸水平且改善动物肾功能,已经申请国家发明专利(申请号:201610181082.3),尤其是对肾小管具有很好的保护作用。本研究拟采用TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)成EMT模型,以苯溴马隆作为阳性对照,观察芒果苷元对HK-2细胞EMT的影响,为芒果苷元肾保护作用的后续研究奠定基础。

    人肾小管上皮细胞(HK-2),购自中国科学院上海细胞库;芒果苷元,昆明制药集团股份有限公司;苯溴马隆,阿拉丁;人重组TGF-β1,Peprotech;MTT,Amresco公司;DMEM干粉培养基,Gibico;DMSO,Biofroxx;胎牛血清,Gibico;胰蛋白酶干粉,Amresco公司;Transwell小室,Corning;结晶紫,Meilunbio;兔抗Fibronectin抗体,万类生物;兔抗ColⅠ抗体,万类生物;山羊抗兔IgG/辣根酶标记,中山金桥。

    二氧化碳培养箱为Thermo产品,型号heracell 150i;倒置显微镜为Olympus产品,型号CKX41;全波长紫外-可见光酶标仪为美国Biotek产品,型号Synergy2;高压锅为上海申安医疗器械厂产品,型号LDZX-50KBS;恒温摇床为博彩产品。型号THZ-032;超低温冰箱为美国Thermo Electron公司产品,型号Forma -86 C991。

    细胞培养:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)用含有10%胎牛血清的DMEM培养基,置于37 ℃、5%CO2、饱和湿度的CO2 培养箱内孵育培养,隔2 d换液。

    MTT法检测芒果苷元对HK-2细胞活力的影响:选生长状态良好的HK-2细胞,待其生长达70%~80%融合时,按5×103个/孔接种于96孔细胞培养板,37 ℃,5% CO2培养箱中孵育培养。待细胞贴壁后,加入无FBS的DMEM培养基饥饿细胞过夜,使细胞同步化于G0期。给以芒果苷元(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)和苯溴马隆(10-7 mol/L)干预48 h,48 h后,每孔加20 μL MTT,继续培养4 h,弃上清,每孔加入150 μL DMSO,震荡混匀10 min,492 nm 波长下测定OD值,计算细胞活力。细胞相对活力(%) = (处理孔OD492/正常对照孔OD492)×100[6]

    划痕实验检测细胞迁移能力:选生长状态良好的HK-2细胞,待其生长达70%~80%融合时,接种至六孔板(种板前用marker笔在六孔板背后均匀的划横线,大约每隔0.5 cm一道,使每孔至少有五条线穿过,便于后续拍照时定位),将细胞分为正常组、模型组(TGF-β1诱导组)、芒果苷元10-8、10-7、10-6 mol/L组和苯溴马隆10-7 mol/L组。37 ℃,5% CO2培养箱内孵育培养细胞,待其贴壁后,将含10% FBS的培养基换成无FBS培养基,使细胞同步化于G0期。加入各浓度芒果苷元(10-8、10-7、10-6 mol/L)和苯溴马隆(10-7 mol/L),培养箱孵育培养4 h,4 h后用200 μL枪头垂直于marker笔所划横线划痕,每孔划5条,PBS洗涤3次,重新加入系列浓度芒果苷元和苯溴马隆,同时给以10 ng/mL的TGF-β1诱导,在TGF-β1诱导后第0 h和24 h时,每孔选取六个点拍照,计算24 h迁移率。迁移率(%) = (0 h划痕宽度 - 测定时划痕宽度)/ 0 h划痕宽度× 100%[6]

    Transwell法检测细胞侵袭能力:用无FBS培养基稀释Matrige,铺于24孔Transwell小室的上室,放入37 ℃培养箱,待Matrigel凝固后,小心吸走上室液体,细胞消化后用无FBS培养基重悬并计数,每孔5×104个细胞,接种于上室,下室加入含10% FBS的培养基,37 ℃,5% CO2培养24 h,吸弃上室培养基,用棉签轻轻擦去上室细胞,并用PBS洗涤2次,甲醇在室温固定20 min,再用PBS洗2次,结晶紫室温染色20 min,PBS洗3次,100×倒置显微镜下选4个视野拍照,计数穿过上室的细胞数。

