The Expression and Clinical Significance of Non-coding RNA in Cervical Cancer
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摘要:
目的 分析非编码RNA 长链非编码RNA（LINC00982）及微小RNA（hsa-miR-1246）在子宫颈癌组织中的表达情况，旨在为宫颈癌的诊断提供新的生物标志物和潜在的治疗靶点。 方法 收集云南大学附属医院2021年1月至2021年10月收治的21例因子宫肌瘤等良性病变行全子宫切除术患者的正常宫颈组织样本（对照组）和43例经病理学诊断为子宫颈癌患者的宫颈癌组织样本（实验组），运用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测并比较2组间LINC00982及hsa-miR-1246的表达情况。 结果 （1）与人正常子宫颈组织相比，子宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达下调（P < 0.05），而hsa-miR-1246表达上调（P < 0.05）；（2）高分化宫颈癌组织中LINC00982-1/2及hsa-miR-1246的表达量低于中低分化宫颈癌组织（P < 0.05）；（3）Ⅲ/Ⅳ期人宫颈癌组织中LINC00982-1/2及hsa-miR-1246的表达量高于Ⅰ/Ⅱ期（P < 0.05）；（4）腺癌组织中LINC00982-1的表达量低于鳞状细胞癌（P < 0.05），但腺癌与鳞状细胞癌中LINC00982-2两者比较，差异无统计学意义（P > 0.05），而hsa-miR-1246的表达量则高于鳞状细胞癌（P < 0.05）；（5）LINC00982-1/2表达量随SCCA的增高而下降（P < 0.05），而hsa-miR-1246表达量随SCCA的增高而增高；（6）肿瘤直径 > 4 cm的组织中，LINC00982-1/2及hsa-miR-1246的表达量高于肿瘤直径≤4 cm者。 结论 LINC00982在宫颈癌组织中低表达；hsa-miR-1246在宫颈癌组织中高表达；且子宫颈癌组织中LINC00982-1/2及hsa-miR-1246表达与组织分化程度、病理分期、病理类型、SCCA的高低及肿瘤直径密切相关。 Abstract:Objective To analyze the expression of long non-coding RNA （LINC00982） and microrNA （hsa-miR-1246） in cervical cancer tissues, so as to provide a new biomarker for the diagnosis of cervical cancer and a potential and effective therapeutic target for its treatment. Methods The normal cervical tissue samples （as the control group） were collected from 21 patients undergoing the total hysterectomy for benign lesions such as uterine fibroids and the cervical cancer tissue samples （as the experimental group） were collected from 39 patients diagnosed as cervical cancer by pathology. All the patients above were admitted to the Affiliated Hospital of Yunnan University from January 2021 to October 2021. The expressions of LINC00982 and miR-1246 were detected and compared between these two groups by real-time fluorescence quantitative PCR （RT-QPCR）. Results （1） Compared with the normal human cervical tissues, the expression of LINC00982-1/2 was down-regulated in cervical cancer tissues （P < 0.05）, while the expression of hsa-miR-1246 was up-regulated （P < 0.05）; （2）The expression levels of LINC00982-1/2 and miR-1246 in highly differentiated cervical cancer tissues were lower than those in medium and low differentiated cervical cancer tissues （P < 0.05）; （3） The expression levels of LINC00982-1/2 and hsa-miR-1246 in stage Ⅲ/Ⅳ of the cervical carcinoma were higher than those in stage Ⅰ/Ⅱ （P < 0.05）. （4） The expression level of LINC00982-1 in adenocarcinoma tissues was lower than that in squamous cell carcinoma （P < 0.05）, but there was no significant difference between adenocarcinoma and squamous cell carcinoma （P > 0.05）, while the expression of hsa-mir-1246 was higher than that in squamous cell carcinoma （P < 0.05）; （5） The expression of LINC00982-1/2 decreased with the increase of SCCA （P < 0.05）, while the expression of hsa-miR-1246 increased with the