miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

刘洋; 廖婧; 卢又汇; 孙春意; 孟昱时

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20210307

miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210307

1.
昆明医科大学第二附属医院生殖医学科
2.
妇科，云南昆明　650101

基金项目: 国家自然科学基金资助项目（81860515）；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目[2018FE001（-055）]；云南省万人计划“青年拔尖人才”培养基金资助项目（云人社发[2018]73号）；云南省万人计划“名医专项”培养基金资助项目（云厅字[2018]11号）；云南省高层次卫生健康技术人才“妇产科学学科带头人”（D-2019004）

详细信息

作者简介:
刘洋（1979～），女，吉林四平人，博士，副主任医师，主要从事生殖内分泌与妇科恶性肿瘤研究工作；廖婧与刘洋对本文有同等贡献

通讯作者:
孟昱时，E-mail：km20150515@163.com

中图分类号: R737.31
计量
- 文章访问数: 5630
- HTML全文浏览量: 3173
- PDF下载量: 21
- 被引次数: 0
出版历程
- 收稿日期: 2020-12-26
- 刊出日期: 2021-04-09

Negative Regulation of hTERT Expression in Cervical Cancer Hela Cell Line by miR-21

1.
Dept. of Reproductive Medicine
2.
Dept. of Gynecology，The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Yunnan Kunming 650101，China

摘要

摘要: 目的通过观察在miR-21作用下hTERT的表达情况，探讨在宫颈癌HeLa细胞中miR-21对hTERT的调控作用。方法利用RT-PCR 法及West Blot 法分别检测HeLa中miR-21 的表达，以及hTERT蛋白的表达情况；通过实验设计，生成miR-21模拟物和 miR-21抑制剂，并分别设立两组的空白对照序列；将空转liposome2000 （lipo2000）设为对照组，利用脂质体 liposome2000包裹宫颈癌细胞株 HeLa并予以转染。在转染后24 h及时检测hTERT及蛋白的表达量。结果 HeLa细胞株中miR-21及hTERT表达阳性；转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组 hTERT mRNA相对表达水平分别为（0.51±0.33）、（0.69±0.19）、（1.33±0.39）、（0.83±0.26）和（0.58±0.16）；蛋白相对表达水平分别为（0.41±0.18）、（0.62±0.18）、（1.45±0.60）、（0.83±0.15）和（0.82±0.30）；模拟物组与其对照组及脂质体组相比较，hTERT mRNA及蛋白表达情况均较低且差异有统计学意义（P < 0.05）；相反，在抑制剂组与其对照组及脂质体组相比较中，hTERT mRNA及蛋白表达情况明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论通过检测发现miR-21及hTERT基因在HeLa细胞株中均呈现高表达状态；miR- 21可以调节hTERT mRNA 和蛋白表达水平，从而发挥负向调控hTERT的作用。
- miR-21 /
- hTERT /
- 宫颈癌 /
- HeLa /
- 负性调控
Abstract: Objective To observe the effect of miR-21 on hTERT expression in human cervical cancer Hela cell line, explore the regulatory effect of miR-21 on hTERT. Methods RT-PCR was used to detect the expressions of miR-21 and hTERT mRNA in human cervical cancer Hela cell line. West Blot was used to detect the expression of hTERT protein; miR-21 mimics, miR-21 inhibitor, mimics control and inhibitor control were designed and synthesized, then they were transfected into human cervical cancer Hela cell line after parceled by liposome 2000, blank liposome 2000 was designed as control group. The changes of expressions of hTERT mRNA and protein at 24 hours after transfection were detected. Results miR-21 and hTERT were positive in human cervical cancer Hela cell line; the relative expression levels of hTERT mRNA in mimics group, mimics control group, inhibitor group, inhibitor control group and liposome group at 24 hours after transfection were （0.51±0.33）, （0.69±0.19）, （1.33±0.39）, （0.83±0.26） and （0.58±0.16）, respectively; the relative expression levels of hTERT protein were （0.41±0.18）, （0.62±0.18）, （1.45±0.60）, （0.83±0.15） and （0.82±0.30）, respectively. The relative expression levels of hTERT mRNA and protein in mimics group were statistically significantly lower than those in mimics control group and liposome group （P < 0.05）. The relative expression levels of hTERT mRNA and protein in inhibitor group were statistically significantly higher than those in inhibitor control group and liposome group （P < 0.05）. Conclusions miR-21 and hTERT genes are highly expressed in HeLa cell lines. MiR-21 can regulate hTERT mRNA and protein expression levels, thus negatively regulating hTERT.
- miR-21 /
- hTERT /
- Cervical carcinoma /
- Hela /
- Negative regulation

