留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

云南省傈僳族儿童乳牙龋的唾液微生物研究

拜娴 崔瑶 周庆 李晓丽 李玥晓 刘娟 张石楠

拜娴, 崔瑶, 周庆, 李晓丽, 李玥晓, 刘娟, 张石楠. 云南省傈僳族儿童乳牙龋的唾液微生物研究[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(3): 86-93. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220301
引用本文: 拜娴, 崔瑶, 周庆, 李晓丽, 李玥晓, 刘娟, 张石楠. 云南省傈僳族儿童乳牙龋的唾液微生物研究[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(3): 86-93. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220301
Xian BAI, Yao CUI, Qing ZHOU, Xiaoli LI, Yuexiao LI, Juan LIU, Shinan ZHANG. Salivary Microbial Profiles of Dental Caries among Lisu Preschool Children in Yunnan Province[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(3): 86-93. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220301
Citation: Xian BAI, Yao CUI, Qing ZHOU, Xiaoli LI, Yuexiao LI, Juan LIU, Shinan ZHANG. Salivary Microbial Profiles of Dental Caries among Lisu Preschool Children in Yunnan Province[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(3): 86-93. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220301

云南省傈僳族儿童乳牙龋的唾液微生物研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220301
基金项目: 云南省卫生内设研究机构项目[2016NS118]
详细信息
    作者简介:

    拜娴(1995~ ),女,云南禄丰人,在读硕士研究生,主要从事儿童口腔微生物研究工作

    通讯作者:

    张石楠,E-mail: zhangshinan@kmmu.edu.cn

  • 中图分类号: R788+.1

Salivary Microbial Profiles of Dental Caries among Lisu Preschool Children in Yunnan Province

  • 摘要:   目的   研究云南省5岁傈僳族高龋和无龋儿童的唾液优势菌,并分析与当地汉族儿童的差异。   方法   选取云南省怒江州傈僳族高龋(dmfs≥6)及无龋儿童(dmfs = 0)各20名,同时选取同样的高龋和无龋汉族儿童作为对照,采集唾液样本,运用illumina Hiseq平台对16SrRNA V4区进行单端测序,分析微生物的群落结构和多样性。   结果   基于97%的相似度聚类获得傈僳族、汉族高龋、无龋儿童口腔微生物物种注释(operational taxonomic unit,OTU)数目共3965个,归属于16个门,23个纲,57个目,102个科,202个属;4个组间Alpha多样性及丰富度指数差异无统计学意义(P > 0.05),4组菌群主坐标分析(principal co-ordinates analysis,PCoA分析)差异无统计学意义( P > 0.05);在傈僳族中,高龋组链球菌属( Streptococcus)丰度高于无龋组(P < 0.05),而嗜血杆菌属( Haemophilus)、志贺氏埃希菌属(Escherichia-Shigella)、梭杆菌属(Fusobacterium)丰度低于无龋组(P < 0.05);在高龋组中,傈僳族孪生球菌属( Gemella)丰度高于汉族(P < 0.05),志贺氏埃希菌属( Escherichia-Shigella)丰度低于汉族(P < 0.05)。   结论   云南傈僳族、汉族高龋无龋儿童的唾液微生物群落丰度、多样性、组成相似,但2个民族不同患龋状态有其特异性菌属,造成差异的原因需要进一步研究。
  • 口腔微生物区系是人体微生物组的重要组成部分,其中细菌是导致龋病的主要微生物[1-2]。诸多微生物代谢糖类产酸,当酸性产物超出唾液可缓冲能力时,牙体硬组织脱矿,产酸耐酸菌成为优势菌群,从而导致龋病的发生[3-4]。高通量测序技术 (High throughput sequencing)已成为研究口腔微生态和感染性疾病病因的常用手段。傈僳族是云南15个特有少数民族之一,中国第十九大少数民族,总人口有63.5万余,96.9%在云南(61万),主要集中在云南省怒江傈僳族自治州,聚居地多为地理位置偏僻的山区,具有独特的饮食结构和文化背景。2009年卢敏[5]的研究结果显示迪庆地区傈僳族3~6岁乳牙龋患率为50.6%;2014年唐红萍[6]的调查显示怒江地区傈僳族1~6岁乳牙龋患率为50.3%,为云南省15个特有少数民族中乳牙龋患率最高的民族;Shinan Zhang等[7]2019年对云南省5岁傈僳族儿童的龋病状况调查研究显示其患龋率高达80%。目前,尚无傈僳族口腔微生物的研究。因此,本研究采用16S rRNA基因高通量测序对云南省傈僳族口腔微生物的多样性和群落构成进行分析,并与当地汉族同龄儿童进行对照,为少数民族儿童龋病的预防和诊治提供参考依据。

