HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量

赵从琪; 羊顺波; 李光达; 李琦华; 李玉鹏; 徐俊驹

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20210225

HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210225

1.
云南农业大学烟草学院，云南昆明　650201
2.
云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明　650201
3.
昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明　650500

基金项目: 国家自然科学基金资助项目（31760098）；云南省重大科技专项（生物医药）子课题基金资助项目（2018ZF0120105）；国家重点研发计划子课题基金资助项目上（2018YFC0807801-4）；云南省农业联合专项基金资助项目（2018FG001-023）

详细信息

作者简介:
赵从琪（1997～），女，云南保山人，在读硕士研究生，主要从事烟草化学研究和烟草植保研究

通讯作者:
李玉鹏，E-mail：liyupeng26@126.com

徐俊驹，E-mail：junjuxu007@126.com

中图分类号: R310
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出版历程
- 收稿日期: 2020-11-27
- 刊出日期: 2021-03-05

Determination of Five Nucleosides in Periplaneta Americana L. Extract by HPLC

1.
Colledge of Tobacco Science，Yunnan Agricultural University，Kunming Yunnan 650201
2.
College of Animal Science and Technology Yunnan Agricultural University，Kunming Yunnan 650201
3.
School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology of Natural Products，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500，China

摘要

摘要: 目的用HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量。方法用石油醚对美洲大蠊粉末进行脱脂，以65%的乙醇为溶剂进行超声提取，乙腈溶解配制成美洲大蠊供试品溶液，使用Agilent色谱柱（9.4×250 mm；5 μm），以纯水∶乙腈 = 95∶5为流动相，流速为0.5 mL/min，检测波长为254 nm，进样量取10 μL，对照混合标品和单一标品对美洲大蠊供试品溶液进行含量测定。结果用HPLC法测定美洲大蠊药材中五种核苷类成分含量，灵敏度高，专属性好，可用于本品的含量测定。5种核苷浓度在一定范围内与峰面积呈良好线性关系（R² > 0.9941），精密度高，重复性好，稳定性佳，加样回收率均在 97.58%～103.26%之间。结论该法实验过程简便、结果可靠、稳定，可用来测定美洲大蠊中核苷类成分的含量。
- 美洲大蠊 /
- 核苷类成分 /
- HPLC
Abstract: Objective To determine the content of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract by HPLC. Methods We did degreasing the Periplaneta Americana L.powder with petroleum ether, ultrasonic extraction of 65% ethanol as solvent, acetonitrile dissolution formulated into the American dating test solution, The Agilent alkyl silica gel column （9.4 mm × 250 mm, 5 μm） was applied in HPLC determination with water and acetonitrile mixture （95∶5） as the mobilephase at the flow rate of 0.5 mL·min⁻¹. Detection wavelength was set at 254 nm, 10 μL sample was injected for analysis. Results The determination of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract by HPLC with high sensitivity, special properties, could be used for the content determination of this product. The concentration of 5 kinds of nucleoside in a certain range and peak area showed a good linear relationship （R² > 0.9941）, high precision, good repeatability, good stability, plus sample recovery rate is between 97.58% to 103.26%. Conclusion The experimental process of this method is simple, the results are reliable and stable, and it can be used as a method for determining the content of nucleoside components in Periplaneta Americana L.
- Periplaneta Americana L /
- Nucleoside components /
- HPLC

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图 1 混合对照品HPLC色谱图

①：胞嘧啶；②：尿嘧啶；③：次黄嘌呤；④：肌苷；⑤：鸟苷。

Figure 1. HPLC chromatogram of the mixed control sample

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图 2 美洲大蠊提取物HPLC色谱图

①：胞嘧啶；②：尿嘧啶；③：次黄嘌呤；④：肌苷；⑤：鸟苷。

Figure 2. HPLC chromatogram of Periplaneta Americana L. extract

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表 1 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的线性关系

Table 1. Linear relationship of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

项目	回归方程	线性关系（R²）	线性范围（mg/mL）
胞嘧啶	y = 0.007 3x + 0.0278	r = 0.9941	0.319～6.35
尿嘧啶	y = 0.004 7x + 0.0065	r = 0.9976	0.428～8.78
次黄嘌呤	y = 0.006 2x + 0.1234	r = 0.9952	0.376～7.69
肌苷	y = 0.012x – 0.3797	r = 0.9960	0.303～6.05
鸟苷	y = 0.064 7x – 0.8024	r = 0.9989	0.312～6.15

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表 2 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的精密度试验结果

