活动性结核病外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征

万荣; 李光妹; 马萌; 赖明红; 刘才; 李明武

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20220420

活动性结核病外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220420

昆明市第三人民医院结核二科，云南昆明　650041

基金项目: 昆明市科学技术局科研基金资助项目（2019-1-S-25318000001392）

详细信息

作者简介:
万荣（1978～）女，湖北黄石人，医学硕士，副主任医师，主要从事结核病诊治及科研工作

通讯作者:
李明武，Ｅ-mail：ynkmlmw@sina.com

中图分类号: R521
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出版历程
- 收稿日期: 2022-02-21
- 网络出版日期: 2022-03-15
- 刊出日期: 2022-04-25

Clinical Features of Tuberculosis with Negative T Cell Spot Test in Peripheral Blood

Dept. of Tuberculosis，The 3rd People’s Hospital of Kunming，Kunming Yunnan 650041， China

摘要

摘要: 目的分析活动性结核病外周血结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）阴性病例的临床特征。方法以2019年1～12月在昆明市第三人民医院结核二科住院的经痰检、体液或组织标本检测结核病原学阳性且T-SPOT.TB阴性和同期收治T-SPOT.TB阳性活动性结核病为研究对象，T-SPOT.TB阴性病例组83例，T-SPOT.TB阳性病例组82例，比较2组病例的临床特征，同时比较常规几种实验检测方法的阳性率。结果 T-SPOT.TB阴性病例组与T-SPOT.TB阳性病例组，2组年龄、性别，差异无统计学意义（P > 0.05），但T-SPOT.TB阴性组与阳性组比较，超60岁的病患更多，达22.9%，差异无统计学意义（P > 0.05）；2组合并基础病方面，差异无统计学意义（P > 0.05），均以合并糖尿病多见；合并肺外结核2组均占一半左右，T-SPOT.TB阴性病例组以结核性胸膜炎多见，阳性病例组以气管结核更多见；细胞免疫相关检查，有近90%患者存在细胞免疫功能低下。所有病例均常规开展了抗酸杆菌涂片、TB-DNA、XpertMtb/RIF 、结核菌培养相关检查，在2组病例中，XpertMtb/RIF 阳性率均为最高，分别为77.1%和64.6%，均明显高于其他3种检测方法，差异有统计学意义（P < 0.001）。结论老年、合并肺外结核、免疫功能低下等可能是活动性结核病中T-SPOT.TB阴性的原因；XpertMtb/RIF 检测可用于结核病早期快速诊断优于其他常规检测方法。
- 活动性 /
- 结核病 /
- 结核感染 /
- T细胞斑点试验 /
- 阴性
Abstract: Objective To analyze the clinical features of active tuberculosis cases with negative T cell spot assay （T-SPOT.TB） in peripheral blood. Methods A total of 83 active tuberculosis patients admitted to the Second Department of Tuberculosis in Kunming Third People’ s Hospital from January to December 2019 who tested negative T-SPOT.TB were selected as the study subjects; another 82 active tuberculosis patients who tested positive T-SPOT.TB were selected as the control. The clinical characteristics of the two groups were compared, and the positive rates of several conventional experimental detection methods were compared. Results There was no difference in age and gender between the T-spot. TB negative group and the T-spot. TB positive group （P > 0.05）, however, there were more patients over 60 years old in the T-spot TB negative group （22.9%）, but there was no difference, in 2 groups （P > 0.05）. There was no difference in the comorbidity of the 2 groups, and diabetes was more common （ P > 0.05）. The incidence of extrapulmonary tuberculosis was about half in both groups; tuberculosis pleurisy was more common in the T-SPOT.TB negative group, and tracheal tuberculosis was more common in the positive group. Cellular immune related examination showed nearly 90% of patients have low cellular immune function. All cases were routinely tested for acid-fast bacilli smear, TB-DNA, XpertMtb/RIF and TB culture. In the 2 groups, the positive rate of XpertMtb/RIF was the highest （77.1% and 64.6%, respectively）, which was significantly higher than the other 3 detection methods. There was statistical difference （P < 0.001）. Conclusion Old age, complicating extrapulmonary tuberculosis, and low immune function may be the causes of T-SPOt-TB negative in active tuberculosis. XpertMtb/RIF test can be used for rapid early diagnosis of TB.
- Active /
- Tuberculosis /
- Tuberculosis infection /
- T cell spot assay /
- Negative

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白族是中国人口占比位列第13的少数民族，主要分布在云南中西部、贵州毕节、湖南张家界、湘西、四川凉山等地，其中云南是白族人口最多的省份。在云南，白族主要分布于大理州，该州是白族的发祥地、祖籍地和主要聚集地。根据2020年第七次人口普查，白族人口约为209.1543万人，其中中国80%以上的白族人口居住在云南省大理洱海地区（http://www.stats.gov.cn/tjsj/ndsj/2021/indexch.htm）。

受地域和风俗习惯的影响，白族可以分为3个分支：民家、勒墨和那马。白族勒墨和那马支系主要分布在怒江流域的兰坪县、维西县、福贡县等地，经济文化水平与怒族和傈僳族相近。白族民家支系则是白族人口最多的一支，主要居住在云南大理的洱海地区，深受中国汉文化的影响，具有较高的经济文化水平^[1]。

由于同一STR（short tandem repeat，STR）基因座中相同的等位基因在不同群体间基因频率分布存在差异，导致亲权鉴定和个体识别中关键法医学参数的计算值亦有不同，如亲权指数（paternity index，PI）和随机匹配概率（matching probability，Pm）等。因此，对不同种族和民族的人群进行基础遗传学数据的调查是非常有必要的。本研究选取2323名白族民家支系健康无关个体，对云南白族民家支系进行群体遗传调查，以期建立白族民家支系的法医遗传学参数，为司法鉴定工作中的亲子鉴定和个体识别提供基础数据。

