新型冠状病毒感染者咽拭子与粪便排毒规律及临床表现

黄瑛; 罗云; 武彦; 刘冰; 江姗; 何花

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20220112

新型冠状病毒感染者咽拭子与粪便排毒规律及临床表现

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220112

黄瑛¹,
罗云¹,
武彦¹,
刘冰²,
江姗²,
何花^1, ,

1.
昆明市第三人民医院感染性疾病科，云南昆明　650041
2.
大理大学公共卫生学院，云南大理　671000

基金项目: 昆明市科技局科研基金资助项目（2020-1-C-004）

详细信息

作者简介:
黄瑛（1965～），女，云南大理人，医学学士，主任医师，主要从事发热感染性疾病诊疗工作

通讯作者:
何花，E-mail：371366456@qq.com

中图分类号: R563.1
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出版历程
- 收稿日期: 2021-12-18
- 网络出版日期: 2021-12-20
- 刊出日期: 2022-01-15

The Regularity and Clinical Manifestations of Throat Swab and Fecal Detoxification in New Coronavirus Infected Patients

Ying HUANG¹,
Yun LUO¹,
Yan WU¹,
Bing LIU²,
Shan JIANG²,
Hua HE^{1
, ,}

1.
Dept. of Infectious Diseases，Kunming Third People’s Hospital，Kunming Yunnan 650041
2.
School of Public Health，Dali University，Dali Yunnan 671000，China

摘要

摘要: 目的通过分析咽拭子、粪便新冠病毒核酸均阳性者的临床表现，探索其临床特征及排毒规律，为临床诊疗提供依据。方法回顾性分析昆明市第三人民医院2020年2月至12月收治的59例新冠病毒感染者临床症状、实验室指标、咽拭子及粪便新冠病毒排毒规律。结果粪便阳性组：潜伏感染7例，首次咽拭子核酸阳性至有症状3～8 d（中位数4 d），持续阳性5例，反复阳性2例；咽拭子阳性后1～28 d粪便呈阳性（中位数6 d）。无症状5例，咽拭子持续阳性2例，反复阳性2例；咽拭子阳性后4～21 d粪便呈阳性（中位数6 d）。21例有症状者发病至咽拭子阳性1～21 d（中位数5 d），8例持续阳性4～20 d，10例反复阳性8～26 d；咽拭子阳性后4～29 d粪便呈阳性（中位数15 d）。粪便阴性组：潜伏感染6例，咽拭子阳性至有症状4～10 d（中位数5 d），持续阳性2例、反复阳性2例；4例无症状者咽拭子持续阳性1例、反复阳性1例；16例有症状者发病至咽拭子阳性1～16 d（中位数5.5 d），持续阳性3例、反复阳性10例。2组咽拭子核酸持续阳性时间有统计学差异（P < 0.05）、反复阳性时间无统计学差异（P > 0.05）；2组肺部CT表现有统计学差异（P < 0.05）；2组临床表现、肝功、肾功、心肌酶、血常规、CRP、T淋巴细胞等均无统计学差异（P > 0.05）。结论 2组症状体征、脏器功能损伤、炎症指标均无差异。病毒排毒规律性不强，但咽拭子及粪便均排毒者比仅咽拭子排毒者排毒持续时间更长，肺炎更多见。
- 新型冠状病毒感染者 /
- 咽拭子 /
- 粪便 /
- 病毒核酸
Abstract: Objective To explor the clinical characteristics and detoxification rules of the patients with COVID-19 nucleic acid positive by analyzing their clinical manifestations of throat swabs and fecal, so as to provide the evidence for the clinical diagnosis and treatment. Methods The clinical symptoms, laboratory indexes, and the detoxification of throat swab and faecal in 59 patients with COVID-19 infection admitted to Kunming Third People’s Hospital from February 2020 to December were retrospectively analyzed. Result Fecal positive group: In 7 cases of latent infection, the first pharyngeal swab nucleic acid was positive to symptomatic for 3～8 days （median 4 days）, 5 cases were continuously positive and 2 cases were repeatedly positive; The stool was positive 1～28 days after the pharyngeal swab was positive （median 6 days）. 5 cases were asymptomatic, 2 cases were continuously positive and 2 cases were repeatedly positive; The stool was positive 4～21 days after the pharyngeal swab was positive （median 6 days）. 21 symptomatic patients were positive for pharyngeal swab for 1～21 days （median 5 days）, 8 cases were continuously positive for 4～20 days, and 10 cases were repeatedly positive for 8～26 days; The stool was positive 4～29 days after the pharyngeal swab was positive （median 15 days）. Fecal negative group: In 6 cases of latent infection, pharyngeal swabs were positive to symptomatic for 4～10 days （median 5 days）, 2 cases were continuously positive and 2 cases were repeatedly positive; In 4 asymptomatic patients, pharyngeal swabs were continuously positive in 1 case and repeatedly positive in 1 case; In 16 symptomatic patients, the pharyngeal swab was positive for 1～16 days （median 5.5 days）, 3 cases were continuously positive and 10 cases were repeatedly positive. There was significant difference in the continuous positive time of the pharyngeal swab nucleic acid between the two groups （P < 0.05）, and there was no significant difference in the repeated positive time （P > 0.05）; There was significant difference in CT findings between the two groups （P < 0.05）; There was no significant difference in clinical manifestations, liver function, renal function, myocardial enzymes, blood routine, CRP and T lymphocytes between the two groups （P > 0.05）. Conclusion There is no difference in symptoms and signs, organ function injury and inflammatory indexes between the two groups. The regularity of virus detoxification is not strong, but those who detoxify with pharyngeal swabs and feces last longer than those who detoxify only with pharyngeal swabs, and pneumonia is more common.
- New Coronavirus infection /
- Pharyngeal swab /
- Faeces /
- Viral nucleic acid

