男性不育症（male infertility，MI）指夫妻同居有正常的性生活，未避孕超过1 a，由于男方因素致使女方未能自然受孕。据世界卫生组织（WHO）统计，全球目前约有6 000～8 000万对夫妇患有不育症，其中有15%因不育寻求治疗，最终仍有5%的夫妇不能受孕^[1-3]。由男性因素导致的不育高达40%～50%，感染和免疫因素是目前导致不育的主要因素，其中解脲支原体（ureaplasma urealyticum，UU）是人类泌尿生殖系统感染的常见病原体，可引起泌尿生殖道炎症和男性不育，有研究发现，15%的男性不育与生殖道感染有关^[4-5]。本文旨在通过研究精液质量异常与生殖道解脲支原体感染之间的关系，并初步探讨其可能的作用机理。

1.   资料与方法

1.1   病例资料

选取2016年06月至2019年6月在昆明医科大学附属延安医院泌尿外科就诊的男性不育患者347例，年龄24～47岁，平均（31.05±5.01）岁，均为婚后1 a以上不育者，性生活规律，无性功能障碍，排除泌尿生殖系统先天畸形、性腺功能异常、近期服用过抗癫痫、抗肿瘤等可能导致男性不育的药物；其配偶经妇科检查基础体温双相、月经周期正常、输卵管通畅、排除子宫发育不良及内分泌等因素造成的不孕。

按是否有UU感染分为UU阳性（174例）和UU阴性（173例）两组，分别检测两组的精液质量（精液量、精子密度、精子活率、前向运动精子比例）及精液液化时间，精子畸形率。UU阳性组给予阿奇霉素，多西环素治疗转阴后，再次收集精液进行分析。

1.2   试剂与设备

UU 荧光定量 PCR 检测试剂盒与 PCR 仪，采用美国罗氏公司实时自动荧光 DNA 扩增仪及配套试剂。采用西班牙SCA精子自动分析系统，参照WHO《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（2010年）^[6] 进行标本采集，检查结果参照WHO的标准，以精子密度 > 15×10⁶/mL；精子活动率 > 40%；前向运动精子a级 > 25%或a+b级 > 32%；精液液化时间 < 1 h；精子畸形率 < 96%；为正常参考值。

1.3   方法

1.3.1   标本采集

受检者采样前2周内未使用过任何抗生素，禁欲3～5 d，手淫取精液于取精杯中，40 min内送检，将标本置于37 ℃恒温水浴箱内，孵育30 min后，取一部分进行常规精液分析，另一部分3 000 r/min离心10 min，取上清液置-20 ℃冰存备检。精液未液化者继续孵育后再行检测。

1.3.2   精子形态学分析

按WHO推荐的DiffQuik快速染色法染色，严格按照标准判断。

1.3.3   支原体检测

采用荧光定量PCR检测方法：取精浆及尿道外口液150 µL，12 000 r/min离心10 min，沉淀加50 µL标本处理液，95 ℃ 10 min，10 000 r/min离心10 min。取上清液10 µL做模板，补加20 µL稀释液混悬后进行荧光PCR扩增，扩增条件：95 ℃ 2 min；然后95 ℃ 15 s，52 ℃ 40 s，40个循环。严格按照试剂盒说明书进行操作和判断结果。

1.4   统计学处理

采用SPSS19.0统计软件处理。计量资料服从正态分布，用均数±标准差（${{\bar x}}\pm s$）表示。计数资料用χ²检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2.   结果

2.1   UU阳性组治疗前后与UU阴性组精液参数比较

UU阳性组治疗前精液各项指标均低于UU阴性组，差异有统计学意义（P < 0.05）；UU阳性组经治疗转阴后，精液量提高至（3.36±0.65）mL，提高了20.59%；精子密度提高至（68.44±30.79）×10⁶ mL，增加了16.55%；精子活率提高至（47.68±13.40）%，增加了19.56%；a级精子比例提高至（27.39±8.39）%，增加了24.89%；a+b级精子比例提高至（40.83±9.70）%，增加了32.69%；精子畸形率下降至（88.83±7.17）%，下降了1.39%，与治疗前比较差异均有统计学意义（P < 0.01），见表1。

表  1  UU阳性组治疗前后与UU阴性组精液参数（${{\bar x}}$±s）

Table  1.  Comparison of semen parameters between UU positive group and UU negative group before and after treatment（${{\bar x}} \pm s$）before and after treatment（${{\bar x}}$ ± s）