1. 材料与方法

1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型

在签署知情同意书后，在云南省大理白族自治州洱源县和剑川县采集了2323名无亲属关系健康白族个体的血样或口腔拭子。采用DNATyper^TM19（公安部物证鉴定中心，中国）试剂盒，使用GeneAmpPCR System 9700 PCR仪（AB公司，美国）对18个常染色体STR基因座（D3S1358、D13S317、D16S539、Penta E、D18S51、CSF1PO、TH01、D2S1338、vWA、D21S11、D7S820、D5S818、D12S391、TPOX、D19S433、D8S1179、FGA和D6S1043）进行直接PCR复合扩增，同时设立灭菌纯水为阴性对照样本，9947A为阳性对照样本。PCR复合扩增所得到的产物使用AB 3130XL自动遗传分析仪（AB公司，美国）进行毛细管电泳分离，用GeneMapper ID-X 1.5 软件（AB公司，美国）进行STR分型。根据国际法庭科学遗传学会（international society for forensic genetics，ISFG）的规定对扩增产物进行分型和命名^[2-3]。

1.2 统计学处理

使用Modified-Powerstats软件^[4]统计等位基因频率（allele frequency，AF），并进行Hardy-Weinberg平衡（HWE）检验，采用Bonferroni多重校正，以P < 0.0028为差异有统计学意义。计算随机匹配概率（matching probability，Pm）、观测值杂合度（observed heterozygosity，Ho）、多态性信息含量（polymorphism information content，PIC）、个体识别能力（discrimination power，DP）、非父排除概率（probability of exclusion，PE）、亲权指数（paternity index，PI）等法医学参数。使用Arlequin v3.5软件计算遗传分化指数（Fst）和P值^[5]，采用Bonferroni多重校正，以P < 0.0033为差异有统计学意义。采用Phylip 3.698软件包计算白族民家支系与21个已发表人群的群体遗传距离（Nei’ s）（http://evolution.genetics.washington.edu/phylip.html）。基于Nei’ s遗传距离，应用Mega 7.0软件^[6]构建相邻连接（neighbour-joining，NJ）系统发育树。使用SPSS v24.0 统计软件（IBM公司，美国），进行多维尺度（multidimensional scaling，MDS）分析。

2. 结果

2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数

白族民家支系2323名无亲属关系个体18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数，见表1。在上述18个STR基因座中共检出230个等位基因和1073个基因型。等位基因频率分布在0.0002～0.5093之间。等位基因数量最少为7个（TPOX），最多为22个（Penta E）。经Bonferroni校正后，有17个基因座等位基因频率和基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡（P > 0.05/ 18 = 0.0028），D13S317基因座不符合Hardy-Weinberg平衡（P = 0.0008）。随机匹配概率（Pm）的范围为0.0166～0.2023。观测值杂合度（Ho）的范围为 0.6220～0.8993。多态性信息含量（PIC）在0.5641～0.8977之间。个体识别能力（DP）在0.7977～0.9834之间，累积个人识别能力（cumulative discrimination power，CDP）达到0.999999999。非父排除概率（probability of exclusion，PE）在0.3182～0.7939之间，累积非父排除率（cumulative probability of exclusion，CPE）达到0.99999994055。

表 1 白族民家支系18个STR基因座的等位基因频率及法医学参数（n = 2323）（1）

Table 1. Allele frequencies and forensic parameters of 18 STRs in Minjia branch of Bai ethnic minority （n = 2323）（1）

Allele	D3S1358	D6S1043	D13S317	Penta E	D16S539	D18S51	D2S1338	CSF1PO	TH01	vWA	D21S11	D7S820	D5S818	TPOX	D8S1179	D12S391	D19S433	FGA
5				0.0458					0.0009
6				0.0002					0.0846
7			0.0022	0.0011				0.0019	0.2833			0.0013	0.0217	0.0009
7.3
8		0.0011	0.2749	0.0110	0.0075			0.0009	0.0628			0.1291	0.0006	0.5093
8.1
9		0.0028	0.1369	0.0065	0.2400	0.0002		0.0426	0.4957			0.0719	0.0773	0.1244	0.0004		0.0037
9.1												0.0006
9.3									0.0454
10		0.0353	0.1440	0.0347	0.1104	0.0009		0.2374	0.0271			0.1614	0.1920	0.0239	0.0945		0.0006
10.1												0.0015
11		0.1197	0.2322	0.1894	0.3037	0.0026		0.2443	0.0002			0.3259	0.3250	0.3117	0.0771		0.0028
12	0.0004	0.1438	0.1627	0.1257	0.2163	0.0224		0.3898				0.2658	0.2331	0.0295	0.1156		0.0357
12.2																	0.0140
13	0.0013	0.1382	0.0366	0.0560	0.1089	0.2086		0.0766		0.0002		0.0362	0.1332	0.0004	0.2548		0.2785
13.2																	0.0517
14	0.0418	0.1203	0.0105	0.0859	0.0123	0.2023		0.0058		0.2286		0.0058	0.0157		0.1901		0.2499
14.2																	0.0977
15	0.3549	0.0129		0.0803	0.0009	0.1950		0.0006		0.0276		0.0004	0.0011		0.1722	0.0118	0.0687
15.2																	0.1429
16	0.3487	0.0009		0.0986		0.1319	0.0149			0.1746			0.0002		0.0755	0.0065	0.0133
16.2																	0.0355
17	0.1754	0.0502		0.0605		0.0809	0.0493			0.2566					0.0161	0.1009	0.0017	0.0006
17.2																	0.0024
17.3																0.0004
18	0.0710	0.1651		0.0678		0.0402	0.1009			0.2058					0.0037	0.2660	0.0006	0.0327
18.2																0.0002	0.0002
18.3																0.0009
19	0.0058	0.1455		0.0489		0.0390	0.1754			0.0876						0.2004		0.0439
20	0.0006	0.0478		0.0433		0.0224	0.1274			0.0181						0.1573		0.0654
20.2		0.0002																0.0006
20.3		0.0022
21		0.0062		0.0245		0.0183	0.0512			0.0011						0.0994		0.1009
21.1																		0.0002
21.2		0.0004																0.0077
21.3		0.0071
注：Pm: 随机匹配概率; DP: 个体识别能力; PIC: 多态性信息含量; PE: 非父排除概率;TPI: 典型亲权指数; Ho: 观测值杂合度；p-value: Hardy-Weinberg平衡（HWE）检验P值.