    Western bolt免疫印迹实验:细胞培养48 h后,用PBS洗涤细胞3次,加入含有蛋白酶抑制剂、PMSF的RIPA裂解液,冰上裂解细胞,用细胞刮刀将细胞刮下并收集至EP管,离心后取上清,将收集好的蛋白样品定量,加5×loading buffer,100 ℃变性,在压缩胶(60 V,30 min),分离胶(110 V,80 min)条件下,进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,260 mA,90 min,冰水浴条件下转膜,5%脱脂牛奶室温封闭2 h,用5%脱脂牛奶稀释一抗至适当浓度,4 ℃ 封闭过夜,次日洗膜,加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵2 h,洗膜,BIO-RAD化学发光成像仪进行成像,采用Image j分析软件对条带进行分析,求出各条带的光密度值。

    用Graphpad prsim5.0软件进行统计学分析,所有实验数据用均数±标准差( $\bar x \pm s$)表示,用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间比较采用Dunnett法,P < 0.05为差异有统计学意义。

    图1所示,与正常组相比,芒果苷元各浓度组及苯溴马隆组对HK-2细胞活力无明显影响(P > 0.05)。

    图  1  芒果苷元对HK-2细胞活力的影响( $\bar x \pm s$,n = 3)
    注:NOR:正常组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。
    Figure  1.  Effect of norathyriol on HK-2 cell viability

    图2所示,在倒置显微镜下(40×),正常的HK-2细胞为鹅卵石状、铺路石状、圆形或者椭圆形,细胞与细胞之间连接紧密,TGF-β1作用24 h后,模型组细胞变长,细胞之间连接松散,变为长梭形;在给以芒果苷元10-8、10-7、10-6 mol/L和苯溴马隆(10-7 mol/L)干预之后,与模型组相比,椭圆形细胞增多。

    图  2  芒果苷元对TGF-β1 诱导24 h后的HK-2细胞形态变化的影响(40×)
    注:NOR:正常组;MOD:模型组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。
    Figure  2.  Effect of norathyriol on the morphological changes of HK-2 cells induced by TGF - β 1 for 24 h (40×)

    与正常组比,TGF-β1诱导HK-2细胞24 h后,模型组迁移率显著增加,差异具有统计学意义(P < 0.05,0.01);与模型组相比,芒果苷元10 -8,10-7,10-6 mol/L组及苯溴马隆组迁移率显著降低,差异具有统计学意义(P < 0.05,0.01),见 图3图4

    图  3  芒果苷元对TGF-β1诱导后HK-2细胞迁移率的影响(40×)
    Figure  3.  Effect of norathyriol on the migration of HK-2 cells induced by TGF - β 1 (40×)
    图  4  芒果苷元对TGF-β1诱导后的HK-2细胞的迁移率的影响( $\bar x \pm s$,n = 3)
    注:NOR:正常组;MOD:模型组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。与模型组相比,*P < 0.05;**P < 0.01;与正常组相比,##P < 0.01。
    Figure  4.  Effect of norathyriol on the migration of HK-2 cells induced by TGF – β1 ( $\bar x \pm s$,n = 3)

    TGF-β1(10 ng/mL)诱导HK-2细胞后,与正常组比,模型组侵袭能力显著增加,差异具有统计学意义(P < 0.05);与模型组相比,芒果苷元10 -6 mol/L组细胞侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P < 0.05);与苯溴马隆组相比,等浓度芒果苷元(10 -7 mol/L)组侵袭率无明显变化(P > 0.05),如 图5图6

    图  5  芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞侵袭能力的影响(100×)
    Figure  5.  Effect of norathyriol on invasion of HK-2 cells induced by TGF - β 1(100 ×)
    图  6  芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞侵袭能力的影响( $\bar x \pm s$,n = 3)
    注:NOR:正常组;MOD:模型组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。与模型组相比,*P < 0.05;与正常组相比,##P < 0.01,one-way ANOVA。
    Figure  6.  Effect of norathyriol on invasion of HK-2 cells induced by TGF - β 1 ( $\bar x \pm s$,n = 3)
    2.5.1   芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞ColⅠ蛋白表达水平的影响

    与正常组相比,模型组细胞ColⅠ表达显著上调,差异具有统计学意义(P < 0.05);与模型组相比,芒果苷元10 -6 mol/L组和苯溴马隆组细胞ColⅠ表达显著下调,差异具有统计学意义(P < 0.05,0.01),见 图7