increase of SCCA; （6） The expression levels of LINC00982-1/2 and hsa-miR-1246 in tissues with the tumor diameter > 4 cm were higher than those with tumor diameter ≤4 cm. Conclusion LINC00982 is low expressed in cervical cancer tissues while hsa-miR-1246 is highly expressed in cervical cancer tissues. Furthermore, the expressions of LINC00982-1/2 and hsa-miR-1246 in cervical cancer tissues are closely related to the degree of tissue differentiation, pathological stage, pathological type, SCCA level and tumor diameter. -
Key words:
- Cervical cancer /
- Long non-coding RNA /
- micro RNA
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宫颈癌（cervical cancer，CC）是妇科常见的恶性肿瘤。根据国际癌症研究署2020年全球癌症统计数据表明，在女性恶性肿瘤中，子宫颈癌发病率和死亡率居全球女性癌症第四位，其全球新发病例大约有60.4万[1]，仅中国子宫颈癌新发病例数就有10.97万例[2]，占全球宫颈癌新发病例的18.1%。严重威胁着女性的健康及生命。虽然随着宫颈癌疫苗及宫颈癌筛查的普及，宫颈癌晚期检出率在逐年下降，但不发达国家宫颈癌的3～5 a生存率不高于50%[3]。因此，寻找合适的分子标志物用于宫颈癌的早期诊断及治疗极为重要。
lncRNA为长度大于200个核苷酸，且不编码蛋白质的转录物。在宫颈癌发生发展机制研究中，lncRNA发挥的作用，包括早期肿瘤标志物检测[4]、肿瘤发生发展过程中增殖和凋亡能力改变[5]、化药耐药[6]和放射性抵抗[7]等日益凸显，为临床早期诊断、治疗和预后评估奠定了理论基础。人类LINC00982基因是位于染色体1p36.32上的一个非编码 RNA，通过NCBI数据库检索显示LINC00982有2个剪切体，剪切体1为3 722 bp，剪切体2为658 bp。目前关于LINC00982的研究较少，现有的报道证实其在胃癌、肺腺癌及肾癌等恶性肿瘤中呈现低表达状态，扮演着类似抑癌基因的作用，通过诱导细胞凋亡，从而抑制癌细胞增殖和肿瘤生长。但目前尚无LINC00982在宫颈癌方面的相关报道。miRNA是一类长约22个核苷酸的非编码RNA，可通过完全或者不完全互补的方式结合到靶基因的3’-UTR（非编码区），从而起到降解或者抑制靶基因翻译的作用，从而调节细胞的分化、生长、凋亡和增殖。miRNA可通过多种信号途径参与多种实体肿瘤细胞的增殖、侵袭、黏附、转移以及凋亡，而且与放疗、化疗、靶向治疗等密切相关。hsa-miR-1246是被具有抗癌活性的 P53 所调控的一个新的 miRNA，定位于人胞核染色体2q31.1。hsa-miR-1246调控着癌细胞的增殖、分化、凋亡、衰老及转移入侵，在包括宫颈癌在内的多种肿瘤的诊断、靶基因治疗和判断预后方面发挥着重要作用。相关研究表明，hsa-miR-1246 可促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移[6]。
1. 资料与方法
1.1 资料来源
选取云南大学附属医院妇科2021年1月至2021年10月经子宫颈活检确诊为子宫颈癌的患者样本43例（根据2019年FIGO分期标准，Ⅰ期15例、Ⅱ期13例、Ⅲ期11例、Ⅳ期4例，其中宫颈鳞癌38例、腺癌5例；低中分化30例，高分化13例），患者年龄（56.57±8.04）岁。同时选取同期因子宫肌瘤等良性疾病行全子宫切除后病理确诊为正常宫颈样本21例作为对照组，患者年龄（44.70±3.99）岁。宫颈癌患者入组标准：（1）病理确诊为宫颈癌，且根据国际妇产科联合会（FIGO） 2019分期标准进行分期；（2）所有宫颈癌患者取材前未接受放化疗，免疫治疗；（3）临床资料齐全。正常宫颈组纳入标准：（1）因其他良险疾病行子宫全切的患者；（2）HPV检测为阴性；（3）病理证实为正常宫颈组织。排除标准：除外其他恶性肿瘤、血液病及凝血功能障碍者。采集以上患者标本均签署知情同意书，研究方案经云南大学附属医院医学伦理委员会同意（伦理审查编号2021044）。
1.2 试剂及材料
Trizol Reagent购自美国MRC公司、RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kit购自Thermo Scientific™公司、All-in-One™ qPCR Mix及All-in-One™ miRNA qRT-PCR Detection Kit购自GeneCopoeia™公司、lncRNA及microRNA引物由GeneCopoeia™合成，见表1。
表 1 实时荧光定量PCR引物序列Table 1. The sequence of RT-PCR primersPrimer 序列 LINC00982-1：F 5′-CCTGGCAGCAACGAAAATGG-3′ LINC00982-1：R 5′-TTTGCAAGCCGAGTCTGGAT-3′ LINC00982-2：F 5′-TGGCACCAGAGATTGAGACTG-3′ LINC00982-2：R 5′-CCGCACACGAGTAGGAGTCGT-3′ GAPDH：F 5′-GAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′ GAPDH：R 5′-GCTGTTGTCATACTTCTCATCG-3′ hsa-miR-1246 5′-AATGGATTTTTGGAGCAGG-3′ U6 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′ 1.3 Total RNA提取
取液氮保存的组织标本，在液氮中碾碎至粉状，按照100 mg左右组织加入1 mL Trizol，震荡后静置5 min，加入200 μL氯仿，震荡数分钟后静置5 min，12 500 r/min、4℃、离心15 min。离心后将上层水相吸出400 μL，震荡混匀后静置数分钟，12 500 r/min，4℃、离心15 min。弃上清，加入1 mL无水乙醇，7 500 r/min，4℃、离心5 min，弃上清，洗涤2次。适度干燥，加入50 μL去酶水反复吹打数次，使其充分溶解待用。