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表 1 白族民家支系18个STR基因座的等位基因频率及法医学参数（n = 2323）（2）

Table 1. Allele frequencies and forensic parameters of 18 STRs in Minjia branch of Bai ethnic minority （n = 2323）（2）

Allele	D3S1358	D6S1043	D13S317	Penta E	D16S539	D18S51	D2S1338	CSF1PO	TH01	vWA	D21S11	D7S820	D5S818	TPOX	D8S1179	D12S391	D19S433	FGA
22		0.0004		0.0084		0.0187	0.0420									0.0880		0.1707
22.2																		0.0065
23				0.0043		0.0084	0.2260									0.0536		0.2273
23.2																		0.0123
24				0.0045		0.0054	0.1446									0.0075		0.1672
24.2																		0.0170
25				0.0019		0.0022	0.0570									0.0060		0.0895
25.2																		0.0024
26				0.0009		0.0006	0.0095									0.0009		0.0426
26.2																		0.0013
27							0.0015				0.0024							0.0065
28							0.0002				0.0508							0.0045
28.2											0.0166
29											0.2484
29.2											0.0028
30											0.2652
30.1											0.0002
30.2											0.0230
30.3											0.0006
31											0.1007
31.2											0.0687
32											0.0284
32.2											0.1337
33											0.0024
33.2											0.0463
34.2											0.0093
35.2											0.0006
Pm	0.1292	0.0283	0.0654	0.0166	0.0837	0.0408	0.0348	0.1210	0.1654	0.0691	0.0495	0.0854	0.0823	0.2023	0.0468	0.0476	0.0542	0.0334
DP	0.8708	0.9717	0.9346	0.9834	0.9163	0.9592	0.9652	0.8790	0.8346	0.9309	0.9505	0.9146	0.9177	0.7977	0.9532	0.9524	0.9458	0.9666
PIC	0.6652	0.8639	0.7744	0.8977	0.7446	0.8311	0.8453	0.6781	0.6115	0.7703	0.8087	0.7400	0.7456	0.5641	0.8146	0.8131	0.7976	0.8491
PE	0.4315	0.7312	0.5548	0.7939	0.5403	0.6708	0.7029	0.4478	0.3745	0.5844	0.6384	0.5679	0.5610	0.3182	0.6401	0.6393	0.6148	0.7191
TPI	1.6785	3.7958	2.2294	4.9637	2.1509	3.0809	3.4263	1.7388	1.4872	2.4048	2.7921	2.3046	2.2641	1.3229	2.8056	2.7988	2.6101	3.6297
Ho	0.7021	0.8683	0.7757	0.8993	0.7675	0.8377	0.8541	0.7124	0.6638	0.7920	0.8209	0.7830	0.7792	0.6220	0.8218	0.8214	0.8084	0.8622
HWE（p-value）	0.1687	0.2066	0.0008	0.3332	0.1724	0.1348	0.3628	0.1954	0.7213	0.3084	0.3011	0.3009	0.9749	0.6396	0.0800	0.1155	0.1521	0.8597
注：Pm：随机匹配概率；DP：个体识别能力；PIC：多态性信息含量；PE：非父排除概率；TPI：典型亲权指数；Ho：观测值杂合度；p-value：Hardy-Weinberg平衡（HWE）检验P值。

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2.2 遗传分化指数（Fst）和P值

白族民家支系与21个已发表的人群^[7-26]在共有的15个STR基因座之间的遗传分化指数（Fst）和P值，见表2。经Bonferroni校正后（P < 0.05/15≈0.0033），白族民家支系与喀什地区维吾尔族、云南佤族和云南地区越南人群在14个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与广西侗族和印度人群在11个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与云南哈尼族在9个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与海南黎族和昌都藏族在8个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与伊犁地区维吾尔族在7个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与日本人群在6个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与云南汉族在3个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与云南布朗族和长沙汉族在2个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与四川汉族和纳西族在1个STR基因座上存在差异（P < 0.0033），与贵州仡佬族、彝族、宁夏回族、拉萨藏族、怒江白族和大理白族在各基因座上均无统计学差异（P > 0.0033）。

表 2 白族民家支系与21个已发表人群的Fst和P值（1）

Table 2. Pairwise Fst and P values between Minjia branch of Baiethnic minority and 21 published populations （1）

