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不同胎龄、不同出生体重新生儿的首次肝功能指标的差异性

朱理佳 马晓丹 段江 李檬 黄永坤

吴疆, 马和, 江金鋆, 刘娜, 赵瑞欢, 何越峰. 砒霜厂工人砷暴露与EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA四个基因DNA损伤的关系[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(7): 29-33. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230717
引用本文: 朱理佳, 马晓丹, 段江, 李檬, 黄永坤. 不同胎龄、不同出生体重新生儿的首次肝功能指标的差异性[J]. 昆明医科大学学报, 2021, 42(3): 121-126. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210330
Jiang WU, He MA, Jinyun JIANG, Na LIU, Ruihuan ZHAO, Yuefeng HE. The Relationship between Arsenic Exposure and DNA Damage of EGFR,PTEN,Kras,and PIK3CA Genes in Arsenic Factory Workers[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(7): 29-33. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230717
Citation: Li-jia ZHU, Xiao-dan MA, Jiang DUAN, Meng LI, Yong-kun HUANG. Difference Analysis of First Liver Function Indexes of Newborns with Different Gestational Age and Birth Weight[J]. Journal of Kunming Medical University, 2021, 42(3): 121-126. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210330

不同胎龄、不同出生体重新生儿的首次肝功能指标的差异性

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210330
基金项目: 昆明医科大学第一附属医院博士基金项目(2019BS016)
详细信息
    作者简介:

    朱理佳(1990~), 女, 云南玉溪人,在读硕士研究生,主要从事儿科诊疗工作

    通讯作者:

    黄永坤,E-mail: hykkmyncnwd@163.com

  • 中图分类号: R725.7

Difference Analysis of First Liver Function Indexes of Newborns with Different Gestational Age and Birth Weight

  • 摘要:   目的   探讨不同胎龄、不同出生体重新生儿的首次肝功能指标的差异变化。   方法   回顾性分析204例不同胎龄早产儿、206例不同出生体重儿的首次肝功能指标总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、前白蛋白(PA)、胆碱酯酶(CHE)的变化。比较分析各组中和组间生化指标的差异。   结果   不同胎龄、不同出生体重新生儿的首次肝功能指标存在差异:(1)晚期早产儿、中期早产儿、极早产儿中TP、ALB依次递减(P < 0.05);CHE无统计学意义( P > 0.05)。晚期早产儿、中期早产儿的DBIL、GGT生成、排泄均比极早产儿好( P < 0.05)。(2)与正常出生体重儿比较,低出生体重儿仅TBA增高( P < 0.05);与极低出生体重儿比较,正常出生体重儿、低出生体重儿DBIL、CHE增高,但仅有低出生体重儿DBIL具有统计学意义( P < 0.05)。   结论   不同胎龄、不同出生体重新生儿随胎龄越小、体重越轻,肝脏功能越差。胎龄对肝脏功能的影响,远大于体重对肝脏功能的影响。
  • 砷是自然界分布非常广泛的一种非金属元素,其化合物可导致心血管疾病、糖尿病、癌症等多种疾病发病率增加[1-4]。无机砷(iAs)进入人体之后被人体代谢主要生成一甲基胂酸(monomethylarsenic acid,MMA)和二甲基胂酸(dimethylarsenic acid,DMA),代谢产物主要通过尿液排出,因此尿中的砷化物常常作为砷暴露的标志物,不同代谢产物所占的比例常常用来反映个体对砷的代谢能力,发现砷代谢的能力和砷暴露导致的疾病密切相关,无机砷容易代谢为一甲基胂酸,但一甲胂酸转化为二甲基胂酸受阻的群体砷暴露后DNA损伤更高,以及砷相关疾病的发病率更高[5-7]