    按照WHO口腔健康调查基本方法第5版龋病诊断标准,由2位受过规范培训并通过标准一致性检验的口腔医生(Kappa > 0.8)对怒江州6所幼儿园380名5岁儿童进行检查和记录,其中傈僳族儿童202名,汉族儿童178名。纳入标准 [8]:(1)高龋组dmfs ≥ 6;(2)无龋组dmfs = 0且牙齿未做过任何治疗;(3)全身健康,无系统性疾病;(4)无口腔粘膜和牙周疾病;(5)无釉质或牙本质矿化不全;(6)未佩戴正畸矫治器;(7)取样前1个月未接受抗生素治疗或涂氟等龋病防治治疗。最终选取符合条件的80例儿童,分为傈僳族高龋组(Lisu_CA),傈僳族无龋组(Lisu_CF),汉族高龋组(Han_CA),汉族无龋组(Han_CF),每组各20例。该研究获得昆明医科大学医学道德伦理委员会批准。

    向学校及家长说明研究目的及过程,学校及家长均知情同意。唾液采集时间为上午9时左右,采集前,先让受试者用20 mL生理盐水漱口1 min,自然口含唾液数分钟后,由同一名操作者将1支进行了编码的5 mL灭菌离心管置于受检者下唇黏膜处,收集非刺激性唾液。唾液收集1~3 mL后,向离心管滴入250 µL无菌石蜡油以隔绝空气,并在2 h内保存在-80 ℃冰箱中。

    室温下解冻样本,7500 r/min离心10 min,去净上清液,收集沉淀用于DNA提取。使用QIAamp DNA Mini Kit(Qiagen,Hilden,GER)试剂盒,提取细菌基因组DNA。使用分光光度仪检测基因组DNA的纯度、浓度。检测合格的DNA进行后续测序实验。

    细菌使用16SrRNA基因通用引物515F(5′ —TCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTGTGYCAGCMGCCGCGGTA—3′ )和806R(5′ —GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTGGACTACNVGGGTWTCTAAT—3′ ) 进行V4区目的基因扩增。PCR产物扩增用illumina Hiseq测序平台单端测序分析,由重庆市肿瘤医院完成。

    1.5.1   质量控制

    使用Qiime进行序列过滤,在Mothur中调用uchime去除嵌合体,最终获得用于分析的优质序列。

    1.5.2   群落结构分析

    对所有样本的优质序列按97%的相似度进行OTU聚类,采用RDP-classifier对OTU代表序列进行注释,得到并统计每个OTU的分类学信息及每个样本包含的OTU信息。(1)绘制稀释曲线,评估样本量是否充足,测序深度是否合理;(2)使用Mothur计算α多样性指数:Chao、ACE、Simpson和Shannon指数。Chao指数和ACE指数用于估计物种丰度,Chao指数在生态学中常用来估计物种总数,Ace指数是用来估计群落中OTU数目的指数,Simpson指数、Shannon指数用于计算菌群多样性,Simpson指数值越大,说明群落多样性越低;Shannon指数越大,说明群落多样性越高;(3)Qiime进行主成分分析(principal co-ordinates analysis,PCoA),一个点代表一个样本,两点间距离越近,说明样本间相似度越高,微生物群落差异越小;(4)使用Wilcox秩和检验(Wilcoxon rank-sum test)对2组样本的物种进行显著性差异分析,并对P值进行多种方法的校正;(5)使用PICRUSt对OTU丰度表进行标准化,再根据COG数据库的信息从eggNOG数据库中解析得到功能丰度谱。