    图  7  芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞ColⅠ蛋白表达水平的影响( $\bar x \pm s$,n = 3)
    注:NOR:正常组;MOD:模型组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。与正常组相比,#P < 0.05;与模型组比,*P < 0.05,**P < 0.01,one-way ANOVA。
    Figure  7.  Effect of norathyriol on expression of colⅠprotein in HK-2 cells induced by TGF-β1 ( $\bar x \pm s$,n = 3)
    2.5.2   芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN蛋白表达水平的影响

    与正常组相比,模型组细胞FN蛋白表达显著上调,差异具有统计学意义(P < 0.01);与模型组相比,芒果苷元10 -6 mol/L组细胞FN蛋白表达显著下调,差异具有统计学意义(P < 0.05),见 图8

    图  8  芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN表达水平的影响( $\bar x \pm s$,n = 3)
    注:NOR:正常组;MOD:模型组;NL:芒果苷元;Ben:苯溴马隆。与正常组相比,##P < 0.01;与模型组比,*P < 0.05,one-way ANOVA。
    Figure  8.  Effect of norathyriol on expression of FN protein in HK-2 cells induced by TGF-β1 ( $\bar x \pm s$,n = 3)

    TGF-β1是公认的最强的纤维化诱导因子,在体外可诱导多种上皮细胞发生EMT。在RIF过程中,TGF-β1可刺激肾小管上皮细胞发生EMT,促进RIF的发生发展[7-8]。本实验参照文献[9-11],给以10 ng/mL TGF-β1诱导HK-2细胞,复制肾小管上皮细胞EMT模型,在此模型上研究芒果苷元对EMT的作用及其机制。

    正常HK-2细胞呈铺路石形,细胞与细胞之间紧密连接,在发生EMT时细胞形态会发生改变,可由原来的圆形或椭圆形变成长梭形,且细胞与细胞间的间距变大,细胞形态和细胞间间距的改变可反映肾小管上皮细胞EMT的程度[12],本实验给以TGF-β1诱导HK-2细胞24 h时后拍照,观察细胞形态的变化,发现在TGF-β1诱导后24 h时,模型组细胞发生明显的表型转化,细胞由鹅卵石形态转化为长梭形,提示HK-2细胞发生EMT;在给以芒果苷元干预后,部分HK-2细胞能维持铺路石形态,提示芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞形态的变化。

    正常肾小管上皮细胞最显著的特征是具有端-基极性且细胞与细胞间保持紧密的连接,他们紧密的排列并粘附于肾小管基底膜上形成单层结构,因此几乎没有运动能力,而成纤维细胞没有粘附到任何膜上,没有细胞极性,也不会形成单层结构,能够自由的移动。在外界诱导因素刺激下,发生EMT的肾小管上皮细胞转化为间充质成纤维细胞,获得迁移和侵袭能力,穿过肾小管基底膜,转化为能分泌大量ECM的肌成纤维细胞,参与RIF进程[12],因此迁移和侵袭能力可间接反映细胞EMT的程度。本实验用划痕实验法检测TGF-β1诱导24 h后HK-2细胞的迁移能力,实验结果表明,在TGF-β1诱导24 h后,模型组HK-2细胞迁移率显著升高,说明肾小管上皮细胞发生转分化,符合EMT模型特征。给以芒果苷元后,HK-2细胞迁移率有不同程度的下降,提示芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的迁移,抑制EMT的进程。Transwell法可用于检测细胞侵袭能力,将细胞接种于预先铺好Matrigel的上室,培养24 h,再将穿膜细胞进行计数来评估细胞的侵袭能力,本实验中,模型组HK-2细胞穿膜数显著增多,提示TGF-β1诱导后细胞获得侵袭能力,能够穿过Matrigel,给以芒果苷元后,HK-2细胞侵袭能力显著下降,提示芒果苷元能降低由TGF-β1诱导的细胞侵袭,抑制EMT的发展。