Table 2. Precision test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	试验号						RSD%
成分	1	2	3	4	5	6	RSD%
胞嘧啶	365.792	423.643	416.442	413.774	412.357	412.128	1.57
尿嘧啶	870.134	914.263	887.035	912.631	913.537	914.524	1.63
次黄嘌呤	584.563	557.328	564.123	569.136	584.756	572.834	1.12
肌苷	363.120	335.537	335.126	338.764	341.269	339.258	1.62
鸟苷	57.424	61.637	63.142	57.423	60.730	61.157	1.53

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表 3 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的重复性试验结果

Table 3. Repeatability test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	试验号						RSD%
成分	1	2	3	4	5	6	RSD%
胞嘧啶	6.722	6.242	6.124	6.121	6.132	6.123	2.69
尿嘧啶	0.655	0.735	0.685	0.689	0.684	0.691	1.54
次黄嘌呤	2.435	2.524	2.433	2.538	2.392	2.386	2.72
肌苷	2.827	2.439	2.439	2.424	2.425	2.375	2.59
鸟苷	1.642	1.695	1.844	1.576	1.831	1.817	3.31

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表 4 美洲大蠊提取物中5种核苷类成分的稳定性试验结果

Table 4. Stability test results of five nucleosides in Periplaneta Americana L. extract

成分	时间（h）						RSD%
成分	0	6	12	24	48	72	RSD%
胞嘧啶	412.849	412.571	413.854	392.013	415.553	412.942	1.58
尿嘧啶	915.28	901.21	913.72	889.09	901.68	872.67	1.67
次黄嘌呤	581.59	582.13	569.81	557.62	582.49	580.21	1.12
肌苷	339.12	352.73	339.86	335.12	342.20	324.48	1.24
鸟苷	61.628	58.864	59.012	61.124	60.438	57.014	2.37

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表 5 加样回收率试验结果

Table 5. The results of recovery test

测定成分	样品中含量（μg）	加入对照品量（μg）	测得量（μg）	加样回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
胞嘧啶	82.56	30	111.45	98.66	98.82	3.42
		60	140.56	97.58
		90	172.75	100.23
尿嘧啶	78.53	40	118.42	99.86	99.82	2.54
		80	157.05	98.12
		120	199.68	101.47
次黄嘌呤	85.27	35	122.11	102.16	97.58	2.81
		70	148.98	92.62
		105	188.53	97.96
鸟苷	90.18	25	124.13	109.92	103.26	3.78
		50	140.62	100.49
		75	164.61	99.37
肌苷	86.73	32	120.08	101.56	100.84	3.07
		64	152.63	102.19
		96	181.66	98.77

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参考文献(19)

[1]	清·孙星衍辑. 神农本草经[M] 第2卷. 北京: 商务印书馆, 1955: 576.
[2]	于珊珊,张华,张婷婷,等. 美洲大蠊药理作用及临床应用研究[J]. 辽宁中医药大学学报,2016,18(04):228-231.
[3]	戴云,曾茗,项朋志. 蜚蠊的药用价值[J]. 中药材,2005,28(9):848. doi: 10.3321/j.issn:1001-4454.2005.09.048
[4]	何正春,彭芳,宋丽艳,等. 美洲大蠊化学成分及药理作用研究进展[J]. 中国中药杂志,2007(21):2326. doi: 10.3321/j.issn:1001-5302.2007.21.031
[5]	李奇娟,王战国,刘巧,等. 美洲大蠊研究现状及其研究中关键问题分析与展望[J]. 中国中药杂志,2018,43(7):1507-1516.
[6]	Domínguez-Alvarez J,Mateos-Vivas M,Rodríguez Gonzalo E,et al. Determination of nucleosides and nucleotides in food samples by using liquid chromatography and capillary electrophoresis[J]. Trac Trends Anal Chem,2017,92(3):12-31.
[7]	李远辉. 康复新胃漂浮片的药学研究[D]. 成都: 成都中医药大学硕士论文, 2015.
[8]	蔡东,商琳琳,贾云宏,等. 胞嘧啶的合成研究进展[J]. 化工中间体,2009,5(2):20-23.
[9]	刘丽芳,金蓉鸾. HPLC法测定10种动物药中尿嘧啶,黄嘌呤,次黄嘌呤,脲苷的含量[J]. 中国中药杂志,1999,24(2):73-77. doi: 10.3321/j.issn:1001-5302.1999.02.003
[10]	刘国生,王玉娟,黄倩,等. 肌苷发酵过程腺嘌呤含量变化规律[J]. 食品科学,2013,34(15):194-197. doi: 10.7506/spkx1002-6630-201315040
[11]	何逵夫,马跃超,杜姗姗,等. 解淀粉芽胞杆菌关键酶基因过表达对鸟苷积累的影响[J]. 微生物学报,2012,52(6):718-725.
[12]	黄博,敬勇,张秀娟,等. HPLC法测定美洲大蠊药材中尿嘧啶、次黄嘌呤及肌苷的含量[J]. 中药材,2014,37(9):1537-1540.
[13]	罗廷顺,高孟婷,马芳芳,等. 美洲大蠊药理作用及临床应用研究进展[J]. 安徽农业科学,2012,40(10):219-221.
[14]	胡艳芬,吕小满,王玉梅,等. 美洲大蠊药用价值研究进展[J]. 医学综述,2008,14(18):2822-2824.
[15]	尹卫平,姜亚玲,李鹏飞,等. 昆虫美洲大蠊天然产物的研究及其化学分类学意义[J]. 河南科技大学学报:自然科学版,2012,33(5):101-104.
[16]	黄兰芳,郭方遒,梁逸曾,等. HPLC ESI-MS 测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量[J]. 中国中药杂志,2004,29(8):762. doi: 10.3321/j.issn:1001-5302.2004.08.015
[17]	马艳,汪宇,杨光照,等. 双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物的含量[J]. 中国药房,2008,19(30):2375.
[18]	李泳,余潮彬,张兆霞,等. 紫外可见分光光度法测定虫草素含量[J]. 广东化工,2012,39(11):186. doi: 10.3969/j.issn.1007-1865.2012.11.101
[19]	李静,朱静毅. 核苷类化合物含量测定方法的研究进展[J]. 天津药学,2013,25(6):53-55.