民族	STR基因座
	CSF1PO		D2S1338		D3S1358		D5S818		D7S820
	Fst	P	Fst	P	Fst	P	Fst	P	Fst	P
喀什地区维吾尔族	0.00323	< 0.00001^#	0.00541	< 0.00001^#	0.00311	< 0.00001^#	0.00659	< 0.00001^#	0.01279	< 0.00001^#
云南佤族	0.00248	0.00195^#	0.00708	< 0.00001^#	0.01609	< 0.00001^#	0.01171	< 0.00001^#	0.00165	0.00684^*
广西侗族	0.00068	0.04102^*	0.00309	< 0.00001^#	0.00422	< 0.00001^#	0.00177	< 0.00001^#	0.00702	< 0.00001^#
海南黎族	0.00050	0.19922	0.00632	< 0.00001^#	0.00509	< 0.00001^#	0.00268	0.00488^*	0.00223	0.01660^*
昌都藏族	0.00117	0.00879^*	0.00029	0.09473	0.28350	< 0.00001^#	0.00140	0.00488^*	0.00051	0.06543
四川汉族	−0.00129	0.83691	−0.00031	0.55566	−0.00077	0.60059	−0.00130	0.89355	−0.00030	0.46680
云南布朗族	0.00449	0.04102^*	0.00557	0.00391^*	0.00945	0.00293^#	0.00376	0.04688^*	−0.00037	0.48047
云南哈尼族	0.00217	0.02539^*	0.00441	< 0.00001^#	0.00162	0.04883^*	0.00318	0.00195^#	0.00168	0.02148^*
云南地区越南人群	0.01493	< 0.00001^#	0.00689	< 0.00001^#	0.02162	< 0.00001^#	0.00130	0.07617	0.02601	< 0.00001^#
贵州仡佬族	−0.00062	0.63477	−0.00046	0.66992	0.00161	0.09082	−0.00056	0.66504	0.00238	0.04004^*
云南汉族	−0.00025	0.72852	0.00050	0.04395^*	0.00083	0.03711^*	0.00056	0.07910	0.00369	< 0.00001^#
彝族	0.00007	0.33105	0.00031	0.26758	0.00074	0.19531	0.00050	0.25000	−0.00095	0.89062
纳西族	−0.00095	0.90430	−0.00023	0.57617	−0.00006	0.36816	0.00000	0.40332	0.00037	0.24023
日本人群	0.00214	0.01562^*	0.01237	< 0.00001^#	0.00326	0.00977^*	0.00084	0.10352	0.00425	< 0.00001^#
印度人群	0.00364	0.02734^*	0.00318	0.00488^*	0.00547	0.00488^*	0.00498	0.00391^*	0.01890	< 0.00001^#
宁夏回族	−0.00041	0.64453	0.00052	0.12402	0.00117	0.06641	0.00042	0.19043	0.00183	0.01562^*
伊犁维吾尔族	0.00387	0.03223^*	0.10822	< 0.00001^#	0.00544	0.01367^*	0.00796	0.00195^#	0.00851	< 0.00001^#
长沙汉族	0.00010	0.27051	0.00039	0.07031	0.00288	< 0.00001^#	0.00032	0.13379	0.00124	0.01074^*
拉萨藏族	−0.00197	0.85840	0.00085	0.23828	0.00083	0.25391	0.00214	0.13379	0.00019	0.36230
怒江白族	0.00440	0.09473	−0.00277	0.93262	−0.00212	0.71289	0.00262	0.17969	−0.00293	0.86816
大理白族	−0.00020	0.52148	−0.00050	0.97852	0.00034	0.20312	0.00006	0.35547	−0.00043	0.85742
即使在Bonforroni校正后，本研究人群与比较人群之间的Fst值也存在显著差异（^#P < 0.05/15 = 0.0033）；^*P < 0.05。

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表 2 白族民家支系与21个已发表人群的Fst和P值（2）

Table 2. Pairwise Fst and P values between Minjia branch of Bai ethnic minority and 21 published populations （2）

民族	STR基因座
	D8S1179		D13S317		D16S539		D18S51		D19S433
	Fst	P	Fst	P	Fst	P	Fst	P	Fst	P
喀什地区维吾尔族	0.00074	0.00781^*	0.01187	< 0.00001^#	0.00128	0.00195^#	0.00397	< 0.00001^#	0.00308	< 0.00001^#
云南佤族	0.00380	< 0.00001^#	0.00854	< 0.00001^#	0.00645	< 0.00001^#	0.00626	< 0.00001^#	0.00365	< 0.00001^#
广西侗族	0.01678	< 0.00001^#	0.00722	< 0.00001^#	0.00182	< 0.00001^#	0.00464	< 0.00001^#	0.00050	0.04395^*
海南黎族	0.01014	< 0.00001^#	0.00329	0.00293^#	0.00163	0.03223^*	0.00464	< 0.00001^#	0.00048	0.17383
昌都藏族	0.00132	0.00098^#	0.13054	< 0.00001^#	0.00113	0.00879^*	0.00509	< 0.00001^#	0.00144	< 0.00001^#
四川汉族	−0.00053	0.58496	−0.00084	0.73633	0.00581	0.00293^#	0.00041	0.24707	−0.00102	0.83691
云南布朗族	0.00219	0.09961	0.00074	0.27734	0.00351	0.07031	−0.00175	0.93945	0.00425	0.01953^*
云南哈尼族	0.00493	< 0.00001^#	0.00244	0.00391^*	0.00457	0.00098^#	0.00544	< 0.00001^#	0.00236	0.00293^#
云南地区越南人群	0.03193	< 0.00001^#	0.03207	< 0.00001^#	0.01673	< 0.00001^#	0.00364	0.00098^#	0.01629	< 0.00001^#
贵州仡佬族	0.00044	0.24512	0.00053	0.21973	−0.00102	0.88086	−0.00025	0.53125	0.00009	0.37012
云南汉族	0.00442	< 0.00001^#	0.00097	0.01172^*	0.00094	0.01172^*	0.00046	0.06152	0.00033	0.12012
彝族	0.00046	0.23145	0.00184	0.04883^*	−0.00035	0.55273	0.00115	0.09668	0.00155	0.05566
纳西族	0.00516	< 0.00001^#	−0.00113	0.99707	0.00114	0.10840	−0.00030	0.61719	−0.00018	0.51855
日本人群	0.00392	< 0.00001^#	0.00143	0.03516^*	0.02029	< 0.00001^#	0.00092	0.05664	0.00175	0.01855^*
印度人群	0.07056	< 0.00001^#	0.01050	< 0.00001^#	0.00631	< 0.00001^#	0.14905	< 0.00001^#	0.00632	< 0.00001^#
宁夏回族	0.00001	0.39844	0.00136	0.04785^*	0.00021	0.27539	0.00090	0.06348	−0.00029	0.65137
伊犁维吾尔族	0.00284	0.02734^*	0.01284	< 0.00001^#	0.00132	0.12793	0.00412	0.00391^*	0.00345	0.02734^*
长沙汉族	0.00194	< 0.00001^#	0.00084	0.03027^*	0.00143	0.00391^*	0.00050	0.04688^*	−0.00001	0.39648
拉萨藏族	0.00047	0.28320	0.00874	0.00488^*	0.00253	0.10156	0.00456	0.01953^*	0.00389	0.03223^*
怒江白族	−0.00176	0.73047	0.00081	0.29980	0.00307	0.14160	0.00013	0.39648	0.00289	0.13477
大理白族	0.00092	0.04004^*	−0.00044	0.87500	0.00015	0.29590	−0.00036	0.86328	0.00012	0.29785
注：黑色加粗的值表明，即使在Bonforroni校正后，本研究人群与比较人群之间的Fst值也存在显著差异（^#P < 0.05/15 = 0.0033）；^*P < 0.05。