    采用SPSS 24.0软件进行统计分析,采用χ2检验比较各物种检出率,使用秩和检验比较组间样本在不同分类水平上的含量,显著性水平设为0.05。

    通过Illumina HiSeq测序平台对傈僳族、汉族儿童口腔唾液样本进行生物多样性检测,共计获得27195786条测序Reads,平均读长252 bp。随着样本测序深度的增加,稀释曲线趋向平坦,可观察物种数目变化不大,表明测序覆盖良好,数据有效(图1)。按照 97%的相似性对各样本优质序列进行OUT聚类,共得到3965个OTUs,傈僳族2113个OTU,汉族2777个OTU,归属于16个门,23个纲,57个目,102个科,202个属。

    图  1  稀释曲线
    Figure  1.  Rarefaction curves

    图2可见:4个组ACE指数和Chao指数均较大,表明群落丰富度高,Shannon指数大,Simpson指数小,表明群落多样性较高,但差异均无统计学意义(P > 0.05)。

    图  2  唾液微生物Alpha多样性指数比较(mean±SD)
    A:ACE指数;B:Chao指数;C:Shannon指数;D:Simpson指数
    Figure  2.  Comparison of salivary microbial Alpha diversity index (mean±SD)

    用PCoA评价4组间细菌群落结构的相似性。4组样本间距离较近,有龋组与无龋组菌群结构差异无统计学意义(P > 0.05),傈僳族组与汉族组间差异无统计学意义( P > 0.05),见 图3

    图  3  唾液微生物群落结构的主坐标分析(基于97%相似度的OTU分类水平)
    Figure  3.  Principal co-ordinates analysis of the salivary microbial community structures (OTU classification level based on 97% similarity)

    通过silva132/16s_bacteria数据库进行相似性比对和物种注释,在门、属分类水平下对各样本物种丰度进行统计,分析表明傈僳族和汉族的高龋、无龋组优势菌门一致,分别是厚壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes),变形菌门(Proteobacteria),放线菌门(Actinobacteria),梭杆菌门(Fusobacteria),见图4。在属水平上,4组中含量大于1%的菌属一致,为以下15种:链球菌属(Streptococcus)、普氏菌属7(Prevotella_7)、罗氏菌属(Rothia)、奈瑟菌属 (Neisseria)、嗜血杆菌(Haemophilus)、牙龈卟啉菌属(Porphyromonas)、孪生菌属(Gemella)、韦永氏球菌属(Veillonella)、颗粒链菌属 (Granulicatella)、大肠志贺氏杆菌属(Escherichia-Shigella)、普氏菌属(Prevotella)、放线菌属(Actinomyces)、纤毛菌属 (Leptotrichia)、梭杆菌属 (Fusobacterium)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella),见图5

    图  4  门水平主要物种分布
    Figure  4.  The distributions of the predominant bacteria at the phylum level
    图  5  属水平主要物种分布
    Figure  5.  The distributions of the predominant bacteria at the genus level

    在检出率 > 1%的菌属中,傈僳族CA组的优势菌属为 Streptococcus,傈僳族CF组中HaemophilusEscherichia-Shigella、Fusobacterium含量显著高于傈僳族CA组(P < 0.05),见 图6。在汉族组中,CA组和CF组间各菌属无显著差异。在高龋组中,傈僳族Gemella丰度显著高于汉族(P < 0.05), Escherichia-Shigella丰度显著低于汉族(P < 0.05),见 图7

    图  6  傈僳族高龋、无龋组唾液微生物群落属分类水平上的组间Wilcoxon秩和检验
    Figure  6.  Wilcoxon rank-sum test between groups at the genus taxonomic level of salivary microbial communities in the Lisu_CA and Lisu_CF groups
    图  7  傈僳族、汉族高龋组唾液微生物群落属分类水平上的组间Wilcoxon秩和检验
    Figure  7.  Wilcoxon rank-sum test between groups at the genus taxonomic level of salivary microbial communities in the Lisu_CA and Han_CA groups