    EGFR编码一种跨膜糖蛋白是蛋白激酶超家族的成员,该蛋白二聚化和酪氨酸自磷酸化,从而导致细胞增殖[8]。PTEN被鉴定为一种肿瘤抑制因子[9]。Kras编码一种小GTPase超家族成员的蛋白质[10]。PIK3CA基因编码的蛋白质是作为催化磷脂酰肌醇3-激酶一个亚基而发挥功能[11]。4个基因在癌症的发生、发展中均起重要作用,在多种肿瘤组织中就发现它们存在较高频率的突变[8-11]

    砷暴露会导致基因损伤从而导致基因突变,而上述的4个基因肿瘤中均存在突变,因此砷作为一种重要的环境致癌物,是否会导致EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤值得探讨,因此本研究探索了砒霜厂职业砷暴露工人EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤与尿砷及其代谢的关系。

    本调查研究采用病例对照研究方式。砷暴露工人来自砒霜厂。砒霜厂主要生产纯度为99%的三氧化二砷(As2O3),因此职业暴露较为单纯。对照组的人群来源于居住在距离工厂约10~50 km的村庄的农民,没有职业砷暴露史,3个月内没有其他明显的砷暴露途径。所有受试者的生活和经济条件相似,且与周围神经系统的退行性疾病和癌症无关。访谈结束后,研究人员收集了劳动工人的流行病学资料、血样、尿样。血液样本通过EDTA管采集,尿液样本通过塑料瓶采集。样本采集过程参照文献[12]。本研究通过昆明医科大学伦理委员会批准(批号KMMU2020MEC000)。

    检测尿液样本中3种砷(DMA、iAs和MMA)的水平。本检测方法的最小阈值是2 μg。采用尿肌酐试剂盒(jaffe法)检测尿肌酐。计算DMA、iAs和MMA与总砷(tAs)的比值(DMA%、MMA%和iAs%)。通过SMI、DMA%、MMA%和iAs%评估砷甲基化的效率[12]

    裂解外周血细胞并纯化基因组DNA。根据文卫华等[12-13]的实验方案,Q-PCR用于评估基因DNA损伤。预变性时间为10 min,其他PCR条件根据LC®96荧光定量系统的默认设置进行。在本实验方案中使用了以下寡核苷酸序列。Kras上游:GGCCTGCTGAAAATGACTGAATATAA,下游:AAAGAATGGTCCTGCACCAGTA; EGFR上游: CAACAGCACATTCGACAGCC,下游: GCATTTTCAGCTGTGGAGCC;PTEN 上游:AGACCATAACCCACCACAGC,下游: CACCAGTTCGTCCCTTTCCA;PIK3CA上游:GCTCAAAGCAATTTCTACACGAGA,下游: TCCATTTTAGCACTTACCTGTGAC;β-actin上游: CGGGAAATCGTGCGTGACAT, 下游:GAAGGAAGGCTGGAAGAGTG。-ΔCt值用于评估基因的损伤水平。

    经检验尿砷及其代谢产物、甲基化指数均不符合正态分布,数据表示为MP25P75)。将各数据进行对数转换,对数转换后数据服从正态分布,数据表示为$\bar x \pm s $,以此开展分析。通过Pearson相关分析DNA损伤与尿液砷含量的相关性。对照组和暴露组之间采用Studentt检验。所有统计均使用R3.4.1软件包进行。检验水准为α = 0.05。

    暴露组和对照组工人年龄、吸烟率、饮酒率的分布差异无统计学意义(P > 0.05)。而尿中iAs、MMA、DMA、MMA%、DMA%和 SMI在2组中差异具有统计学意义(P < 0.05),见表1