1.4 Real-time PCR检测
对提取的总RNA进行反转录获得cDNA，采用SYBR Green法进行RT-qPCR验证，分别以GAPDH、U6为内参基因。RT-qPCR反应体系为20 μL：Water 7.0 μL、Primer 2.0 μL、cDNA 1.0 μL、2×PCR Master Mix 10.0 μL。反应条件为：95℃、10 min；（95℃、10 s，60℃、20 s，72℃、10 s）×40 cycles；（65℃、60 s，95℃、15 s）；30℃、30 s。RT-qPCR检测中每孔均设3个复孔，取平均Ct值作为该样本的最终Ct值。分别以GAPDH、U6为内参基因，以2-△△Ct值作为LINC00982及miR-1246的相对表达水平。
1.5 统计学处理
实验数据以均数±标准差（
$\bar x \pm s$ ）表示，用GraphPad Prism 9统计软件，行方差齐性检验，单因素方差分析（oneway方差分析），样本均数间的两两比较（q检验），以α = 0.05为检验水准。2. 结果
2.1 正常子宫颈和子宫颈癌组织中LINC00982-1/2（LINC00982转录形成2个剪切体，剪切体1及剪切体2）及hsa-miR-1246的表达变化
如表2所示，与正常子宫颈组织相比，人子宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达下调（P < 0.05），见图1；而hsa-miR-1246表达上调（P < 0.05），见图2。
表 2 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 2. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 宫颈癌组 43 0.6561 ± 0.2487 0.1173 ± 0.1391 2.0500 ± 0.2345 F 18.88 334.3 154 P 0.0029* 0.0080* 0.0047* 与正常宫颈组比较，*P < 0.05。 
图 1 LINC00982剪切体1及LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况A：LINC00982剪切体1在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况；B： LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况。 与对照组比较，#P < 0.05。Figure 1. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2in normal cervical and cervical carcinoma
图 2 hsa-miR-1246在正常宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况与对照组比较，*P < 0.05 。Figure 2. expression of hsa-miR-1246 in normal cervical and cervical carcinoma2.2 正常子宫颈及子宫颈癌组织不同分化程度（病检确定分化程度）中LINC00982-1/2、hsa-miR-1246的表达变化
如表3所示，与正常子宫颈组织相比，中低分化及高分化宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达均下调（P < 0.05），且高分化宫颈癌组织中的表达量低于中低分化宫颈癌组织（P < 0.05），见图3；与正常子宫颈组织相比，中低分化及高分化宫颈癌组织中hsa-miR-1246表达均上调（P < 0.05），且高分化宫颈癌组织中的表达量低于中低分化宫颈癌组织（P < 0.05），见图4。
表 3 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 3. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 低、中分化 30 0.6142 ± 0.1887* 0.1751 ± 0.1537* 1.8950 ± 0.5421* 高分化 13 0.4234 ± 0.1452*# 0.0037 ± 0.0045*# 1.561 ± 1.0107*# F 59.63 306.5 13.46 P 0.0012 0.0001 0.0001 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与低、中分化组比较，#P < 0.05。 
图 3 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化A：LINC00982剪切体1在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与低、中分化组比较，#P < 0.05。Figure 3. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervical and cervical cancer tissues with different degrees of differentiation
图 4 hsa-miR-1246在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化与对照组比较，*P < 0.05 ；与低、中分化组比较，#P < 0.05。Figure 4. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervical and cervical cancer tissues with different degrees of differentiation.2.3 正常子宫颈及子宫颈癌组织不同分期（以2019年FIGO分期为标准）中LINC00982-1/2、 hsa-miR-1246的表达变化
如表4所示，Ⅲ/Ⅳ期人宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达高于Ⅰ/Ⅱ期人宫颈癌组织（P < 0.05），Ⅰ/Ⅱ期人宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达均低于正常宫颈组织，而Ⅲ/Ⅳ期中LINC00982-1的表达量高于正常子宫颈组织，LINC00982-2的表达量则低于正常子宫颈组织，见图5；Ⅲ/Ⅳ期人宫颈癌组织中hsa-miR-1246的表达高于Ⅰ/Ⅱ期人宫颈癌组织，且Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期人宫颈癌组织中hsa-miR-1246的表达均高于正常人宫颈组织（P < 0.05），见图6。