    4组样本的COG功能分类柱状图显示其微生物功能特征相似(图8)。其功能丰度由高到低分别是J翻译、核糖体结构和生物起源(8.95%);R一般功能预测(8.77%);E氨基酸运输和代谢(7.75%);L复制、重组和修复(7.7%);M细胞膜/细胞壁/胞外被膜的生物起源(7.33%);G碳水化合物运输和代谢(6.97%);P无机离子运输和代谢(5.85%);K转录(5.67%);C能量生产和转换(5.02%);O翻译后修饰、蛋白质转换、分子伴侣(4.3%);F核苷酸运输和代谢(4.0%);H辅酶运输和代谢(3.85%)。

    图  8  COG功能组成
    Figure  8.  COG functional components

    龋病影响全球各年龄段人群的最常见的多因素慢性疾病之一,据报道,全球有24亿人患龋,其中6.21亿是儿童[9]。严重的龋病不仅会影响患儿的生活质量,还会给家庭带来沉重的经济负担。龋病的预防策略是建立在对其病因的全面了解和有效控制危险因素的基础之上。下一代测序技术已成为人们了解口腔微生物组健康和疾病状态的有效工具[10-11],其以16srRNA基因的一个或多个区域为目标描述微生物群落,这些区域的高变性可以作为样本中细菌类群的良好标记。近年来,该方法被用于一系列探究龋病微生物群落的研究[12],从而更好地了解与龋病相关的微生物因素。唾液样本易于获取,可充分代表口腔中不同位点的微生物群落信息[13-14],被广泛运用于口腔微生态研究[15-16]

    饮食、水源、居住条件等环境因素的差异可直接或间接影响口腔微生物群落,此外,不同的宿主遗传背景对口腔微环境也有影响[17-18]。本研究选取同一地区傈僳族儿童及当地汉族儿童作为对照,对于研究口腔微生物对龋病的影响更有价值。傈僳族为云南15个特有少数民族之一,多聚居于云南西北部偏远地区,交通尚不发达,经济水平相对落后,饮食以玉米、荞麦为主。以往对云南少数民族儿童的研究主要集中于患龋状况及龋风险因素的调查,而其龋病唾液微生物群落结构却未有报道,本研究可为云南少数民族儿童口腔微生物多样性及群落结构的研究提供良好的数据信息。

    本实验中各样本克隆文库的覆盖率达99%,稀释曲线后段趋于平坦,说明本研究建立的克隆文库库容良好,可代表样本的真实情况; 所有样本ACE指数和Chao指数均大于500,Simpson指数小于0.15,Shannon指数大于3,说明所有样本的微生物群落丰富度和多样性均较好。主坐标分析表明4组样本距离较近,各组样本间菌群结构相似。这一发现与之前的一些研究结果一致[19-20]。也有其他研究表明,健康对照组显示出比患龋者更高的微生物多样性,这表明更多样化的群落可能对应于更健康的生态系统[21-22]。因此,这一结论仍然存在争议。样本量、测序方法、个体差异和其他一些因素都会影响结果。

    在门水平上,本实验的菌门分别为厚壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes),变形菌门(Proteobacteria),放线菌门(Actinobacteria),梭杆菌门(Fusobacteria),这与Jiang S[20]对有龋和无龋儿童唾液微生物研究中的发现一致,说明口腔中的细菌群落结构相对稳定,有龋及无龋并不会显著影响微生物的群落结构。在属水平上,4个组中含量超过1%的菌属一致,但相对丰度不同。这些结果支持“生态菌斑假说”,该假说认为龋病是常驻微生物动态平衡被破坏的结果,而不是特定微生物活动的结果[23-24]。有龋及无龋儿童的唾液及牙菌斑微生物研究在属水平上也发现了类似的菌群分布[20]

    链球菌属是自然界中分布较广,种类较复杂的一类革兰阳性球菌。在本研究所检测到的微生物中,链球菌属在4组样本中所占比例均最大,远大于其它各属所占的比例。其在傈僳族CA组中丰度显著较CF组多,提示链球菌属在龋病发生发展中确实起到促进作用[25],可作为儿童唾液菌群中龋病的潜在生物标志物。同时,傈僳族CF组中HaemophilusFusobacterium丰度显著高于CA组,这与Chen W等[26]的研究一致,这些物种可能对致龋菌起到拮抗作用。Gemella在傈僳族样本中整体丰度较高,在过去的研究中其在健康个体、患病个体中均有检出[27-28],因其包含9个物种,而二代高通量测序技术只能将物种精确注释到属水平,故Gemella在傈僳族儿童口腔微环境中的作用有待进一步研究。Escherichia-Shigella多在人类肠道中分布,已被证明是人类细菌性痢疾的致病菌[29],但其在口腔微环境中的作用尚不清楚,而它在人类口腔样本中的高丰度分布及在高龋、无龋样本中的显著差异表明其作为口腔优势菌属作用不容忽视。