    RIF的主要特征即为ECM在肾间质的积聚,肾脏ECM成分主要来源于活化的间质成纤维细胞和肌成纤维细胞,肌成纤维细胞可由多种细胞转化而来,其中肾小管上皮细胞是肌成纤维细胞的重要来源之一,有研究表明肌成纤维细胞分泌ECM的能力是成纤维细胞的4~5倍,表明肾小管上皮细胞EMT在RIF发生发展过程中具有重要作用。肾脏ECM成分主要包括胶原,糖蛋白以及蛋白聚糖三类物质,在正常生理条件下,肾小管上皮细胞即可产生少量ECM成分,用于形成肾小管基底膜以及维持肾脏生理结构,FN属于糖蛋白类ECM,FN在生理状态下少量表达参与肾小管基底膜的形成,而在外界刺激发生EMT时,FN的沉积最早出现并持续增加,FN的表达水平可用来评判纤维化程度,而胶原成分中的ColⅠ常常被认为可以引发肾脏纤维化,ColⅠ的高表达与肾脏纤维化的发生密切相关[12-14]。本实验中,TGF-β1诱导HK-2细胞48 h后,模型组HK-2细胞中FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调,给以芒果苷元后,蛋白表达均显著下调,提示芒果苷元可降低FN、ColⅠ等ECM成分延缓EMT。

