HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量

赵从琪; 羊顺波; 李光达; 李琦华; 李玉鹏; 徐俊驹

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20210225

HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210225

1.
云南农业大学烟草学院，云南昆明　650201
2.
云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明　650201
3.
昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明　650500

基金项目: 国家自然科学基金资助项目（31760098）；云南省重大科技专项（生物医药）子课题基金资助项目（2018ZF0120105）；国家重点研发计划子课题基金资助项目上（2018YFC0807801-4）；云南省农业联合专项基金资助项目（2018FG001-023）

详细信息

作者简介:
赵从琪（1997～），女，云南保山人，在读硕士研究生，主要从事烟草化学研究和烟草植保研究

通讯作者:
李玉鹏，E-mail：liyupeng26@126.com

徐俊驹，E-mail：junjuxu007@126.com

中图分类号: R310
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出版历程
- 收稿日期: 2020-11-27
- 刊出日期: 2021-03-05

Determination of Five Nucleosides in Periplaneta Americana L. Extract by HPLC

1.
Colledge of Tobacco Science，Yunnan Agricultural University，Kunming Yunnan 650201
2.
College of Animal Science and Technology Yunnan Agricultural University，Kunming Yunnan 650201
3.
School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology of Natural Products，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500，China

摘要

摘要: 目的用HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量。方法用石油醚对美洲大蠊粉末进行脱脂，以65%的乙醇为溶剂进行超声提取，乙腈溶解配制成美洲大蠊供试品溶液，使用Agilent色谱柱（9.4×250 mm；5 μm），以纯水∶乙腈 = 95∶5为流动相，流速为0.5 mL/min，检测波长为254 nm，进样量取10 μL，对照混合标品和单一标品对美洲大蠊供试品溶液进行含量测定。结果用HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量，灵敏度高，专属性好，可用于本品的含量测定。5种核苷浓度在一定范围内与峰面积呈良好线性关系（R² > 0.9941），精密度高，重复性好，稳定性佳，加样回收率均在 97.58%～103.26%之间。结论该法实验过程简便、结果可靠、稳定，可用来测定美洲大蠊中核苷类成分的含量。
- 美洲大蠊 /
- 核苷类成分 /
- HPLC
Abstract: Objective To determine the content of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract by HPLC. Methods We did degreasing the Periplaneta Americana L.powder with petroleum ether, ultrasonic extraction of 65% ethanol as solvent, acetonitrile dissolution formulated into the American dating test solution, The Agilent alkyl silica gel column （9.4 mm × 250 mm, 5 μm） was applied in HPLC determination with water and acetonitrile mixture （95∶5） as the mobilephase at the flow rate of 0.5 mL·min⁻¹. Detection wavelength was set at 254 nm, 10 μL sample was injected for analysis. Results The determination of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract by HPLC with high sensitivity, special properties, could be used for the content determination of this product. The concentration of 5 kinds of nucleoside in a certain range and peak area showed a good linear relationship （R² > 0.9941）, high precision, good repeatability, good stability, plus sample recovery rate is between 97.58% to 103.26%. Conclusion The experimental process of this method is simple, the results are reliable and stable, and it can be used as a method for determining the content of nucleoside components in Periplaneta Americana L.
- Periplaneta Americana L /
- Nucleoside components /
- HPLC

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图 1 混合对照品HPLC色谱图

①：胞嘧啶；②：尿嘧啶；③：次黄嘌呤；④：肌苷；⑤：鸟苷。

Figure 1. HPLC chromatogram of the mixed control sample

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图 2 美洲大蠊提取物HPLC色谱图

①：胞嘧啶；②：尿嘧啶；③：次黄嘌呤；④：肌苷；⑤：鸟苷。

Figure 2. HPLC chromatogram of Periplaneta Americana L. extract

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表 1 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的线性关系

Table 1. Linear relationship of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

项目	回归方程	线性关系（R²）	线性范围（mg/mL）
胞嘧啶	y = 0.007 3x + 0.0278	r = 0.9941	0.319～6.35
尿嘧啶	y = 0.004 7x + 0.0065	r = 0.9976	0.428～8.78
次黄嘌呤	y = 0.006 2x + 0.1234	r = 0.9952	0.376～7.69
肌苷	y = 0.012x – 0.3797	r = 0.9960	0.303～6.05
鸟苷	y = 0.064 7x – 0.8024	r = 0.9989	0.312～6.15

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表 2 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的精密度试验结果

Table 2. Precision test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	试验号						RSD%
成分	1	2	3	4	5	6	RSD%
胞嘧啶	365.792	423.643	416.442	413.774	412.357	412.128	1.57
尿嘧啶	870.134	914.263	887.035	912.631	913.537	914.524	1.63
次黄嘌呤	584.563	557.328	564.123	569.136	584.756	572.834	1.12
肌苷	363.120	335.537	335.126	338.764	341.269	339.258	1.62
鸟苷	57.424	61.637	63.142	57.423	60.730	61.157	1.53

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表 3 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的重复性试验结果

Table 3. Repeatability test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	试验号						RSD%
成分	1	2	3	4	5	6	RSD%
胞嘧啶	6.722	6.242	6.124	6.121	6.132	6.123	2.69
尿嘧啶	0.655	0.735	0.685	0.689	0.684	0.691	1.54
次黄嘌呤	2.435	2.524	2.433	2.538	2.392	2.386	2.72
肌苷	2.827	2.439	2.439	2.424	2.425	2.375	2.59
鸟苷	1.642	1.695	1.844	1.576	1.831	1.817	3.31

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表 4 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的稳定性试验结果

Table 4. Stability test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	时间（h）						RSD%
成分	0	6	12	24	48	72	RSD%
胞嘧啶	412.849	412.571	413.854	392.013	415.553	412.942	1.58
尿嘧啶	915.28	901.21	913.72	889.09	901.68	872.67	1.67
次黄嘌呤	581.59	582.13	569.81	557.62	582.49	580.21	1.12
肌苷	339.12	352.73	339.86	335.12	342.20	324.48	1.24
鸟苷	61.628	58.864	59.012	61.124	60.438	57.014	2.37

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表 5 加样回收率试验结果

Table 5. The results of recovery test

测定成分	样品中含量（μg）	加入对照品量（μg）	测得量（μg）	加样回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
胞嘧啶	82.56	30	111.45	98.66	98.82	3.42
		60	140.56	97.58
		90	172.75	100.23
尿嘧啶	78.53	40	118.42	99.86	99.82	2.54
		80	157.05	98.12
		120	199.68	101.47
次黄嘌呤	85.27	35	122.11	102.16	97.58	2.81
		70	148.98	92.62
		105	188.53	97.96
鸟苷	90.18	25	124.13	109.92	103.26	3.78
		50	140.62	100.49
		75	164.61	99.37
肌苷	86.73	32	120.08	101.56	100.84	3.07
		64	152.63	102.19
		96	181.66	98.77

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