    使用PICRUSt程序基于COG数据库进行功能预测。4个组均表现出相似的微生物功能特征,可能受到广泛分布的核心微生物群的影响。通过比较功能分类的相对丰度,笔者发现代谢功能在样本中富集,表明口腔细菌群落中的微生物代谢活跃。

    综上所述,本研究初步揭示了云南傈僳族、汉族高龋及无龋儿童口腔微生物的多样性、丰度和组成差异不大。但2个民族不同患龋状态儿童有特异性菌属。造成差异的原因需要进一步研究。

  • 图  1  稀释曲线

    Figure  1.  Rarefaction curves

    图  2  唾液微生物Alpha多样性指数比较(mean±SD)

    A:ACE指数;B:Chao指数;C:Shannon指数;D:Simpson指数

    Figure  2.  Comparison of salivary microbial Alpha diversity index (mean±SD)

    图  3  唾液微生物群落结构的主坐标分析(基于97%相似度的OTU分类水平)

    Figure  3.  Principal co-ordinates analysis of the salivary microbial community structures (OTU classification level based on 97% similarity)

    图  4  门水平主要物种分布

    Figure  4.  The distributions of the predominant bacteria at the phylum level

    图  5  属水平主要物种分布

    Figure  5.  The distributions of the predominant bacteria at the genus level

    图  6  傈僳族高龋、无龋组唾液微生物群落属分类水平上的组间Wilcoxon秩和检验

    Figure  6.  Wilcoxon rank-sum test between groups at the genus taxonomic level of salivary microbial communities in the Lisu_CA and Lisu_CF groups

    图  7  傈僳族、汉族高龋组唾液微生物群落属分类水平上的组间Wilcoxon秩和检验

    Figure  7.  Wilcoxon rank-sum test between groups at the genus taxonomic level of salivary microbial communities in the Lisu_CA and Han_CA groups