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卵巢癌是一种常见的恶性肿瘤，影响当代妇女生命安全^[1]。据报道，2018年全球新增病例295 414例，受害者超过18万人，预计2020年全球OC的新发病例为308 069例，死亡约193.811例^[2]。除手术外，以铂类药物为主的化学治疗是目前卵巢癌主要治疗手段，但肿瘤耐对上皮性卵巢癌的化疗带来了极大的挑战，其调控机制十分复杂^[3-4]。

microRNA（miRNAs ）存在于多种生物体中，在细胞生存和肿瘤发生等过程中发挥重要的调控作用^[5-6]。随着对miRNAs研究，miRNAs参与卵巢癌的化疗中肿瘤耐性的作用及调控机制研究也日渐深入^[7]。miR-181a在肝癌、结肠癌、恶性脑胶质瘤、霍奇金淋巴瘤等肿瘤发生中发挥重要的调控作用^[8-10]，但其与卵巢上皮性癌（卵巢癌）化疗耐药及其机制的研究未见报道。PPKCD被证实是一种促凋亡蛋白激酶，与细胞周期进展有关且参与多种细胞进程，特别是在化疗耐受方面受到广泛关注^[11]。本研究通过功能获得性和缺失性研究，联合MicroRNA靶基因预测数据库分析，探讨miR-181a影响PRKCD基因表达及卵巢癌A2780/DDP细胞及A2780细胞的增殖，为卵巢癌靶向治疗奠定一定的理论基础。

1. 资料与方法

1.1 细胞与试剂

卵巢癌耐药细胞A2780/DDP及敏感细胞A2780均获赠于新疆医科大学第一附属医院肿瘤中心。1640培养基购自以色列BI公司。脂质体2000购买于美国LifeTechnologies公司。BCA蛋白定量试剂盒购自美国Thermo公司。PRKCD抗体、β-actin均购自美国Abcam公司。miR-181a mimics和inhibitors及阴性对照购买于美国Dharmacon公司。TaqManMicroRNA试剂盒，反转录试剂盒购自美国Life公司。