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表 2 白族民家支系与21个已发表人群的Fst和P值（3）

Table 2. Pairwise Fst and P values between Minjia branch of Bai ethnic minority and 21 published populations （3）

民族	STR基因座
	D21S11		FGA		TH01		TPOX		vWA
	Fst	p	Fst	P	Fst	P	Fst	p	Fst	P
喀什地区维吾尔族	0.00410	< 0.00001^#	0.00212	< 0.00001^#	0.04589	< 0.00001^#	0.00207	0.00098^#	0.00704	< 0.00001^#
云南佤族	0.00520	< 0.00001^#	0.00407	< 0.00001^#	0.00953	< 0.00001^#	0.02182	< 0.00001^#	0.19039	< 0.00001^#
广西侗族	0.00069	0.00977^*	0.00471	< 0.00001^#	0.00171	< 0.00001^#	0.00096	0.03809^*	0.01037	< 0.00001^#
海南黎族	0.00127	0.04297^*	0.00395	< 0.00001^#	0.00453	0.00098^#	0.00347	0.01172^*	0.00447	< 0.00001^#
昌都藏族	0.00052	0.05762	0.00213	< 0.00001^#	0.00136	0.00781^*	0.01058	< 0.00001^#	0.00314	< 0.00001^#
四川汉族	0.00036	0.29492	0.00112	0.13867	−0.00142	0.92090	−0.00119	0.75684	−0.00105	0.81738
云南布朗族	0.00462	0.01074^*	0.00144	0.13281	0.01066	0.00488^*	0.02201	0.00098^#	0.00084	0.23535
云南哈尼族	0.00526	< 0.00001^#	0.00487	< 0.00001^#	0.00075	0.14160	0.01292	< 0.00001^#	0.00207	0.01465^*
云南地区越南人群	0.00664	0.00098^#	0.01939	< 0.00001^#	0.00954	< 0.00001^#	0.04698	< 0.00001^#	0.01099	< 0.00001^#
贵州仡佬族	0.00035	0.26562	−0.00033	0.58984	−0.00027	0.44922	−0.00092	0.71582	0.00086	0.17773
云南汉族	−0.00011	0.58691	0.00062	0.02441^*	0.00015	0.22559	0.00046	0.12402	0.00161	0.00195^#
彝族	−0.00034	0.60840	−0.00115	0.99414	0.00104	0.13965	−0.00059	0.57422	0.00060	0.21973
纳西族	0.00150	0.04590^*	0.00048	0.19922	0.00039	0.25195	0.00037	0.24023	−0.00049	0.70020
日本人群	0.00346	< 0.00001^#	0.00073	0.08887	0.02701	< 0.00001^#	0.00314	0.01758^*	−0.00049	0.75488
印度人群	0.01773	< 0.00001^#	0.00474	0.00098^#	0.07503	< 0.00001^#	0.03121	< 0.00001^#	0.01042	< 0.00001^#
宁夏回族	0.00024	0.26074	0.00028	0.22363	0.00024	0.22852	0.00034	0.20703	0.00080	0.09277
伊犁维吾尔族	0.06856	< 0.00001^#	0.00305	0.01660^*	0.05871	< 0.00001^#	0.00044	0.27148	0.00944	< 0.00001^#
长沙汉族	0.00015	0.22363	0.00025	0.15430	0.00040	0.12793	−0.00013	0.47656	0.00077	0.02734^*
拉萨藏族	0.00042	0.32520	0.00294	0.04883^*	−0.00087	0.54883	0.00713	0.03125^*	−0.00062	0.51953
怒江白族	−0.00227	0.83887	0.00278	0.11523	−0.00052	0.42871	0.00201	0.20020	−0.00349	0.96777
大理白族	0.00150	0.00977^*	−0.00018	0.63574	0.00062	0.12695	−0.00016	0.47559	−0.00060	0.99121
即使在Bonforroni校正后，本研究人群与比较人群之间的Fst值也存在显著差异（^#P < 0.05/15 = 0.0033）；^*P < 0.05。

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2.3 Nei’s遗传距离

根据个体之间共享等位基因片段的数量计算Nei’s遗传距离。白族民家支系与云南布朗族和云南佤族相距较远，而与大理白族和怒江白族相距较近，见表3。

表 3 白族民家支系与21个已发表人群的Nei's遗传距离

Table 3. Nei's standard genetic distances between Minjia branch of Bai nationality and 21 published populations.