    图  8  COG功能组成

    Figure  8.  COG functional components

  • [1] Chenicheri S,R U,Ramachandran R,et al. Insight into oral biofilm:Primary,secondary and residual caries and phyto-challenged solutions[J]. Open Dentistry Journal,2017,11(1):312-333. doi: 10.2174/1874210601711010312
    [2] Grigalauskienė R,Slabšinskienė E,Vasiliauskienė I. Biological approach of dental caries management[J]. Stomatologija,2015,17(4):107-112.
    [3] 王玉霞,周学东,李明云. 韦荣球菌与龋病和链球菌间的关系[J]. 国际口腔医学杂志,2017,44(2):195-199. doi: 10.7518/gjkq.2017.02.016
    [4] Alazmah A. Early Childhood Caries: A Review[J]. J Contemp Dent Pract,2017,18(8):732-737.
    [5] 卢敏,房少华,刘锦桃. 云南16个地区12个民族3~6岁儿童乳牙患龋情况调查分析[J]. 中国妇幼保健,2009,24(1):2.
    [6] 唐红萍,杨发斌,杨燕槐,等. 云南省15个特有少数民族1~6岁儿童乳牙龋病调查分析[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志,2014,24(7):4.
    [7] Zhang S,Li Y,Liu J,et al. Dental caries status of Lisu preschool children in Yunnan Province,China:a cross-sectional study[J]. BMC Oral Health,2019,19(1):17. doi: 10.1186/s12903-018-0708-y
    [8] Becker M R,Paster B J,Leys E J,et al. Molecular analysis of bacterial species associated with childhood caries.[J]. Journal of Clinical Microbiology,2002,40(3):1001-1009. doi: 10.1128/JCM.40.3.1001-1009.2002
    [9] Zhou X,Li H,Zhu C,et al. Analysis of salivary proteomic biomarkers for the surveillance of changes in high-risk status of early childhood caries[J]. BMC Oral Health,2021,21(1):572. doi: 10.1186/s12903-021-01930-4
    [10] Al-Hebshi N N,Baraniya D,Chen T,et al. Metagenome sequencing-based strain-level and functional characterization of supragingival microbiome associated with dental caries in children[J]. J Oral Microbiol,2018,11(1):1557986.
    [11] Johansson I,Witkowska E,Kaveh B,et al. The microbiome in populations with a low and high prevalence of caries[J]. J Dent Res,2016,95(1):80-86.
    [12] Magana M,Sereti C,Ioannidis A,et al. Options and limitations in clinical investigation of bacterial biofilms[J]. Clin Microbiol Rev,2018,31(3):e00084-16.
    [13] Soriano-Lerma A,Pérez-Carrasco V,Sánchez-Marañón M,et al. Influence of 16S rRNA target region on the outcome of microbiome studies in soil and saliva samples[J]. Sci Rep,2020,10(1):13637. doi: 10.1038/s41598-020-70141-8
    [14] Leake SL,Pagni M,Falquet L,et al. The salivary microbiome for differentiating individuals: proof of principle[J]. Microbes Infect,2016,18(6):399-405.
    [15] Kaczor-Urbanowicz K E,Martin Carreras-Presas C,Aro K,et al. Saliva diagnostics - Current views and directions[J]. Exp Biol Med (Maywood),2017,242(5):459-472. doi: 10.1177/1535370216681550
    [16] Borkent D,Reardon RJM,McLACHLAN G,et al. A microbiome analysis of equine peripheral dental caries using next generation sequencing[J]. Equine Vet J,2020,52(1):67-75.
    [17] Choe R,Sim Y F,Hong C H L,et al. Internalizing problems are associated with oral health-related quality of life in early childhood:Outcomes from an Asian multi-ethnic prospective birth cohort[J]. PLoS One,2021,16(8):e0256163. doi: 10.1371/journal.pone.0256163
    [18] Pang L,Wang K,Tao Y,et al. A new model for caries risk prediction in teenagers using a machine learning algorithm based on environmental and genetic factors[J]. Front Genet,2021,12:636867. doi: 10.3389/fgene.2021.636867
    [19] Du Q,Ren B,He J,et al. Candida albicans promotes tooth decay by inducing oral microbial dysbiosis[J]. ISME J,2021,15(3):894-908. doi: 10.1038/s41396-020-00823-8
    [20] Jiang S,Gao X,Jin L,Lo EC. Salivary microbiome diversity in caries-free and caries-affected children[J]. Int J Mol Sci,2016,17(12):1978. doi: 10.3390/ijms17121978