HTML全文

图 1 miR-21及hTERTmRNA在HeLa细胞株中的表达（×100）

A：模拟物组；B：模拟物对照组；C：抑制剂组；D：抑制剂对照组；E：脂质体组

Figure 1. Expression of miR-21 and hTERTmRNA in HeLa cell line （×100）

下载: 全尺寸图片幻灯片

图 2 hTERT mRNA 在各组别细胞中的表达情况

Figure 2. Expression of hTERT mRNA in different groups of cells

下载: 全尺寸图片幻灯片

图 3 hTERT 蛋白在各组别细胞中的表达情况

Figure 3. hTERT protein expression in each group of cells

下载: 全尺寸图片幻灯片

表 1 hTERT mRNA 在各组别细胞中的表达情况（$\bar{x}\pm s$）

Table 1. Expression of hTERT mRNA in different groups of cells （$\bar{x}\pm s$）

组别	hTERT mRNA	t	P
模拟物组	0.51 ± 0.33	4.478	0.011
模拟物对照组	0.69 ± 0.19	4.478	0.011
抑制剂组	1.33 ± 0.39	5.387	0.005
抑制剂对照组	0.83 ± 0.26	5.387	0.005
脂质体组	0.58 ± 0.16
注：单因素多组间比较（F = 5.403，P = 0.002）。

下载: 导出CSV

表 2 hTERT 蛋白在各组别细胞中的表达情况（$\bar{x}\pm s$）（1）

Table 2. hTERT protein expression in each group of cells （$\bar{x}\pm s$）（1）

组别	实验结果	t	P
模拟物组	0.41 ± 0.18	5.072	0.0071
模拟物对照组	0.62 ± 0.18	5.072	0.0071
抑制剂组	1.45 ± 0.60	5.85	0.0043
抑制剂对照组	0.83 ± 0.15	5.85	0.0043
脂质体组	0.82 ± 0.30

下载: 导出CSV

表 2 hTERT 蛋白在各组别细胞中的表达情况（$\bar{x}\pm s$）（2）

Table 2. hTERT protein expression in each group of cells （$\bar{x}\pm s$）（2）

组别	hTERT蛋白	t	P
模拟物组	0.41 ± 0.18	5.072	0.007
模拟物对照组	0.62 ± 0.18
抑制剂组	1.45 ± 0.60	5.85	0.004
抑制剂对照组	0.83 ± 0.15
脂质体组	0.82 ± 0.30

下载: 导出CSV

参考文献(26)