    表  1  受试人群的一般特征和尿砷水平($ \bar{x} \pm s $
    Table  1.  General characteristics and urinary arsenic levels of the test population ($ \bar{x} \pm s $
    变量对照组(n = 24)暴露组(n = 78)tP
    年龄(岁) 35.814 ± 3.241 36.531 ± 5.972 / /
    吸烟(是/否) 14/10 46/32 / /
    饮酒 (是/否) 11/13 38/40 / /
    iAs 0.439 ± 0.185 2.023 ± 0.464 16.291 < 0.001*
    MMA 0.379 ± 0.153 2.141 ± 0.489 17.355 < 0.001*
    DMA 1.124 ± 0.304 2.660 ± 0.516 13.824 < 0.001*
    iAs% 13.763 ± 11.392 17.457 ± 12.409 1.299 0.197
    MMA% 8.531 ± 2.322 19.150 ± 5.071 9.921 < 0.001*
    DMA% 77.712 ± 12.001 63.393 ± 12.291 −5.019 < 0.001*
    PMI 1.166 ± 1.290 1.614 ± 1.289 1.488 0.140
    SMI 10.010 ± 3.777 3.763 ± 2.126 −10.291 < 0.001*
      *P < 0.05。
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    暴露组工人EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤高于对照组,4个基因的平均损伤也高于对照组(P < 0.05),见表2

    表  2  受试人群的4个基因的损伤和平均损伤的比较($ \bar{x} \pm s $
    Table  2.  Comparison of damage and average damage of 4 genes in the test population ($ \bar{x} \pm s $
    变量对照组
    n = 24)
    暴露组
    n = 78)
    损伤变化tP
    EGFR 2.299 ± 0.118 2.514 ± 0.047 0.215 2.024 0.046*
    PTEN 2.432 ± 0.078 2.791 ± 0.065 0.359 2.884 0.005*
    Kras 2.468 ± 0.124 2.818 ± 0.060 0.350 2.718 0.008*
    PIK3CA 2.852 ± 0.061 3.225 ± 0.038 0.373 4.856 < 0.001*
    平均损伤 2.512 ± 0.075 2.837 ± 0.036 0.325 4.181 < 0.001*
      *P < 0.05。
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    分析EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤与尿中代谢产物含量关系,发现PTEN损伤与尿中iAs和MMA含量呈正相关,Kras与尿中MMA含量呈正相关,PIK3CA和平均损伤与尿中iAs、MMA和DMA含量均呈正相关,且差异具有统计学意义(P < 0.05),见表3

    表  3  3种砷化物含量与所有受试者基因DNA损伤水平的相关性
    Table  3.  Correlation between the levels of three arsenicals and the levels of genetic DNA damage in all subjects
    DNA 损伤iAsMMADMA
    rP rP rP
    EGFR0.1600.109 0.1570.116 0.1120.263
    PTEN0.2350.018*0.2370.016*0.1850.063
    Kras0.1820.0680.2000.044*0.1370.170
    PIK3CA0.3240.001*0.3190.001*0.2690.006*
    平均损伤0.2960.003*0.3020.002*0.2300.020*
      数据分析采用皮尔逊相关法,*P < 0.05。
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    分析EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤与尿中代谢产物百分比关系,发现iAs%与基因损伤不存在相关关系(P > 0.05),MMA%与4个基因DNA损伤和平均损伤均存在正相关,且差异具有统计学意义(P < 0.05),DMA%与Kras、PIK3CA、平均损伤存在负相关,且差异具有统计学意义(P < 0.05),见表4

    表  4  3种砷化物尿中的百分比与所有受试者基因DNA损伤水平的相关性
    Table  4.  3 Correlation between percentages of arsenic compounds in urine and levels of genetic DNA damage in all subjects
    DNA损伤iAs%MMA%DMA%
    rP rP rP
    EGFR0.0860.3880.2490.012*−0.1770.076
    PTEN0.0590.5540.3190.001*−0.1850.063
    Kras0.1100.2690.354< 0.001*−0.2410.015*
    PIK3CA0.1210.2240.3290.0001*−0.2400.015*
    平均损伤0.1250.2100.427< 0.001*−0.2850.004*
      数据分析采用皮尔逊相关法,*P < 0.05。
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    将样本按照二级甲基化指数的中位数分为2组,发现Kras、PIK3CA、平均损伤在高SMI组中较低(P < 0.05),见表5