    [21] Xu H,Tian J,Hao W,et al. Oral microbiome shifts from caries-free to caries-affected status in 3-year-old Chinese children:A longitudinal study[J]. Front Microbiol,2018,9:2009. doi: 10.3389/fmicb.2018.02009
    [22] Xiao C,Ran S,Huang Z,et al. Bacterial diversity and community structure of supragingival plaques in adults with dental health or caries revealed by 16S pyrosequencing[J]. Front Microbiol,2016,7:1145.
    [23] Zhang Y,Huang S,Jia S,et al. The predictive power of saliva electrolytes exceeds that of saliva microbiomes in diagnosing early childhood caries[J]. J Oral Microbiol,2021,13(1):1921486. doi: 10.1080/20002297.2021.1921486
    [24] Conrads G,About I. Pathophysiology of dental caries[J]. Monogr Oral Sci,2018,27:1-10.
    [25] Boisen G,Davies J R,Neilands J. Acid tolerance in early colonizers of oral biofilms[J]. BMC Microbiol,2021,21(1):45. doi: 10.1186/s12866-021-02089-2
    [26] Chen W,Jiang Q,Yan G,Yang D. The oral microbiome and salivary proteins influence caries in children aged 6 to 8 years[J]. BMC Oral Health,2020,20(1):295. doi: 10.1186/s12903-020-01262-9
    [27] Li Y,Zou C G,Fu Y,et al. Oral microbial community typing of caries and pigment in primary dentition[J]. Bmc Genomics,2016,17(1):558. doi: 10.1186/s12864-016-2891-z
    [28] Zhang Y,Zhu C,Feng X,Chen X. Microbiome variations in preschool children with halitosis[J]. Oral Dis,2021,27(4):1059-1068. doi: 10.1111/odi.13603
    [29] Belotserkovsky I,Sansonetti P J. Shigella and Enteroinvasive Escherichia Coli[J]. Curr Top Microbiol Immunol,2018,416:1-26.
  • [1] 黄宝川, 李武全, 唐毅.  云南烧伤中心1500例小儿烧伤患者流行病学分析, 昆明医科大学学报.
    [2] 王若宇, 陈伟, 许勋, 曹文德, 缪玉兰.  烧伤患儿329例流行病学调查及全身炎症反应综合征危险因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240519
    [3] 胡伟, 李金男, 杨伟, 苏黎, 喻卓, 陈志松.  儿童肌部室间隔缺损的介入治疗研究, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240307
    [4] 李海金, 李慧园, 刘新妙, 田玥, 李娜, 段正铖, 田新.  儿童高白细胞性急性淋巴细胞白血病的临床特征及预后分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240716
    [5] 尚晓丽, 倪俊学, 王耶盈, 单娇, 白娜, 王松.  肺炎支原体临床流行病学特征及其与气候环境相关性, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230618
    [6] 赵亚玲, 武坤, 黄蓉, 何根娅, 丁臻博, 张彩营.  基于新生儿脐血TEL-AML1融合基因检测的儿童急性白血病筛查体系的建立及意义, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230126
    [7] 李伟杰, 陈丽琴, 李亚玲, 韩永慧, 李小娟, 颜粉冬.  百日咳流行病学、临床特征和重症百日咳148例危险因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220824
    [8] 彭思思, 丁慧, 马丽娅, 吕扬, 段彦好, 阳磊, 张石楠.  昆明市大学生口腔健康状况调查, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210624
    [9] 世淑兰, 戴熙廷, 赵广周, 李小娟, 李荣杰, 麻明彪.  16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎早期诊断中的应用, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210522
    [10] 谭力, 李明, 孙宇星, 张桢, 甘政艳.  2 260例急性下呼吸道感染患儿人鼻病毒分子流行病学特征, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201233
    [11] 戴海龙, 王南, 陈晓晴, 何臻一, 冯晓岚, 光雪峰.  冠心病患者肠道菌群的特征, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201213
    [12] 崔瑶, 李玥晓, 李艳红, 刘波, 张石楠, 刘娟.  云南省农村5岁儿童龋病状况及其影响因素, 昆明医科大学学报.
    [13] 储雯, 王冰, 叶玮, 张一诺, 郭艳旭, 王誌璐, 王婉, 郝丽霞.  昆明市3~5岁儿童乳牙患龋状况, 昆明医科大学学报.
    [14] 孙建明, 董芳.  儿童急性淋巴细胞白血病化疗后的不良反应, 昆明医科大学学报.
    [15] 齐志业.  2000年至2010年昆明市儿童哮喘流行病学调查结果比较, 昆明医科大学学报.
    [16] 彭艺.  云南临沧480名拉祜族居民口腔健康调查, 昆明医科大学学报.
    [17] 盛晓翠.  儿童泌尿系感染的病原菌分析, 昆明医科大学学报.
    [18] 李秀云.  昆明地区5岁以下儿童博卡病毒和偏肺病毒感染的临床流行病学调查, 昆明医科大学学报.
    [19] 黄成.  学龄前儿童龋病流行病学特征及其防治效果观察, 昆明医科大学学报.
    [20] 欧阳欣.  昆明市区12岁儿童龋病调查及影响因素分析, 昆明医科大学学报.
  • 期刊类型引用(0)

    其他类型引用(1)

  • 加载中
图(8)
计量
  • 文章访问数:  3822
  • HTML全文浏览量:  2089
  • PDF下载量:  28
  • 被引次数: 1
出版历程
  • 收稿日期:  2022-01-15
  • 刊出日期:  2022-03-25

目录

/

返回文章
返回