  • [1] [1]URQUHART G M, ARMOUR J, DUNCAN J L, et al.Veterinary parasitology[M].2nd ed.Oxford:Blackwell Science, 1996:307.
    [2] [2]SPITHILL T W, DALTON J P.Progress in development of liver fluke vaccines[J].Parasitol Today, 1998, 14 (6) :224-228.
    [3] [3]MAS-COMA S, VALERO M A, BARGUES M D.Fasciola, lymnaeids and human fascioliasis, with a global overview on disease transmission, epidemiology, evolutionary genetics, molecular epidemiology and control[J].Adv Parasitol, 2009, 69 (1) :141-146.
    [4] [4]HASSEB A N, SHAZLY A M, ARAFA M A, et al.A review on fascioliasis in Egypt[J].J Egypt Soc Parasitol, 2002, 32 (1) :317-354.
    [5] [5]ISHII Y, NAKAMURA-UCHIYAMA F, NAWA Y.A praziquantel-ineffective fascioliasis case successfully treated with triclabendazole[J].Parasitology International, 2002, 51 (2) :205-209.
    [6] [6]MAS-COMA M S, ESTEBAN J G, BARGUES M D.Epidemiology of human fascioliasis:a review and proposed new classification[J].Bull World Health Organ, 1999, 77 (4) :340-346.
    [7] [7]AI L, CHEN MX, ALASAAD S, et al.Genetic characterization, species differentiation and detection of Fasciola spp.by molecular approaches[J].Parasit Vectors, 2011, 4 (1) :101.
    [8]许隆祺, 余森海, 徐淑慧.中国人体寄生虫分布与危害[M].北京:人民卫生出版社, 2000:152-153.
    [9]李雍龙.人体寄生虫学[M].第7版.北京:人民卫生出版社, 2008:99-101.
    [10]陈木新, 艾琳, 许学年, 等.云南省大理州大片形吸虫群体感染26例分析[J].中国地方病杂志, 2012, 31 (6) :595-598.
    [11]张国丽, 苏慧勇, 周俊, 等.云南省宾川县28例大片形吸虫病患者的临床分析[J].中华实验和临床感染病杂志, 2014, 8 (5) :667-670.
    [12] [12]SARWAR, M M.Fasciola indica Varma, a synonym of Fasciola gigantica Cobbold[J].Biologia, 1957, 3 (2) :168-175.
    [13] [13]YAMAGUTI S.Systema Helminthum.Vol.Ⅰ, The Digenetic Trematodes of Vertebrates, part I[M].New York:Interscience Publishers Inc, 1958:839-841.
    [14] [14]ITAGAKI T, SUTSUMI K.Triploid form of Fasciola in Japan:genetic relationships between Fasciola hepatica and Fasciola gigantica determined by ITS-2 sequence of nuclear r DNA[J].International Journal for Parasitology, 1998, 28 (5) :777-781.
    [15]杜礼义, 张印泉, 廖祖荫, 等.湘、鄂边区牛、羊片形吸虫感染调查[J].中国人兽共患病学报, 1994, 10 (2) :55-56.
    [16]尹怀志, 叶冰莹, 汪溥钦.肝片吸虫和巨片吸虫染色体和同工酶的研究[J].福建师范大学学报 (自然科学版) , 1990, 6 (1) :85-90.
    [17] [17]HENEBERG P.Phylogenetic data suggest the reclassification of Fasciola jacksoni (Digenea:Fasciolidae) as Fascioloides jacksoni comb.nov[J].Parasitology Research, 2013, 112 (4) :1679-1689.
    [18] [18]REDDY P V, SUBRAMANYAMS.Chromosome studies in the liver fluke, Fasciola gigantica Cobbold, 1856, from Andra Pradesh[J].Current Science, 1973, 42 (8) :288-291.
    [19] [19]PERIAGO M V, VALERO M A, SAYED M, et al.First phenotypic description of Fasciola hepatica/Fasciola gigantica intermediate forms from the human endemic area of the Nile Delta, Egypt[J].Infection Genetics and Evolution, 2008, 8 (1) :51-58.
    [20] [20]ALI H, AI L, SONG H Q, et al.Genetic characterisation of Fasciola samples from different host species and geographical localities revealed the existence of F.hepatica and F.gigantica in Niger[J].Parasitol Res, 2008, 102 (5) :1021-1024.
    [21] [21]HUANG W Y, HE B, WANG C R, et al.Characterisation of Fasciola species from Mainland China by ITS-2 ribosomal DNA sequence[J].Vet Parasitol, 2004, 120 (1-2) :75-83.
    [22] [22]ITAGAKI T, KIKAWA M, SAKAGUCHI K, et al.Genetic characterization of parthenogenic Fasciola sp.in Japan on the basis of the sequences of ribosomal and mitochondrial DNA[J].Parasitology, 2005, 131 (5) :679-685.
    [23] [23]ADLARD R D, BARKER S C, BLAIR D, et al.Comparison of the second internal transcribed spacer (ribosomal DNA) from populations and species of Fasciolidae (Digenea) [J].Int J Parasitol, 1993, 23 (3) :423-425.
    [24] [24]HASHIMOTO K, WATANOBE T, LIU C X, et al.Mitochondrial DNA and nuclear DNA indicate that the Japanese Fasciola species is F.gigantica[J].Parasitology Research, 1997, 83 (3) :220-225.
    [25] [25]AGATSUMA T, ARAKAWA Y, IWAGAMI M, et al.Molecular evidence of natural hybridization between Fasciola hepatica and F.gigantica[J].Parasitol Int, 2000, 49 (3) :231-238.