分组	n	精液量 （mL）	精子密度 （106/mL）	精子活率 （%）	a级精子比例 （%）	a+b级精子比例	精子畸形率 （%）
UU阳性治疗前	174	3.01 ± 0.77	58.72 ± 35.47	39.88 ± 12.67	21.93 ± 10.11	30.77 ± 11.68	90.08 ± 9.32
UU阳性治疗后	174	3.36 ± 0.65*	68.44 ± 30.79*	47.68 ± 13.40*	27.39 ± 8.39*	40.83 ± 9.70*	88.83 ± 7.17*
UU阴性	173	3.20 ± 0.50	69.22 ± 27.07*	48.33 ± 12.22*	27.15 ± 7.36*	41.89 ± 8.63*	89.72 ± 7.12*
T		1.01	0.87	2.61	1.48	0.63	1.74
P		0.028	0.032	0.041	0.029	0.023	0.037
与治疗前比较，*P < 0.05。

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2.2   UU阳性组治疗前后与UU阴性组精液液化时间比较

UU阳性组精液液化时间比UU阴性组明显延长，差异有统计学意义（P < 0.05），UU阳性组经治疗转阴后，液化率由20.11%提高到92.53%，与治疗前相比差异有统计学意义（P < 0.05），与UU阴性组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）见表2。

表  2  UU阳性组治疗前后与UU阴性组精液液化时间[n （%）]

Table  2.  Comparison of semen liquefaction time between UU positive group and UU negative group before and after treatment [n （%）]

分组	精液液化时间（n）
	< 30 min	< 60 min	> 60 min
UU阳性治疗前	0	35（20.11）	139
UU阳性治疗后	56	161*（92.53）	13*
UU阴性	55	173*（100.00）	0*
T	0.63	1.71	2.21
P	0.058	0.034	0.041
与治疗前比较，*P < 0.05

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3.   讨论

大量研究表明，泌尿生殖道感染与男性不育密切相关，其中UU是男性泌尿生殖道感染最常见的病原体。有文献报道，在男性不育的精液中，UU的阳性率为15.6%～51.9%，一般在35%左右^[7]。很多学者研究报道^[4，8]，若精液中存在UU感染，可显著降低精子数量、精子存活率、前向运动精子比例，精子正常形态显著降低，畸形精子数目增多。UU生长需要胆固醇和尿素，而前列腺内富含胆固醇，并且由于前列腺的解剖位置较为特殊，尿液易逆流入前列腺，为UU提供生长所需的尿素，故前列腺是UU常见而主要的易感器官，相应地，UU也可经射精管逆流入精囊腺、附睾，引起精囊腺炎和附睾炎。UU在前列腺、精囊腺、附睾中大量繁殖，可影响精子代谢，大量UU吸附于精子表面，还可进入精子内部，通过破坏精子细胞膜损害精子，蓄积的毒性产物H2O2直接破坏精子膜和顶体，使精子变得臃肿，精子前进阻力增大，降低前向运动精子比例^[9]。UU感染还可破坏血睾屏障，使精子抗原与精浆抗原在生殖道中的通透性增加，通过局部淋巴传递抗原或进入全身循环而产生免疫应答，产生抗精子抗体（antisperm antibody，AsAb），导致精子数量、精子存活率下降，畸形率上升^[10]。

人类射出体外的精液正常状态下具有立即凝固并在短时间（5～20 min）内液化的特征。30 min内液化为正常液化时间，30 min～60 min内液化称为液化迟缓，超过60 min不液化称为精液不液化。业已证实^[11]，精液的液化与凝固是由精液中凝固因子和液化因子协调作用的结果，凝固因子是精囊主细胞分泌颗粒产生并分泌的一种多形蛋白抗原，这种蛋白抗原被称为精囊特异性抗原（seminal vesiclespecific antigen，SVSA）。液化因子来源前列腺分泌合成的前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA），前列腺特异性抗原在前列腺的腺泡和腺管上皮细胞内合成，并通过腺导管分泌的一种丝氨酸蛋白水解酶，其生理功能是降解精液Semenogelin1（Sg1）、Semenogelin2（Sg2）和Fibronectin（FN）以凝胶样蛋白等。UU感染后，使得前列腺的分泌功能紊乱，精浆成分发生改变，导致精液液化异常，主要表现为精浆中酸性磷酸酶含量下降，精液粘度增高，液化时间明显延长^[12-13]。

综上所述，男性生殖道解脲支原体感染可降低精液质量，尤其可延长精液液化时间，使男性不育率升高，其原因可能与UU直接吸附在精子表面并破坏精子膜；破坏血睾屏障，引发自身免疫；降低精浆中酸性磷酸酶含量，破坏精液凝固液化平衡有关，因此在临床治疗男性不育时，不可忽视对UU的检测和治疗，发现UU感染应及时治疗，可降低男性不育的发生。