    表  5  所有受试者按SMI水平分层的DNA损伤比较($ x \pm s $
    Table  5.  Comparison of DNA damage stratified at SMI level for all subjects ($\bar x \pm s $
    变量低SMI(n = 51)高SMI(n = 51)tP
    SMI[中位数(范围)] 2.654 (1.064-3.800) 7.444 (3.848-21.840) / /
    EGFR 2.550 ± 0.065 2.377 ± 0.063 1.914 0.059
    PTEN 2.811 ± 0.083 2.602 ± 0.070 1.932 0.056
    Kras 2.874 ± 0.081 2.596 ± 0.074 2.537 0.013*
    PIK3CA 3.252 ± 0.055 3.022 ± 0.042 3.345 0.001*
    平均损伤 2.872 ± 0.049 2.649 ± 0.047 3.282 0.001*
      *P < 0.05。
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    砷暴露可以导致肺癌、膀胱癌等多种疾病发生率显著提高,因为砷进入人体可以产生多重的效应[4, 14],其中导致DNA损伤是重要的效应之一[12-13],DNA损伤可能导致基因突变最终导致细胞癌变[1-3]。有文献采用彗星实验和微核试验的方法研究砷暴露对DNA和染色体的损伤[15-16],发现砷暴露导致了损伤的增强[17]。文卫华等[12-13]利用PCR的检测方法发现砷暴露导致p53基因DNA的损伤增加,笔者的研究证实砷暴露会增加EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤,结果是一致的,也再次证实砷对与癌变相关基因的影响。

    之前研究显示无机砷容易代谢为一甲基胂酸,但一甲胂酸转化为二甲基胂酸受阻的群体,其DNA损伤更为严重[12-13],基因表达变化更显著[12-13],而且砷相关疾病的发病率更高[5-7]。高SMI和DMA百分比较高均表示对砷代谢能力强,笔者的结果显示高SMI的群体DNA损伤较低,DMA百分比与DNA损伤呈负相关,与文献一致,结合文献说明代谢能力强的个体砷的有害效应较低[5-7, 18],对健康影响相对小。

    综上所述砷暴露和代谢能力影响了EGFR、PTEN、Kras、PIK3CA 4个基因DNA损伤,可能是砷致癌机制之一。

  • 表  1  早产儿各胎龄组间性别比较(n)

    Table  1.   Gender comparison between groups of each gestational age groups of preterm infants (n)

    组别 χ2 P
    晚期早产儿 88 73 1.306 0.253
    中期早产儿 21 11
    晚期早产儿 88 73 0.335 0.562
    极早产儿 7 4
    中期早产儿 21 11 0.014 0.904
    极早产儿 7 4
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    表  2  新生儿不同体重组间性别比较(n)

    Table  2.   Gender comparison between groups of different body weight of newborns (n)

    组别 χ2 P
    正常出生体重儿 30 19 0.425 0.514
    低出生体重儿 85 67
    正常出生体重儿 30 19 0.846 0.357
    极低出生体重儿 2 3
    低出生体重儿 85 67 0.496 0.480
    极低出生体重儿 2 3
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    表  3  晚期早产儿、中期早产儿及极早产儿组间首次肝功能指标的比较[( $\bar x \pm s$)/M(P25,P75)]

    Table  3.   Comparison of first liver function indexes among late preterm infants, mid-term preterm infants and very preterm infants [( $\bar x \pm s$)/M(P25,P75)]