1.2 实验方法

1.2.1 实时定量PCR（qRT-PCR）

细胞达到适宜密度时，使用无菌细胞刮收集细胞沉淀，加入Trizol后对细胞进行总RNA的提取，随后按照相对应产品说明书，对RNA进行反转录以及目的基因的扩增。反应条件如下：94 ℃预变性2 min，94 ℃变性1 min，60 ℃退火30 s，70 ℃延伸15 s，执行35个循环，以U6作为内参照，根据2^-△△CT计算RNA相对表达量，并进行数据分析。每一组实验重复3次。引物序列如下，

miR-181a：上游5′ -TGCGGGTGCTCCGCTTCGGCAGC-3′ ，

下游5′ -GAGTGCAGGGTCCGAGGT-3′ ；

U6：上游5′ -CTCGCTTCGGCAGCACA-3′ ，

下游 5′ -AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′ 。

1.2.2 细胞转染

取1×10⁵个/孔的A2780及A2780/DDP细胞接种于6孔板内，按照预实验结果对上述两种细胞进行转染。分组情况如下，将A2780细胞分为3 组，分别为miR-181a inhibitor组（转染miR-181a inhibitor），inhibitorNC组（阴性对照），空白组（常规培养基培养）。将A2780/DDP细胞同样分为3组，分别为miR-181a mimics组（转染miR-181a mimics），mimicsNC组（阴性对照），空白组（常规培养基培养）。转染6 h后更换培养基，继续培养48 h，在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光亮度，随后采用Real-time PCR检测转染效率。

1.2.3 MTT

96孔板中加入适当密度的细胞，待细胞过夜贴壁后，向每孔中分别加入浓度不同的顺铂，浓度如下0、10、20、30、40、50 μmol/L，同一种浓度下设3个复孔。 20 μL MTT溶液添加至孔中，37 ℃环境中放置4 h，随后加入150 μL 的DMSO。酶标仪中设置波长570 nm，测定每个孔中的吸光度数值（OD），取3组平均值。细胞存活率（%）=（OD实验孔/OD对照孔）×100%，绘制细胞的生存曲线。

1.2.4 蛋白质提取及Western blot

向状态良好的细胞中加入100 μL强效RIPA裂解液在冰上裂解30 min，期间每隔10 min吹打一次，共3次，保证细胞裂解充分。用无菌的细胞刮将裂解液和细胞的混合物转移至EP管中离心，在BCA蛋白定量试剂盒的指导下进行蛋白定量，用于后续Western blot实验。

检测电泳设备无漏液后，每孔道添加30 µg蛋白，经过恒压湿转，将SDS-PAGE上的蛋白转移至PVDF膜上，封闭液封闭1 h，加入一抗4 ℃孵育过夜，抗体浓度分别为1∶500的PRKCD，1∶1000的β-actin。次日，使用HRP标记的二抗室温条件下孵育1 h，利用配制的ECL显影剂（A液∶B液 = 1∶1）于暗室下显影。

1.2.5 统计学处理

采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析；计量资料以均数±标准差（$\bar x \pm s $）表示，采用t检验或方差分析。以P < 0.05为差异具有统计学意义。

2. 结果

2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化

Real-timePCR技术检测显示miR-181a在A2780/DDP细胞中mRNA表达量低于A2780细胞（P < 0.05）（图1）。随后选取A2780/DDP细胞进行miR-181a mimics转染，选取A2780细胞进行miR-181a inhibitor转染。

图 1 miR-181a在两种卵巢癌细胞中qRT-PCR结果

与A2780细胞比较，^*P < 0.05。

Figure 1. The expression of miR-181a mRNA in A2780 and A2780/DDP cells

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2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较

利用qRT-PCR技术对转染miR-181ainhibitor和miR-181amimics的细胞进行检测，结果显示，与NC组相比，A2780细胞中miR-181a的表达明显被抑制（图2A）；A2780/DDP细胞后miR-181a的表达明显增强（图2B）。以上结果表明miR-181ainhibitor和miR-181amimics转染有效干预了A2780细胞和A2780/DDP细胞中miR-181a的表达，可应用于接下来的实验。

图 2 miR-181a在两种细胞中qRT-PCR结果

A：A2780细胞中miR-181a的mRNA相对表达量；B：A2780/DDP细胞中miR-181a的mRNA相对表达量。与空白对照组细胞比较，^*P < 0.05。

Figure 2. The transfection efficiency of miR-181a inhibitors and mimics

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2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测

MTT结果显示，抑制miR-181a后， A2780细胞的存活率随着DDP药物浓度（0、10、20、30、40、50 μmol/L）的增加明显提升（P < 0.05）（表1）。miR-181a 上调后，随着药物浓度的提高，A2780/DDP细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P < 0.05）（表2）。

表 1 A2780细胞在不同浓度顺铂作用下的MTT数值

Table 1. MTT results of A2780 cells treated with different concentrations of Cisplatin