[1]	梁静,张慧杰,张淑兰,等. 妊娠期宫颈上皮内瘤变筛查57例临床分析[J]. 中国计划生育和妇产科,2020,12(1):78-82,88. doi: 10.3969/j.issn.1674-4020.2020.01.17
[2]	韩钦,郭红燕,耿力. 宫颈癌机会性筛查人群中高危型HPV感染状况及其与宫颈病变关系的研究[J]. 实用妇产科杂志,2018,34(3):194-197.
[3]	陈静,刘红敏,居艳梅,等. 氢氧化钠预处理宫颈粘液性标本检测HPV的优越性[J]. 河北医药,2019,41(23):3578-3580,3584. doi: 10.3969/j.issn.1002-7386.2019.23.014
[4]	Wang F,Huang W,Hu X,et al. Transc-ription factor AP-2β suppresses cervical ca-ncer cell proliferation by promoting the de-gradation of its interaction partner β-catenin[J]. Molecular Carcinogenesis,2017,56(8):1909-1923. doi: 10.1002/mc.22646
[5]	Hao M,Zang M,Zhao L,et al. Serum high expression of miR-214 and miR-135b as novel predictor for myeloma bone disease development and prognosis[J]. Oncotarget,2016,7(15):19589-19600. doi: 10.18632/oncotarget.7319
[6]	陈光治,王晓娟,何燕,等. FOXM1、hTERC与C-myc在HPV阳性宫颈癌筛查意义[J]. 中国计划生育学杂志,2018,26(3):198-201.
[7]	Maojun Liu,Zining Li,Biao Liang,et al. Hydrogen sulfide ameliorates rat myocardial fibrosis induced by thyroxine through PI3K/AKT signaling pathway[J]. Endocrine Journal,2018,65(7):769-781. doi: 10.1507/endocrj.EJ17-0445
[8]	袁敏,黄焜,姚立丽,等. 高危型人乳头瘤病毒对宫颈病变治疗后监测临床意义研究[J]. 中华肿瘤防治杂志,2017,24(4):268-272.
[9]	Yao T,Lu R,Zhang J,et al. Growth arrest-specific 5 attenuates cisplatin-induced apoptosis in cervica cancer by regulating STAT3 signaling via miR-21[J]. J Cell Physiol,2019,234(6):9605-9615. doi: 10.1002/jcp.27647
[10]	Wang Y,Zhou S,Fan K,et al. MicroRNA-21 and its impact on signaling pathways in cervical cancer[J]. Oncol Lett,2019,17(3):3066-3070.
[11]	李民,李东儒,孙关,等. 反义miR-21 通过调控hTERT 表达抑制胶质瘤细胞生长[J]. 临床神经外科杂志,2013,10(5):277-280. doi: 10.3969/j.issn.1672-7770.2013.05.008
[12]	魏丽惠. 面向加速消除宫颈癌的挑战[J]. 中国妇产科临床杂志,2021,22(1):1-2.
[13]	张小燕,黄娟,李晓丽. 宫颈癌组织中miRNA-21表达与其发展及预后的关系[J]. 实用癌症杂志,2020,35(11):1790-1792,1796. doi: 10.3969/j.issn.1001-5930.2020.11.013
[14]	徐建萍,叶丽君,喻长法,等. miR-34a和miR-21在宫颈癌中的表达及其临床意义[J]. 中国卫生检验杂志,2020,30(11):1281-1283.
[15]	郑永波,刘佳渝,段李梅,等. miR-199b-3p通过靶向PLCε抑制前列腺癌细胞的恶性增殖[J]. 中国细胞生物学学报,2020,42(05):803-811.
[16]	Hammou R A,Kasmi Y,Ennaji M M. A computational approach to the study of interactions between proteins and miR10-b,miR-335,and miR-21 involved in breast cancer[J]. Contemp Oncol(Pozn),2019,23(4):220-225.
[17]	Bica-Pop C,Cojocneanu-Petric R,Magdo L,et al. Overview upon miR-21 in lung cancer:focus on NSCLC[J]. Cell Mol Life Sci,2018,75(19):3539-3551. doi: 10.1007/s00018-018-2877-x
[18]	Choi P J,Oskouian R J,Tubbs R S. The current understanding of microRNA's therapeutic,diagnostic,and prognostic role in chordomas: A review of the literature[J]. Cureus,2018,10(12):e3772.
[19]	Qiu Y F,Wang M X,Meng L N,et al. MiR-21 regulates proliferation and apoptosis of oral cancer cells through TNF-alpha[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci,2018,22(22):7735-7741.
[20]	苏俊玲,乌云,杨文静,等. miR-21通过负调节CYLD表达促进宫颈癌增殖[J]. 中国生育健康杂志,2019,30(06):534-540. doi: 10.3969/j.issn.1671-878X.2019.06.008
[21]	Xu L,Wu Z,Chen Y,et al. Micro RNA-21(miR-21)regulates cellular proliferation,invasion,migration,and apoptosis by targeting pten,reck and Bcl-2 in lung squamous carcinoma,gejiu city,China[J]. PLoS One,2014,9(8):e103698. doi: 10.1371/journal.pone.0103698
[22]	Yao Q,Xu H,Zhang Q Q,et al. MicroRNA-21 promotes cell proliferation and down-regulates the expression of programmed cell death 4(PDCD4)in HeLa cervical carcinoma cells[J]. Biochem Biophys Res Commun,2009,388(3):539-542. doi: 10.1016/j.bbrc.2009.08.044
[23]	王金华. 膀胱癌诊断及预后相关肿瘤标志物的研究进展[D]. 重庆: 重庆医科大学硕士学位论文, 2018.
[24]	Zhao Y,Cheng D,et al. Dual roles of c-Myc in the regulation of hTERT gene[J]. Nucleic Acids Res,2014,42(16):10385-10398. doi: 10.1093/nar/gku721
[25]	李春琳,张红平,王应海,等. hTERT基因多态性与宫颈癌前病变关联性研究[J]. 中华肿瘤防治杂志,2019,26(18):1323-1328.
[26]	Bachand F,Autexier C. Functional regions of human telomerase reverse transcriptase and human telomerase RNA required for telomerase activity and RNA-protein interactions[J]. Molecular and Cellular Biology,2001,21(5):1888-1897. doi: 10.1128/MCB.21.5.1888-1897.2001