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[1]	王证德, 平措绕吉, 包环, 钱春博, 徐俊驹, 海梅荣. 芜菁的化学成分研究, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240607
[2]	杨璨瑜, 孙孔春, 王娟, 普惠萍, 沈报春. HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
[3]	张雪莎, 周杰, 李彩琳, 吴定宇, 彭芳. 美洲大蠊提取物对肝癌皮下移植瘤裸鼠自噬和侵袭转移的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231018
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[5]	荣娜娜, 李玉凤, 任李玥, 胡月新. RP-HPLC法测定诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210807
[6]	孙孔春, 陈兴龙, 杨璨瑜, 于浩飞, 胡炜彦, 王蕊, 沈报春, 张荣平. 不同条件下工业大麻中大麻二酚含量变化, 昆明医科大学学报.
[7]	马琛婧, 杨媛, 张冰琳, 周晓楠, 代蓉, 林青. 类器官的研究现状及应用前景, 昆明医科大学学报.
[8]	卢敏南, 杨学芳, 邓菊庆, 胡月新, 李璠, 吴林雄, 孔灿, 吴怡. HPLC指纹图谱联合化学计量学在不同产地云木香药材鉴别中的应用, 昆明医科大学学报.
[9]	黄荣, 陶永生, 张亮, 黄硕童, 娄方宁, 翁瑞旋, 叶吉云, 文小玲, 李玉鹏. 傣族药用植物竹叶兰中联苄和菲类成分研究（英文）, 昆明医科大学学报.
[10]	丁林芬, 王扣, 王海垠, 程彬, 晏通, 郭亚东, 宋流东. 旋覆花中倍半萜二聚体类成分研究, 昆明医科大学学报.
[11]	宋建玲. 大剂量激素冲击治疗重症狼疮患者感染分析, 昆明医科大学学报.
[12]	任朝凤. 大容量全肺灌洗治疗尘肺的疗效观察, 昆明医科大学学报.
[13]	王海垠. 大黄藤化学成分研究, 昆明医科大学学报.
[14]	余龙伍. 支气管动脉栓塞治疗大咯血的临床应用, 昆明医科大学学报.
[15]	王蕾. 翠柏的化学成分研究, 昆明医科大学学报.
[16]	周石桥. HPLC法间接测定肿瘤患者外周血DPD的活性, 昆明医科大学学报.
[17]	赵春梅. HPLC法测定大鼠血浆中甲硝唑的浓度, 昆明医科大学学报.
[18]	冷红琼. 云南产葛根HPLC指纹图谱研究, 昆明医科大学学报.
[19]	. HPLC法测定肿瘤患者外周血5-FU血药浓度, 昆明医科大学学报.
[20]	. HPLC法测定大鼠血浆中昂丹司琼含量, 昆明医科大学学报.