	[1]	[2]	[3]	[4]	[5]	[6]	[7]	[8]	[9]	[10]	[11]	[12]	[13]	[14]	[15]	[16]	[17]	[18]	[19]	[20]	[21]	[22]
白族民家支系[1]	0.000000
喀什地区维吾尔族[2]	0.107646	0.000000
云南佤族[3]	0.114762	0.177184	0.000000
广西侗族[4]	0.145404	0.217277	0.096202	0.000000
海南黎族[5]	0.124407	0.227674	0.038474	0.096235	0.000000
昌都藏族[6]	0.118570	0.177630	0.073168	0.024859	0.085629	0.000000
四川汉族[7]	0.116581	0.180529	0.070624	0.035347	0.087920	0.005196	0.000000
云南布朗族[8]	0.415857	0.579774	0.398897	0.387094	0.397545	0.348782	0.355437	0.000000
云南哈尼族[9]	0.103179	0.203859	0.048691	0.059480	0.043724	0.034243	0.028206	0.365319	0.000000
云南地区越南人群[10]	0.098524	0.172589	0.059345	0.032926	0.076531	0.007025	0.008501	0.329172	0.024481	0.000000
贵州仡佬族[11]	0.115547	0.149589	0.067855	0.049599	0.093779	0.016923	0.018700	0.360752	0.049616	0.016962	0.000000
云南汉族[12]	0.097612	0.181988	0.058948	0.043558	0.072595	0.014636	0.014362	0.321431	0.025772	0.003780	0.023229	0.000000
彝族[13]	0.094028	0.189993	0.061012	0.054904	0.076758	0.022721	0.021975	0.327090	0.022979	0.008102	0.032636	0.008336	0.000000
纳西族[14]	0.094438	0.173688	0.058978	0.058992	0.078381	0.023124	0.018060	0.335448	0.024818	0.008774	0.023248	0.010194	0.009089	0.000000
日本人群[15]	0.099462	0.185518	0.066168	0.036783	0.080251	0.008683	0.010243	0.325122	0.026606	0.003187	0.023679	0.006106	0.008231	0.011813	0.000000
印度人群[16]	0.105637	0.186014	0.077436	0.059716	0.099815	0.024326	0.022901	0.334689	0.045724	0.014013	0.029487	0.014439	0.018083	0.019465	0.018190	0.000000
宁夏回族[17]	0.092766	0.179012	0.060018	0.053387	0.079086	0.017582	0.015580	0.320730	0.024201	0.004171	0.024065	0.003949	0.003815	0.006234	0.005949	0.011384	0.000000
伊犁维地区吾尔族[18]	0.011876	0.095765	0.100860	0.130743	0.108918	0.099432	0.099592	0.412676	0.091099	0.083543	0.096303	0.084121	0.084766	0.087187	0.084149	0.096855	0.081386	0.000000
长沙汉族[19]	0.050266	0.124632	0.097791	0.191280	0.091328	0.158492	0.153777	0.488916	0.125838	0.140880	0.136507	0.137303	0.142069	0.132549	0.147205	0.154349	0.138767	0.037496	0.000000
拉萨藏族[20]	0.019893	0.083069	0.118218	0.114822	0.127158	0.086276	0.087764	0.438257	0.095018	0.080479	0.087737	0.085672	0.089791	0.088243	0.082420	0.095327	0.084116	0.007435	0.053767	0.000000
怒江白族[21]	0.026784	0.091790	0.135895	0.142791	0.157151	0.111704	0.109450	0.448717	0.113373	0.097324	0.109013	0.103929	0.098482	0.099007	0.096941	0.117884	0.096831	0.014561	0.071961	0.014081	0.000000
大理白族[22]	0.015095	0.085721	0.112248	0.130195	0.122038	0.094348	0.096091	0.423142	0.096458	0.081886	0.090705	0.084250	0.082848	0.084821	0.083601	0.09195	0.07896	0.00521	0.04733	0.00502	0.01303	0.00000

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2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）

为进一步探索白族民家支系与其他人群的亲缘关系，基于Nei’s遗传距离矩阵笔者构建了NJ系统发育树，见图1。从NJ系统发育树可以看出，白族民家支系与大理白族和怒江白族相距较近，而与云南布朗族和云南佤族相距较远。此外，基于Nei’s遗传距离矩阵笔者还进行了多维尺度分析（MDS），见图2。从MDS分析同样可以看出，白族民家支系与大理白族和怒江白族相距较近，而与云南布朗族和云南佤族相距较远。

图 1 白族民家支系与21个已发表人群的系统发育树

Figure 1. The phylogenetic tree showing the relationship of the Minjia branch of Bai nationality and 21 published populations

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图 2 白族民家支系与21个已发表人群的MDS分析（基于Nei’s遗传距离矩阵）

Figure 2. Multidimensional scaling （MDS） plot based on Nei’s standard genetic distances matrix among Minjia branch of Bai nationality and 21 published populations

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3. 讨论

Ho和PIC等法医学参数常被用来衡量STR基因座的多态性程度，并推测其法医学应用价值。在本次针对白族民家支系的调查研究中发现，所选的18个STR基因座的PIC在0.5641～0.8977之间，PIC > 0.5，遗传标记具有高度的多态信息^[27]。在个体识别和亲子鉴定中，CDP和CPE参数的计算是极其重要的。在针对白族民家支系的调查中发现，本研究所选的18个常染色体STR基因座的CDP达0.999999999，具有较强的个体识别能力；CPE达0.99999994055，大于0.9999，在亲子鉴定中具有极强的系统效能^[28-29]。本研究所获得的白族民家支系18个常染色体STR基因座的法医学参数和群体遗传学数据具有极高的应用价值。