组别	药物浓度(μmol/L)
组别	0	10	20	30	40	50
阴性对照组	96.48 ± 1.58	73.42 ± 1.82	52.36 ± 1.32	19.87 ± 2.63	11.28 ± 2.36	6.68 ± 1.72
低表达组	97.23 ± 1.22	86.72 ± 1.76*	79.52 ± 1.68*	69.86 ± 1.92*	49.62 ± 1.56*	20.27 ± 1.82*
t	−3.007	−12.026	−130.674	−121.951	−83.009	−235.386
P	0.10	0.01	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001
与阴性对照组比较，^*P < 0.05。

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表 2 A2780/DDP细胞在不同浓度顺铂作用下的MTT数值

Table 2. MTT results of A2780/DDP cells treated with different concentrations of Cisplatin

组别	药物浓度(μmol/L)
组别	0	10	20	30	40	50
阴性对照组	97.42 ± 1.42	92.85 ± 1.72	85.64 ± 1.87	82.48 ± 2.24	76.95 ± 1.98	61.12 ± 2.32
低表达组	97.16 ± 1.82	88.63 ± 1.87	84.72 ± 1.87	76.12 ± 1.87	59.72 ± 2.52	40.58 ± 2.78
t	1.126	48.728	0.6025	29.773	55.265	77.34
P	0.377	< 0.001	0.579	< 0.001	< 0.001	< 0.001

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2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响

利用TargetScan、miRDB与miRwalk数据库，对3个数据库进行交集得到517个基因，提示PRKCD可能为miR-181a的下游靶基因（图3），结合Western blot技术验证，结果表明A2780细胞转染miR-181a inhibitors后PRKCD蛋白表达明显增强；而miR-181a 表达上调后，A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白表达显著减少（图4）。提示PRKCD蛋白可能作为miR-181a的下游靶基因受其调控。

图 3 miR-181a靶基因预测韦恩图

Figure 3. Venn diagram of screening differentially expressed genes

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图 4 PRKCD蛋白在两种卵巢癌细胞中Western blot结果

A：A2780细胞中PRKCD的Western blotting结果；B：A2780/DDP细胞中PRKCD的Western blotting结果。

Figure 4. Expression of PRKCD protein in A2780 and A2780/DDP cells

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3. 讨论

卵巢癌是死率最高的妇科恶性肿瘤之一，5 a生存率仅为25％～30％，高死亡率的原因包括早期症状隐匿，约70％的患者确诊时已为中晚期，且缺乏行之有效的治疗手段^[12]。现阶段，以手术结合术后化疗药物治疗卵巢癌已经成为主流手段。但随着治疗周期的持续，肿瘤细胞对其敏感性也会逐渐下降，部分患者短时间之内发生复发，5 a生存率仍很低，疗效仍不理想。

近年来，随着RNA干扰技术的崛起，其作为一种重要工具和手段已经参与到基因诊断和靶点治疗。目前，研究发现卵巢癌化疗耐药与miRNAs表达谱特征密切相关，并且已证实多种miRNAs具有调控卵巢癌化疗敏感性的作用^[13-15]。miRNAs的研究不但揭示了这种生物学过程中的潜在机制，也为深入研究肿瘤耐药性机制提供了可能。miRNAs是细胞增殖、死亡、对抗外界应激和脂肪代谢的关键调节因子^[16]，有研究表明，miR-181a在结肠癌^[7]、淋巴瘤^[8]、肝癌^[9]、恶性脑胶质瘤^[10]中能够起到负性调节细胞恶性生物学行为的能力。虽然研究已证实miR-181a在头颈部肿瘤^[17]、小细胞肺癌^[18]等肿瘤耐药机制中扮演着重要角色，然而其在调节卵巢癌细胞耐药机制方面的研究报道较少。

本实验发现，miR-181a表达在卵巢癌A2780细胞中的表达高于卵巢癌A2780/DDP细胞（图1），故采用RNA干扰技术沉默A2780细胞中的miR-181a，相反，对A2780/DDP细胞中miR-181a过表达，通过qRT-PCR技术验证转染效率（图2）。将不同浓度顺铂添加至转染前后及空白组细胞中，结果提示下调miR-218的表达，细胞存活率显著提高，当耐药细胞株中miR-181a表达增高时，细胞存活率降低，表明miR-218在A2780细胞对顺铂的敏感性方面起到抑制作用。根据上述实验结果可以推测miR-181a能使卵巢癌细胞对顺铂的敏感性降低，从而影响卵巢癌细胞的化疗耐药。

