长链非编码RNA-p21调控微小RNA-9/去乙酰化酶1信号通路逆转结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性

张丽菊; 姜晓明; 陈昌贤; 吴喜; 张振勇; 刘为军

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20220519

长链非编码RNA-p21调控微小RNA-9/去乙酰化酶1信号通路逆转结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220519

1.
云南大学医学院，云南昆明　650091
2.
云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院肛肠科，云南昆明　650032
3.
昆明理工大学医学院，云南昆明　650031

基金项目: 云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目[2017FE467（-120）]

详细信息

作者简介:
张丽菊（1987～），女，云南楚雄人，医学硕士，助理讲师，主要从事结直肠的化疗耐药相关研究工作

通讯作者:
刘为军，E-mail：729368520@qq.com

中图分类号: R735.3
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出版历程
- 收稿日期: 2022-01-01
- 网络出版日期: 2022-05-12
- 刊出日期: 2022-05-27

Long Non-coding RNA-p21 Regulates the MicroRNA-9 / Sirtuin-1 Signaling Pathway to Reverse Oxaliplatin Resistance in Colorectal Cancer Cells

1.
Faculty of Medicine，Yunnan University，Kunming Yunnan 650091
2.
Dept. of Anorectal Diseases，The 1st People’s Hospital of Yunnan Province，The Affiliated Hospital to Kunming University of Science and Technology，Kunming Yunnan 650032
3.
Faculty of Medicine，Kunming University of Science and Technology，Kunming Yunnan 650031，China

摘要

摘要: 目的探讨长链非编码RNA（LncRNA）-p21调控微小RNA-9（miR-9）/去乙酰化酶1（SIRT1）信号通路逆转结直肠癌（CRC）奥沙利铂相关的细胞自噬及耐药性的分子机制。方法采用qPCR方法LncRNA-p21的表达检测，Westbloting blotting法检测细胞自噬相关蛋白（微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ（（LC3-I）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）），自噬底物（P62）、去乙酰化酶1（Sirtuin-1,SIRT1）、miR-9 的表达水平；克隆形成实验检测细胞活性。结果（1）LncRNA-p21 在奥沙利铂耐药的结直肠肿瘤细胞 HCT116，SW620 中高表达，差异有统计学意义（P < 0.001）；（2）敲降 LncRNA-p21 可抑制细胞自噬，改善 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性；（3）敲降 LncRNA-p21 后 miR-9 表达上调，而miR-9 过表达可增强 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性，差异有统计学意义（P < 0.001）；（4）同时，SIRT1 的表达受到 LncRNA-p21 和 miR-9 的调控。结论结直肠肿瘤对于化疗药奥沙利铂抵抗可能由LncRNA-p21诱导细胞自噬增强而引起，其过程可能通过 LncRNA-p21调控miR-9/SIRT1信号通路而实现。
- 奥沙利铂 /
- 长链非编码RNA-p21 /
- miR-9/SIRT1信号通路 /
- 耐药性 /
- 细胞自噬 /
- 结直肠癌
Abstract: Objectives To discuss the molecular mechanism of long non－coding RNA(lncRNA）-P21 regulating （miR-9） /Sirtuin-1(SIRT1） signaling pathway in reversing colorectal cancer （CRC） cell autophagy and drug resistance. Methods Real-time fluorescent quantitative PCR （RT-qPCR） was employed to assess the expression level of LncRNA-p21 in cell lines. Western blotting was performed to measure the expression of SIRT1, miR-9 and autophagy related proteins in CRC cell. Clone formation assay was used to detect the cell activity. Results (1） LncRNA-p21 was highly expressed in oxaliplatin - resistant CRC cells HCT116 and SW620. （2） The knockdown of LncRNA-p21was able to inhibit autophagy and improve the chemotherapy sensitivity of HCT116 cells to oxaliplatin. （3） After LncRNA-p21 was knocked down, the expression of miR-9 was up-regulated, while the overexpression of miR-9 could enhance the chemotherapy sensitivity of HCT116 cells to oxaliplatin. Meanwhile, the expression of SIRT1 was regulated by LncRNA-p21 and miR-9. Conclusion CRC resistance to chemotherapy drug oxaliplatin may be caused by autophagy induced by LncRNA-P21, which may be realized through the regulation of the miR-9 /SIRT1 signaling pathway by LncRNA-P21.
- Oxaliplatin /
- LncRNA-p21 /
- miR-9/SIRT1 signaling pathways /
- Tolerance /
- Autophagy /
- Colorectal cancer

HTML全文

图 1 LncRNA-p21 在奥沙利铂耐药的 CRC 细胞 HCT116，SW620 中高表达

^*P < 0.01，^**P < 0.001 。

Figure 1. LncRNA-p21 was highly expressed in OXaliplatin resistant CRC cells HCT116 and SW620

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图 2 敲降 LncRNA-p21 能够提高 HCT116 对奥沙利铂的化疗敏感性

A：通过qPCR 检测敲降 HCT116 细胞中 LncRNA-p21的敲降效率；B：敲降 LncRNA-p21 以及对照 HCT116 细胞中检测自噬特异性分子LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，自噬底物 P62； C、D：将敲降 LncRNA-p21 以及对照HCT116 细胞使用奥沙利铂处理后，检测克隆形成情况。与对照组比较，^**P < 0.001 。

Figure 2. Knockdown lncrNA-P21 can increase the chemosensitivity of HCT116 to oxaliplatin.

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图 3 敲降 LncRNA-p21 影响 miR-9 的表达

与对照组比较，^*P < 0.001。

Figure 3. Knockdown of lncRNA-P21 affected the expression of Mir-9

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图 4 过表达 miR-9 的增强 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

A：通过细胞转染的方式在 HCT116 细胞中过表达 miR-9，使用 qPCR 检测转染效率；B：在过表达miR-9 的细胞中检测自噬特异性分子 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，自噬底物 P62；C、D：在过表达 miR-9 的 HCT116 细胞中使用奥沙利铂处理后检测克隆形成，发现过表达 miR-9 可改善 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗抵抗。与对照组比较，^*P < 0.01，^**P < 0.001。

Figure 4. Overexpression of miR-9 enhances the chemosensitivity of HCT116 cells to oxaliplatin

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图 5 SIRT1 的表达受到 LncRNA-p21 和 miR-9 的调控

A：通过WB检测SIRT 在敲降 LncRNA-p21 的 HCT116 细胞中的表达；B：通过WB检测SIRT在过表达miR-9的HCT116细胞中的表达。结果表明，和对照组比较，敲降 LncRNA-p21 或者过表达miR-9 能够抑制 SIRT1的表达（图 5A～B）。

Figure 5. The expression of SIRT1 is regulated by lncRNA-P21 and miR-9

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