云南佤族和云南布朗族属于南亚语系中的孟高棉语族^[30]。对Y染色体的研究发现，云南孟高棉语族起源于东亚南部^[31]。而白族民家支系则属于汉藏语系的藏缅语族^[32]。戴庆厦等^[32]从语言学的角度发现，在中国南方分布的藏缅语族人群起源于中国北方的黄河流域。Wang等^[33]对Y染色体的研究表明，中国南方分布的藏缅语族人群是由北方高原黄河流域迁徙而来。上述研究提示，云南佤族、云南布朗族与白族民家支系在起源上存在着显著的地理差异。与本研究结果，白族民家支系与云南佤族、云南布朗族在遗传上相距较远相一致。

白族的3个主要分支中，勒墨支系于15世纪之前就已经从大理白族的主体中迁徙出来，最终聚居于怒江流域的兰坪县^[34]。而民家支系主要聚居于大理州^[1]。上述史料与研究提示，白族民家支系与属于勒墨支系的怒江白族存在一定的差异。

本研究报道了白族民家支系18个常染色体STR基因座的等位基因频率和法医学参数等。研究结果提示，上述18个常染色体STR基因座在白族民家支系群体中具有较高的遗传多态性，可用于个体识别、亲子鉴定以及群体遗传结构的研究。

表 1 2组患者一般资料比较[$ \bar x \pm s $/n（%）]

Table 1. Comparison of general information of patients between the 2 groups [$ \bar x \pm s $/n（%）]

组别	n	性别		年龄（岁）
组别	n	男	女	年龄（岁）
T-SPOT.TB阴性组	83	49（59.0 ）	34（41.0 ）	46.2 ± 17.3
T-SPOT.TB阳性组	82	50（61.0 ）	32（39.0 ）	41.5 ± 15.8
χ²/t		0.065		1.815
P		0.799		0.071

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表 2 2组患者临床情况比较[n（%）]

Table 2. Comparison of the clinical conditions of the two groups [n（%）]

项目	T-SPOT.TB阴性组	T-SPOT.TB阳性组	χ²	P
年龄≥60岁	19（22.9）	13（15.9）	1.307	0.253
男性	49（59.0）	50（61.0）	0.065	0.799
基础病史
糖尿病	9（10.8）	6（7.3）	0.621	0.431
高血压	6（7.2）	3（3.7）	1.020	0.313
尘肺	4（4.8）	3（3.7）	0.137	0.711
类风湿性关节炎	3（3.6）	2（2.4）	0.194	0.660
肺炎	6（7.2）	5（6.1）	0.085	0.771
肺结核病史复治	18（21.7）	14（17.1）	0.562	0.454
单纯肺结核	43（51.8）	33（40.2）	2.220	0.136
合并其他结核	40（48.2）	49（59.8）	2.220	0.136
结核性胸膜炎	14（16.9）	15（18.3）	0.058	0.810
结核性脑膜炎	4（4.8）	7（8.5）	0.916	0.339
结核性腹膜炎	3（3.6）	3（3.7）	0.000	0.988
泌尿生殖系统结核	4（4.8）	4（4.9）	0.000	0.986
气管结核	9（10.8）	20（24.4）	5.225	0.022^*
椎体结核	3（3.6）	2（2.4）	0.194	0.660
淋巴结结核	2（2.4）	6（7.3）	2.153	0.142
血播性肺结核	3（3.6）	7（8.5）	1.755	0.185
继发性肺结核	80（96.4）	75（91.5）	1.755	0.185
细胞免疫低	42（89.4）	71（86.6）	0.212	0.645
细胞免疫正常	5（10.6）	11（13.4）	0.212	0.645
^*P < 0.05。

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表 3 不同检测方法阳性率比较[n（%）]

Table 3. Comparison of positive rates of different detection methods [n（%）]

组别检测方法	T-SPOT.TB阴性组	χ²	P	T-SPOT.TB阳性组	χ²	P
抗酸杆菌涂片	29（34.9）	44.364	0.000^*	10（12.2）	50.823	< 0.001^*
TB-DNA	32（38.6）			25（30.5）
XpertMtb/RIF	64（77.1）			53（64.6）
结核菌培养	27（32.5）			35（42.7）
^*P < 0.05。

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参考文献(17)

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[4]	王黎霞,成诗明,周林,等. 中华人民共和国卫生行业标准肺结核诊断:WS 288-2017[J]. 中国感染控制杂志,2018,17(7):642-652.
[5]	王黎霞,成诗明,周林,等. 中华人民共和国卫生行业标准结核病分类:WS196-2017[J]. 中国感染控制杂志,2018,17(4):367-368.
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[10]	胡开明,王席,陶芳,等. γ干扰素释放试验在不同年龄肺结核患者中阳性程度比较[J]. 国际检验医学杂志,2021,42(16):2024-2027. doi: 10.3969/j.issn.1673-4130.2021.16.023
[11]	杨牧青,刘俊刚,孙芳,等. 合并糖尿病对肺结核患者T-SPOT. TB阳性率的影响[J]. 河南医学研究,2018,27(2):211-212. doi: 10.3969/j.issn.1004-437X.2018.02.008
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期刊类型引用(4)