    组别 晚期早产儿(n = 161) 中期早产儿(n = 32) 极早产儿(n = 11) F/Z P
    TBIL (μmol/L) 39.06 ± 22.69 47.03 ± 37.70 39.45 ± 9.48 −1.60 0.11
    DBIL (μmol/L) 8.24 ± 3.33 7.26 ± 3.30 6.41 ± 2.67 1.52 0.13
    IBIL (μmol/L) 28.70(20.80,36.50) 33.25(26.20,42.58)* 36.60(20.30,42.90) −2.24 0.013
    TP (g/L) 49.80(46.45,53.00) 48.25(44.20,50.95)* 45.10(43.20,47.80)*△ 2.57 0.014
    ALB (g/L) 34.65 ± 3.06 33.71 ± 3.11 30.99 ± 3.11*△ 1.58 0.12
    ALT (IU/L) 6.65 ± 4.13 5.09 ± 2.20* 4.27 ± 1.56* 3.07 0.00
    AST (IU/L) 45.27 ± 22.33 41.38 ± 16.01 52.18 ± 25.51 0.94 0.35
    ALP (IU/L) 194.07 ± 153.54 198.21 ± 55.53 217.00 ± 73.90 −0.15 0.88
    GGT (IU/L) 216.00(143.00,324.50) 226.00(125.25,325.75) 338.00(184.00,390.00)*△ −2.21 0.013
    TBA (μmol/L 11.83 ± 6.65 10.38 ± 5.67 15.64 ± 10.14 1.15 0.25
    PA (mg/L) 78.02 ± 26.93 81.91 ± 27.34 82.37 ± 36.18 −0.74 0.46
    CHE (IU/L) 5895.93 ± 1201.03 5775.41 ± 1070.81 5204.00 ± 1259.10 −0.53 0.60
      注:与晚期早产儿比较,*P < 0.05(方差分析), *P < 0.017(秩和检验);与中期早产儿比较, P < 0.05(方差分析), P < 0.017(秩和检验)。
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    表  4  正常出生体重、低出生体重与极低出生体重儿组间首次肝功能指标比较[( $\bar x \pm s$)/M(P25,P75)]

    Table  4.   Comparison of first liver function indexes between normal birth weight, low birth weight and very low birth weight infant groups [( $\bar x \pm s$)/M(P25,P75)]

    组别 正常出生体重儿(n = 49) 低出生体重儿(n = 152) 极低出生体重儿(n = 5) F/Z P
    TBIL (µmol/L) 37.60(32.55,41.10) 37.90(29.93,44.48) 43.60(37.45,56.20) −0.39 0.69
    DBIL (µmol/L) 8.50(5.35,11.25) 8.10(6.03,10.20) 4.30(1.95,8.25) −2.44 0.015
    IBIL (µmol/L) 29.30(21.20,35.75) 29.25(20.73,37.08) 38.50(30.70,53.15) 0.34 0.73
    TP (g/L) 50.05 ± 4.57 49.31 ± 4.66 48.74 ± 7.19 0.97 0.33
    ALB (g/L) 34.77 ± 2.99 34.21 ± 3.16 32.86 ± 4.89 1.08 0.28
    ALT (IU/L) 7.29 ± 4.89 5.96 ± 3.44 5.00 ± 1.87 1.76 0.08
    AST (IU/L) 44.31 ± 25.56 44.24 ± 19.68 68.80 ± 28.36*△ −2.32 0.04
    ALP (IU/L) 173.73 ± 45.78 202.87 ± 158.36 185.00 ± 62.00 1.27 0.21
    GGT (IU/L) 223.00(144.50,364.00) 214.50(139.25,324.00) 332.00(153.00,880.00) 0.31 0.76
    TBA (µmol/L 10.00 ± 4.54 12.39 ± 7.29* 12.08 ± 5.40 −2.72 0.01
    PA (mg/L) 81.58 ± 32.95 78.13 ± 25.74 70.20 ± 6.76 0.76 0.45
    CHE (IU/L) 6028.10 ± 1248.86 5810.41 ± 1255.84 5380.60 ± 795.79 1.06 0.29
      注:与晚期早产儿比较,*P < 0.05(方差分析), *P < 0.017(秩和检验);与中期早产儿比较, P < 0.05(方差分析), P < 0.017(秩和检验)。
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  • 收稿日期:  2020-12-14
  • 刊出日期:  2021-03-25

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