表 4 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 4. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 Ⅰ/Ⅱ 28 0.0318 ± 0.0528* 0.0044 ± 0.0023* 1.314 ± 0.1513* Ⅲ/Ⅳ 15 1.3420 ± 0.1155*# 0.2796 ± 0.2371*# 3.365 ± 1.1452*# F 1105 307.1 82.81 P 0.0002 0.0001 0.0001 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。 
图 5 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化A：LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。Figure 5. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervix and cervical cancer tissues of different stages
图 6 hsa-miR-1246在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化与对照组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。Figure 6. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervix and cervical cancer tissues of different stages.2.4 正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中LINC00982-1/2、hsa-miR-1246的表达变化
如表5所示，与正常人宫颈组织相比，人宫颈鳞状细胞癌（SSC）及腺癌（ADS）中LINC00982-1/2的表达均下调，具有显著性差异（P < 0.05），且腺癌中LINC00982-1的表达量低于鳞状细胞癌（P < 0.05），腺癌中LINC00982-2的表达量则高于鳞状细胞癌，但两者间无统计学意义（P > 0.05），见图7；与正常人宫颈组织相比，人宫颈鳞状细胞癌及腺癌中hsa-miR-1246的表达均上调，具有显著性差异（P < 0.05），且腺癌中hsa-miR-1246的表达量高于鳞状细胞癌（P < 0.05），见图8。
表 5 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 5. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 SSC 38 0.4373 ± 0.0529* 0.0053 ± 0.0052* 1.436 ± 0.2348* ADS 5 0.2022 ± 0.1151*# 0.0172 ± 0.0145*# 4.455 ± 0.3146*# F 346.6 995.5 808.9 P 0.0002 0.0001 0.0004 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与鳞状细胞癌组比较，#P < 0.05。 
图 7 LINC00982剪切体1和剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化A：LINC00982剪切体1在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05，与鳞状细胞癌组比较，# P < 0.05。Figure 7. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in different pathological types of normal cervix and cervical cancer tissues.
图 8 hsa-miR-1246在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化与对照组比较，*P < 0.05，与鳞状细胞癌组比较，#P < 0.05。Figure 8. expression of hsa-miR-1246 in different pathological types of normal cervix and cervical cancer tissues.2.5 正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量（< 1.5 ng/mL和≥1.5 ng/mL）中LINC00982-1/2、hsa-miR-1246的表达变化
如表6所示，与正常人宫颈组织相比，在人宫颈癌组织SCCA（< 1.5 ng/mL）及SCCA（≥1.5 ng/mL）中LINC00982-1/2的表达均下调（P < 0.05），且随SCCA的增高，LINC00982-1/2的表达量降低，见图9；而hsa-miR-1246表达上调（P < 0.05），且随SCCA的增高，其表达量增高，见图10。
表 6 LINC00982、has-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 6. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 SSCA（ < 1.5 ng/mL） 28 0.5360 ± 0.2155* 0.0078 ± 0.0022* 1.425 ± 0.1545* SCCA（≥1.5 ng/mL） 15 0.2822 ± 0.1946*# 0.0057 ± 0.0019*# 1.66 ± 0.1446*# F 72.16 273.1 48.88 P 0.0391 0.0001 0.0025 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。 