PRKCD （蛋白激酶C δ），是最早发现的不依赖钙激活的蛋白激酶C的同工酶^[19]，是生长因子信号传导通路上的重要组成部分，能调节各种细胞功能，包括细胞增殖，分化，死亡^[20-21]。PRKCD的激活和细胞周期有关^[22]，且PRKCD的下调能够显著影响肿瘤的恶性进展^[23]。PRKCD在细胞凋亡中的作用已被广泛研究，而促进细胞凋亡的机制尚不明确，研究报道凋亡信号通路相关的几种蛋白可作为PRKCD的底物，其中包括促凋亡蛋白Smac和Tap63^[24]，抗凋亡蛋白Mcl‐1。在化疗药物治疗肿瘤机制研究中，PKCD被认为是细胞凋亡的重要媒介^[25]。采用TargetScan、miRDB与miRwalk等数据库分析，PRKCD基因可能是miR-181a的靶基因（图3），Ke等报道miR-181a通过抑制PRKCD的表达增加宫颈癌对放疗的耐药性^[26]，笔者的结果表明miR-181a与PRKCD蛋白表达之间可能存在负调控（图4），与预测结果及上述文献一致。

以上结果提示miR-181a在抑制卵巢癌细胞对顺铂的耐药性方面存在一定作用，且可能通过调控PRKCD表达来实现。但对于miR-181a在卵巢癌顺铂化疗耐药性及免疫治疗中的具体作用机制，以及其在卵巢癌预后方面的作用尚需进一步的研究。

表 1 粪便新冠核酸阳性病例与阴性病例临床表现比较[n（%）] （1）

Table 1. Comparison of clinical manifestations between fecal COVID-19 positive cases and negative cases [n（%）] （1）

粪便	发热	畏寒	咽痛	咽干	全身酸痛
阳性组	16（48.48）	2（6.06）	9（27.27）	8（24.24）	6（18.18）
阴性组	13（50.00）	3（11.54）	8（30.77）	3（11.54）	6（23.08）
χ²	0.01	0.56	0.09	1.54	0.22
P	0.91	0.65	0.77	0.21	0.64
n = 59。

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表 1 粪便新冠核酸阳性病例与阴性病例临床表现比较[n（%）] （2）

Table 1. Comparison of clinical manifestations between fecal COVID-19 positive cases and negative cases [n（%）] （2）

粪便	咯痰	咳嗽	气促	SaO₂（≤93%）	CT示肺炎病例数
阳性组	12（36.36）	18（54.55）	5（15.15）	9（27.27）	28（84.85）
阴性组	8（30.77）	11（42.30）	6（23.08）	3（11.54）	16（61.54）
χ²	0.20	0.87	0.60	2.22	4.17
P	0.65	0.35	0.44	0.14	0.04^*
n = 59，^*P < 0.05。

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表 2 粪便新冠核酸阳性病例与阴性病例实验室检查结果比较n = 59 [M（Q_R）]

Table 2. Comparison of laboratory test results between fecal COVID-19 positive cases and negative cases n = 59 [M（Q_R）]