相关文章(20)

[1]	孟丽燕, 王超群, 陈星慧, 何军晶, 牛雅茹, 马丽莎. 早期宫颈癌术后HPV持续感染的危险因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240422
[2]	郭妮, 张承, 洪超, 刘伟鹏, 姚宇峰, 严志凌. KRAS基因3′UTR多态性与云南汉族人群宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的相关性, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240203
[3]	潘虹, 邓都尉, 刘石林. 彩超Adler分级对宫颈癌的诊断分析及与病理指标的相关性, 昆明医科大学学报.
[4]	海燕, 美力班·吐尔逊, 阿仙姑·哈斯木. Pin1通过调控脂质代谢关键酶影响宫颈癌细胞的增殖及凋亡, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230107
[5]	谢芹, 赵春阳, 张葆溯, 赵洪波. 硫利达嗪抗宫颈癌的潜在作用机制, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220317
[6]	谭丁及, 尹洪莉, 朱锐, 张曦, 余鑫, 飞勇, 李昕, 段铭, 何亮, 杨宏英. 宫颈上皮内瘤变和宫颈癌患者的阴道微生态特点, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210821
[7]	张娟, 张红芸. 宫颈管搔刮术在宫颈癌筛查中的价值, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210822
[8]	卿清, 刘洋, 周红林. 宫颈癌筛查策略的研究进展, 昆明医科大学学报.
[9]	陈小霞, 谢环. 宫颈癌组织中miRNA-21、miRNA-127和miRNA-125a的表达变化及临床指导意义, 昆明医科大学学报.
[10]	于书慧, 高靖琰, 赵彪, 赵玉涛, 李娅. 大剂量分次照射致兔放射性心脏损伤中检测miRNA-21表达的意义, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201204
[11]	周栩茹, 王熙, 田洁, 谢玲玲, 许宏宇, 李晓兰. 黏附斑激酶在宫颈癌组织中表达及意义, 昆明医科大学学报.
[12]	刘洋, 黄娅娟, 廖婧, 孙春意, 翟淑娟, 周红林. 宫颈病变中应用FISH技术检测C-MYC基因及HC2技术、SPR技术检测HPV结果的相关性, 昆明医科大学学报.
[13]	翟淑娟, 潘景, 孙春意, 刘洋, 杨莹莹, 周红林. p62、OPTN在宫颈癌中的表达及其与HPV的相关性, 昆明医科大学学报.
[14]	胡滔, 洪颖, 陈红兰, 常业飞, 姜水, 习杨彦彬, 檀雅欣, 李珊, 刘光彩, 吴晓虹. miR-1对HR HPV 16~+/18~+宫颈癌细胞周期相关蛋白的调控, 昆明医科大学学报.
[15]	王琨. shRNA-Bmi1重组载体构建及其对胆囊癌裸鼠移植瘤hTERT表达的影响, 昆明医科大学学报.
[16]	何红芬. 宫颈锥切术治疗IaⅠ期宫颈癌患者术后病灶残余状况及其危险因素, 昆明医科大学学报.
[17]	魏洁. Twist在中晚期宫颈癌组织中的表达及临床意义研究, 昆明医科大学学报.
[18]	严志凌. 宿主p53基因多态性与HPV16 感染、宫颈癌发生发展的相关性, 昆明医科大学学报.
[19]	刘慧瑾. 宫颈癌组织Vimentin的表达与淋巴转移宫旁浸润的关系研究, 昆明医科大学学报.
[20]	黄雅. Brn-3a、PPAR-γ在宫颈癌及癌前病变中的表达, 昆明医科大学学报.