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2.	李晓辉，翁智胜，彭洁雯，易江华，廖梦怡，辛甜甜，熊中堂，谈桂其. 脂溢性角化病108例临床、病理及误诊分析. 临床误诊误治. 2020(08): 27-30 . 百度学术
3.	李杨，王宇令，余江，宋起滨. 真皮浅层切除术及病理活检在脂溢性角化病诊治中的应用. 中国美容整形外科杂志. 2018(03): 161-164 . 百度学术
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1. 材料与方法
1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型
1.2 统计学处理
2. 结果
2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数
2.2 遗传分化指数（Fst）和P值
2.3 Nei’s遗传距离
2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）
3. 讨论

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活动性结核病外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220420

作者简介:
万荣（1978～）女，湖北黄石人，医学硕士，副主任医师，主要从事结核病诊治及科研工作

通讯作者:
李明武，Ｅ-mail：ynkmlmw@sina.com

计量

Clinical Features of Tuberculosis with Negative T Cell Spot Test in Peripheral Blood

1. 材料与方法

1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型

1.2 统计学处理

2. 结果

2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数

2.2 遗传分化指数（Fst）和P值

2.3 Nei’s遗传距离

2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）

3. 讨论

期刊类型引用(4)

其他类型引用(3)

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目录

1. 材料与方法

1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型

1.2 统计学处理

2. 结果

2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数

2.2 遗传分化指数（Fst）和P值

2.3 Nei’s遗传距离

2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）

3. 讨论

[1]	樊浩, 刘幸, 张乐, 李畏娴, 吴雪娇, 韩祎, 姚晓蝶. 决策树及Logistic回归模型在活动性肺结核预测中的应用, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230916
[2]	陈连勇, 杨星, 茹浩浩, 陈涛, 闫双群, 许琳. 云南省结核分枝杆菌分子特征和传播相关因素分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230821
[3]	王霖, 沈凌筠, 李海雯, 王晓燕, 高建鹏, 马志强. 云南省肺结核病患者营养状况及免疫功能分析, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230116
[4]	王晓燕, 李娅, 何成禄, 王霖, 马志强, 万鑫蕊. 云南地区结核病患者与HBV、HCV、HIV共感染免疫功能及耐药性研究, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231209
[5]	沈凌筠, 王霖, 马志强, 刘幸, 李海雯, 王戈, 李文明, 骆鹏举. 活动性与非活动性肺结核患者的免疫特点, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220821
[6]	樊浩, 刘幸, 沈凌筠, 李海雯, 余春红, 李婧炜. 基于AAT与细胞因子构建活动性肺结核的Nomogram预测模型, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220816
[7]	王霖, 杜映荣, 高建鹏, 李明武, 沈凌筠, 马志强. 云南省老年结核病患者营养状况的调查, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220432
[8]	葛哲, 卢思萍, 付仕忠, 王春红, 李少莹, 刘翺. 全血γ-干扰素释放试验联合T淋巴细胞亚群检测在肺结核诊断中的初步应用, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210901
[9]	姚璐, 谭慧, 阮永华, 钱忠义, 杨志鸿, 阮锐, 张琦颖, 周明婷, 方星尹. 超声支气管镜引导下的经支气管针吸活检术在肺和纵隔占位性病变诊断中的应用, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210311
[10]	李晓琴, 周敏, 王霖, 曾海燕, 骆鹏举, 林丽佳. PCR-反向点杂交法耐药基因检测和BD960结核菌药敏在耐药结核病检测中的应用价值, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201238
[11]	万荣, 李明武, 马萌, 赖明红, 李光妹. T-SPOT.TB在活动性肺结核治疗效果的监测, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201237
[12]	刘幸, 孙辉, 杜映荣, 陈洁, 欧阳兵, 张乐. VDR基因多态性与耐多药肺结核的关联, 昆明医科大学学报.
[13]	万荣, 李明武, 李光妹, 朱惠琼, 马萌, 刘才. 肺结核活动程度对结核感染T细胞斑点试验反应强度的影响, 昆明医科大学学报.
[14]	陈连勇, 茹浩浩, 杨星, 闫双群, 陈金瓯, 杨蕊, 陈涛, 许琳. 云南省846株结核分枝杆菌药敏试验结果, 昆明医科大学学报.
[15]	樊萍. 探讨艾滋病合并结核病患者与T淋巴细胞之间的关系, 昆明医科大学学报.
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[17]	高小娇. 云南省HIV/AIDS患者中结核病筛查效果评价, 昆明医科大学学报.
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[19]	. 结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核感染诊断中的应用, 昆明医科大学学报.
[20]	. T细胞斑点试验在人类免疫缺陷病毒合并肺结核感染中不同T细胞水平临床诊断价值, 昆明医科大学学报.

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活动性结核病外周血结核感染T细胞斑点试验阴性病例的临床特征

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220420

作者简介: 万荣 （1978～）女，湖北黄石人，医学硕士，副主任医师，主要从事结核病诊治及科研工作

通讯作者: 李明武，Ｅ-mail：ynkmlmw@sina.com

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出版历程

Clinical Features of Tuberculosis with Negative T Cell Spot Test in Peripheral Blood

1. 材料与方法

1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型

1.2 统计学处理

2. 结果

2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数

2.2 遗传分化指数（Fst）和P值

2.3 Nei’s遗传距离

2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）

3. 讨论

期刊类型引用(4)

其他类型引用(3)

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出版历程

目录

1. 材料与方法

1.1 DNA提取、PCR扩增和STR分型

1.2 统计学处理

2. 结果

2.1 18个STR基因座的等位基因频率和法医学相关参数

2.2 遗传分化指数（Fst）和P值

2.3 Nei’s遗传距离

2.4 NJ系统发育树和多维尺度分析（MDS）

3. 讨论

作者简介:
万荣（1978～）女，湖北黄石人，医学硕士，副主任医师，主要从事结核病诊治及科研工作

通讯作者:
李明武，Ｅ-mail：ynkmlmw@sina.com