项目（正常范围）	粪便核酸结果	[M（Q_R）]	Z	P
白细胞	+	4.94（1.79）	−0.61	0.54
（4～10）×10⁹/L	−	5.62（30.70）
淋巴细胞计数	+	1.46（0.88）	−0.53	0.60
（0.8～4）×10⁹/L	−	1.65（1.18）
中性粒细胞计数计数	+	3.09（2.33）	−0.46	0.65
（2～7）×10⁹/L	−	3.09（2.75）
嗜酸性粒细胞计数	+	0.06（0.11）	−0.38	0.71
（0.02～0.5）	−	0.05（0.10）
血小板（×10⁹/L）	+	250（121.50）	−1.79	0.07
（100～300）×10⁹/L	−	207（83）
CRP	+	1.30（4.87）	−0.04	0.97
（0～6）mg/L	−	1.35（12.04）
CD4+计数	+	414.50（545.75）	−1.58	0.11
（706～1125）个/μL	−	495（531.75）
CD3+计数	+	1004（640）	−0.12	0.91
（1027～2086）个/μL	−	1100（920.75）
CD8+计数	+	371（306）	−0.57	0.57
（323～836）个/μL	−	382（340）
尿素氮	+	3.50（1.40）	−1.72	0.09
（1.43～7.14） mmol/L	−	3.10（1.27）
肌酐	+	63.10（28.40）	−0.40	0.69
（35～97） μmol/L	−	63.50（25.40）
尿酸	+	290.5（128）	−0.91	0.37
（155～428） μmol/L	−	267.350（143.53）
r-谷氨酰氨基转移酶	+	25.20（20.90）	−0.55	0.58
（7～50） U/L	−	28.95（27.20）
丙氨酸氨基转移酶	+	22（13.50）	−0.21	0.83
（5～40） U/L	−	22.85（14.10）
门冬氨酸氨基转移酶	+	23（10.50）	−0.54	0.59
（8～40） U/L	−	23.5（10.50）
乳酸脱氢酶	+	176（26.50）	−1.25	0.21
（109～245） U/L	−	191（86.50）
肌酸激酶	+	79（47.10）	−1.48	0.88
（26～174） U/L	−	78.30（44）
肌红蛋白	+	17.44（10.02）	−0.38	0.71
（0～68） ng/mL	−	18.22（11.26）

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参考文献(9)

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[8]	薛泽润,尤海菲,栾阳,等. 新型冠状病毒肺炎住院和出院后不同标本中病毒核酸的检测[J]. 中华微生物学和免疫学杂志,2020,40(8):569-573.
[9]	关欣,关海霞,谷野,等. 新型冠状病毒肺炎患者核酸阳性持续时间延长可能与合并糖尿病相关[J]. 中华内分泌代谢杂志,2020,36(8):661-666.

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1. 资料与方法
1.1 细胞与试剂
1.2 实验方法
2. 结果
2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化
2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较
2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测
2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响
3. 讨论

1. 资料与方法
1.1 细胞与试剂
1.2 实验方法
2. 结果
2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化
2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较
2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测
2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响
3. 讨论

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[1]	章敏慧, 尹维丹, 胡竹林, 黎铧, 张利伟, 任玉玲. 新型冠状病毒感染相关急性黄斑神经视网膜病变的临床特征及预后, 昆明医科大学学报.
[2]	饶梅子, 蒋心怡, 缪佳蓉. 溃疡性结肠炎合并EB病毒和巨细胞病毒感染的危险因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20241113
[3]	向雪琳, 赵红瑞, 王中杰, 夏宇, 马敏, 王化丹, 何利平. 抗病毒治疗的HIV感染者社会支持状况及影响因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240924
[4]	赵红瑞, 向雪琳, 王中杰, 夏宇, 王化丹, 马敏, 何利平. 抗病毒治疗HIV感染者感知歧视影响因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20241212
[5]	吕松琴, 黄山, 马礼堂, 王秀, 张洪涛, 李钦, 万春平, 吕正超. 云南地区HIV/AIDS人群新型冠状病毒疫苗接种情况及接种意愿的调查, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240108
[6]	何海萍. 新型冠状病毒肺炎的老年患者的凝血功能指标分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240414
[7]	李重熙, 尹光凤, 张瑜书, 古善群, 张伟, 刘俊, 田波. 昆明地区HIV感染者抗病毒治疗前的肾病及影响因素, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220208
[8]	李冬玲, 李丽华, 普冬, 王红英, 余婷婷, 白经. 昆明地区COVID-19患者多种生物样本的病毒核酸检测结果, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220106
[9]	赵汉青, 钱石兵, 王孟琪, 杨镕羽, 段开文. 新型冠状病毒感染相关口腔损害, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220831
[10]	吴莉, 杨云辉, 张靖, 杨章聪, 苏宇, 温勇坚, 吴玉春, 王鹏, 李志鹏, 赵卫, 韩丹, 王瑞东, 何波. 输入性新型冠状病毒肺炎首诊影像学特点与临床严重度分级的相关性, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210708
[11]	杨云辉, 何波, 游顶云, 杨俊涛, 高茜. CT在早期预测新型冠状病毒肺炎不同临床分型的应用, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210524
[12]	李欢, 徐秋月, 王云娟, 苏洋, 唐睿珠. 利用逆转录环介导恒温扩增技术建立新型冠状病毒核酸快速检测方法, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210904
[13]	袁宇, 李翔. 2019型冠状病毒病之心肌损害述评, 昆明医科大学学报.
[14]	古利明, 曾勇, 陈俊辉, 王福平, 郝应禄, 吴海鹰, 阮继银, 李燕皎, 陈云, 夏婧, 孙佳, 胡隽源, 李薇, 余从涛, 马朝霞, 钱传云, 胡敏. 人脐带间充质干细胞联合抗病毒等方法治疗新型冠状病毒肺炎, 昆明医科大学学报.
[15]	叶文君, 王瑞珩, 曾小菊, 刘卫青, 刘芳. 新型冠状病毒肺炎时期普通人群的正念减压, 昆明医科大学学报.
[16]	马志强, 王霖, 罗煜, 瞿春燕, 李保萍, 马云珊, 董睿, 吴艳蓉, 赵金花, 许娅琳. COVID-19患者粪便核酸检测结果特征及其临床意义, 昆明医科大学学报.
[17]	李重熙, 刘俊, 白劲松, 田波, 于闵, 古善群. 直接抗病毒药物治疗人类免疫缺陷病毒感染合并丙型肝炎的疗效, 昆明医科大学学报.
[18]	马雪婷, 李娅. 新发现艾滋病病毒感染者/艾滋病患者 (HIV/AIDS) T淋巴细胞亚群分析, 昆明医科大学学报.
[19]	杨茜. 1995年至2011年开远市艾滋病病毒感染者流行病学特征分析, 昆明医科大学学报.
[20]	李克蓉. 腹泻患儿诺如病毒和轮状病毒感染96例临床特点分析, 昆明医科大学学报.