    [26] [26]CHOE S E, NGUYEN T T, KANG T G, et al.Genetic analysis of Fasciola isolates from cattle in Korea based on second internal transcribed spacer (ITS-2) sequence of nuclear ribosomal DNA[J].Parasitology Research, 2011, 109 (3) :833-839.
    [27] [27]ITAGAKI T, KIKAWA M, TERASAKI K, et al.Molecular characterization of parthenogenic Fasciola sp.in Korea on the basis of DNA sequences of ribosomal ITS1 and mitochondrial NDI gene[J].J Vet Med Sci, 2005, 67 (11) :1115-1118.
    [28] [28]ALASAAD S, HUANG C Q, LI Q Y, et al.Characterization of Fasciola samples from different host species and geographical localities in Spain by sequences of internal transcribed spacers of r DNA[J].Parasitol Res, 2007, 101 (5) :1245-1250.
    [29] [29]AMOR N, HALAJIAN A, FARJALLAH S, et al.Molecular characterization of Fasciola spp.from the endemic area of northern Iran based on nuclear ribosomal DNA sequences[J].Experimental Parasitology, 2011, 128 (3) :196-204.
    [30] [30]LIU G H, GASSER R B, YOUNG N D, et al.Complete mitochondrial genomes of the‘intermediate form’of Fasciola and Fasciola gigantica, and their comparison with F.hepatica[J].Parasites&Vectors, 2014, 7 (1) :150.
    [31] [31]ITAGAKI T, SAKAGUCHI K, TERASAKI K, et al.Occurrence of spermic diploid and aspermic triploid forms of Fasciola in Vietnam and their molecular characterization based on nuclear and mitochondrial DNA[J].Parasitol Int, 2009, 58 (1) :81-85.
    [32] [32]LE T H, DE N V, AGATSUMA T, et al.Human fascioliasis and the presence of hybrid/introgressed forms of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica in Vietnam[J].International Journal for Parasitology, 2008, 38 (6) :725.
    [33]张莉莉, 王会珍, 刘钢.云南肝片吸虫病首例报告[J].中国病原生物学杂志, 2005, 18 (5) :344-345.
    [34]艾琳, 陈木新, 吕山, 等.云南宾川地区牛羊片形吸虫感染调查及分子鉴定[J].热带医学杂志, 2013, 13 (6) :791-794.
    [35] [35]HALL T A.Bio Edit:a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows95/98/NT[J].Nucl Acids Symp, 1999, 41 (1) :95-98.
    [36] [36]KUMAR S, STECHER G, TAMURA K.MEGA7:Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets[J].Molecular Biology and Evolution, 2016, 33 (7) :1870-1874.
    [37] [37]ITAGAKI T, ICHINOMIYA M, FUKUDA K, et al.Hybridization experiments indicate incomplete reproductive isolating mechanism between Fasciola hepatica and Fasciola gigantica[J].Parasitology, 2011, 138 (10) :1278-1284.
    [38] [38]BRENNAN G P, FAIRWEATHER I, TRUDGETT A, et al.Understanding triclabendazole resistance[J].Exp Mol Pathol, 2007, 82 (2) :104-109.
  • [1] 陈燃, 张河川, 张雅静, 郭良骥, 赵昊.  云南省3所非医学类高校大学生性知识-性态度-性行为现况调查, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240806
    [2] 董勇, 顾兴琼, 蔡帅中, 杨娇, 杨海银, 关琼瑶.  云南省护士突发公共卫生事件应急能力现状及影响因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240227
    [3] 向雪琳, 赵红瑞, 王中杰, 夏宇, 马敏, 王化丹, 何利平.  抗病毒治疗的HIV感染者社会支持状况及影响因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240924
    [4] 王晓莉, 杨宏伟, 丁婷, 吴睿萍, 朱奎璇.  云南籍鼻咽癌患者2 499例的临床资料分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230523
    [5] 张媛, 李宏, 崔文龙, 唐松源, 刘颖婷.  云南省2017年~2019年老年患者疾病谱分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220520
    [6] 张海霞, 李磊, 金磊, 叶沛婧, 孙传政.  云南省肿瘤医院1 203例黑色素瘤临床分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220808
    [7] 付睿, 蔡乐.  基于DRGs的云南某医院COPD患者重复入院影响因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210110
    [8] 魏骊铮, 闵杰青, 田锦润, 曹彦洁, 潘鹏, 王鹏, 杨云娟, 罗云娇.  云南省婴幼儿不完全性川崎病急性期超声心动图特征, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210923
    [9] 陶诗琪, 黄桂云, 钱阳凤, 赵喜娟, 耿艺, 杨明莹.  云南省各级医疗机构临床护士PICC维护知识认知及影响因素, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201113
    [10] 崔瑶, 李玥晓, 李艳红, 刘波, 张石楠, 刘娟.  云南省农村5岁儿童龋病状况及其影响因素, 昆明医科大学学报.
    [11] 张杰.  云南省人群地中海贫血遗传多样性的研究, 昆明医科大学学报.
    [12] 段万石.  胸部恶性肿瘤患者院内细菌真菌混合感染的临床特征, 昆明医科大学学报.
    [13] 张伟琴.  云南省并殖吸虫第二中间宿主溪蟹的调查研究, 昆明医科大学学报.
    [14] 李芫苑.  云南宾川一起肝片吸虫病暴发的危险因素调查, 昆明医科大学学报.
    [15] 李静.  云南省某大学新生中莱姆病和恙虫病的血清流行病学调查, 昆明医科大学学报.
    [16] 杨鹏.  793例云南籍肺癌患者特征分析, 昆明医科大学学报.
    [17] 高小娇.  云南省HIV/AIDS患者中结核病筛查效果评价, 昆明医科大学学报.
    [18] 中南大学云南校友会湘雅分会成立大会纪要, 昆明医科大学学报.
    [19] 姜润生.  坚持办刊质量 提升学术影响力, 昆明医科大学学报.
    [20] 迈好建设高水平教学研究型医科大学的步伐, 昆明医科大学学报.
  • 期刊类型引用(0)

    其他类型引用(3)

  • 加载中
计量
  • 文章访问数:  1592
  • HTML全文浏览量:  557
  • PDF下载量:  77
  • 被引次数: 3
出版历程
  • 收稿日期:  2018-01-19

目录

/

返回文章
返回