留言板

新型冠状病毒感染者咽拭子与粪便排毒规律及临床表现

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220112

作者简介:
黄瑛（1965～），女，云南大理人，医学学士，主任医师，主要从事发热感染性疾病诊疗工作

通讯作者:
何花，E-mail：371366456@qq.com

计量

The Regularity and Clinical Manifestations of Throat Swab and Fecal Detoxification in New Coronavirus Infected Patients

1. 资料与方法

1.1 细胞与试剂

1.2 实验方法

1.2.1 实时定量PCR（qRT-PCR）

1.2.2 细胞转染

1.2.3 MTT

1.2.4 蛋白质提取及Western blot

1.2.5 统计学处理

2. 结果

2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化

2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较

2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测

2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响

3. 讨论

计量

目录

1. 资料与方法

1.1 细胞与试剂

1.2 实验方法

2. 结果

2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化

2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较

2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测

2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响

3. 讨论

留言板

新型冠状病毒感染者咽拭子与粪便排毒规律及临床表现

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220112

作者简介: 黄瑛（1965～），女，云南大理人，医学学士，主任医师，主要从事发热感染性疾病诊疗工作

通讯作者: 何花，E-mail：371366456@qq.com

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出版历程

The Regularity and Clinical Manifestations of Throat Swab and Fecal Detoxification in New Coronavirus Infected Patients

1. 资料与方法

1.1 细胞与试剂

1.2 实验方法

1.2.1 实时定量PCR（qRT-PCR）

1.2.2 细胞转染

1.2.3 MTT

1.2.4 蛋白质提取及Western blot

1.2.5 统计学处理

2. 结果

2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化

2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较

2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测

2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响

3. 讨论

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出版历程

目录

1. 资料与方法

1.1 细胞与试剂

1.2 实验方法

2. 结果

2.1 miR-181a在A2780及A2780/DDP细胞中mRNA水平的变化

2.2 miR-181a mimics与inhibitors转染效率的比较

2.3 转染miR-181a后两种卵巢癌对顺铂耐药性的检测

2.4 miR-181a表达改变对A2780及A2780/DDP细胞中PRKCD蛋白的影响

3. 讨论

作者简介:
黄瑛（1965～），女，云南大理人，医学学士，主任医师，主要从事发热感染性疾病诊疗工作

通讯作者:
何花，E-mail：371366456@qq.com