图 9 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量A：LINC00982-1在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量；B：LINC00982-2在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量。 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。Figure 9. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervix and cervical cancer tissues with different SCCA levels
图 10 hsa-miR-1246在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量与对照组比较，*P < 0.05 ；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。Figure 10. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervix and cervical cancer tissues with different SCCA levels2.6 正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中LINC00982-1/2、hsa-miR-1246的表达变化
如表7所示，与正常人宫颈组织相比，肿瘤直径≤4 cm及肿瘤直径 > 4 cm的组织中，LINC00982-1/2的表达均下调，具有显著性差异（P < 0.05），肿瘤直径 > 4 cm的组织中，LINC00982-1/2的表达高于肿瘤直径≤4 cm者，见图11；与正常人宫颈组织相比，肿瘤直径≤4 cm及肿瘤直径 > 4 cm的组织中，hsa-miR-1246的表达均上调，具有显著性差异（P < 0.05），肿瘤直径 > 4 cm的组织中，hsa-miR-1246的表达高于肿瘤直径≤4 cm者，见图12。
表 7 LINC00982、has-miR-1246表达量（$\bar x \pm s $ ）Table 7. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 ≤4 cm 12 0.4156 ± 0.1546* 0.0037 ± 0.0040* 1.509 ± 0.1376* > 4 31 0.5814 ± 0.1398*# 0.0335 ± 0.0070*# 2.201 ± 0.1795*# F 87.04 969.3 198.6 P 0.0007 0.0001 0.0108 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。 
图 11 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化A：LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化图；B：LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。Figure 11. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in the normal cervix and different tumor sizes of cervical cancer
图 12 hsa-miR-1246在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。Figure 12. Expression of hsa-miR-1246 in the normal cervix and different tumor sizes of cervical cancer.3. 讨论
3.1 LINC00982在宫颈癌组织中的表达及临床意义
lncRNA作为非编码RNA，其二级结构与蛋白质和染色质相互作用，使其具有广泛功能。大量通过检测lncRNA的表达水平差异，来判断其与宫颈癌的关联。人类LINC00982基因是一个长的基因间非编码RNA。对其相关研究较少。目前对其相关机制研究表明，LINC00982可以通过调节P15和P16蛋白的表达来部分抑制癌细胞的增殖并阻止细胞周期[8]，同时LINC00982还可以通过PI3K-ATK信号通路，诱导细胞凋亡[9-10]，扮演着类似抑癌基因的作用。但尚未见LINC00982在宫颈癌中的相关报道。
本研究发现，与正常子宫颈组织相比，子宫颈癌组织中LINC00982-1/2的表达下调，提示LINC00982可能在宫颈癌组织中发挥抑癌基因的作用。且LINC00982的表达与宫颈癌组织的分化程度、临床分期、病理类型、SCCA的高低、肿瘤直径密切相关。宫颈癌组织中LINC00982的表达量随SCCA的增高而降低，进一步表明LINC00982的表达可能与肿瘤负荷相关，提示其可能扮演着类似抑癌基因的角色。但患者临床分期越晚、肿瘤直径越大、分化程度越低，宫颈癌组织中LINC00982的表达量越高，似乎又与其抑癌基因的功能相悖，这一现象的出现一方面可能与临床样本的检测会受到多种干扰因素影响相关。另一方面，可能与实验样本中晚期样本数量偏少有关（Ⅳ期患者仅4例），需要后期扩大实验样本量进行验证，或进一步通过细胞实验进行肿瘤细胞表型分析验证。腺癌中LINC00982-1的表达量低于鳞状细胞癌，但腺癌与鳞状细胞癌中LINC00982-2两者比较差异无统计学意义，虽然两者间无统计学意义，但导致这种差异的原因是否与LINC00982不同剪接体间的功能不同有关，仍有待后续进一步深入研究。
3.2 hsa-miR-1246在宫颈癌组织中的表达及临床意义
目前，人体内已发现的miRNA有2000多种，占人类基因组的1％，调控着 30％基因的表达[11]。部分肿瘤相关 miRNA 负载量的高低可作为患者预后的独立危险因素，从而可预测肿瘤的发生及治疗效果[12]。研究表明，子宫颈癌患者血清样品[13]、癌组织[14]中 miR-1246 呈高表达，同时，宫颈鳞癌患者血清中 hsa-miR-1246含量明显高于宫颈上皮内瘤变患者及健康体检妇女，且 hsa-miR-1246 的高表达与宫颈鳞癌患者 FIGO 分期、肿瘤大小、淋巴结转移、脉管浸润密切相关[15]。
本研究发现，与正常子宫颈组织相比，子宫颈癌组织中hsa-miR-1246高表达，提示hsa-miR-1246可能在宫颈癌组织中发挥癌基因的作用。且hsa-miR-1246的表达与宫颈癌组织的分化程度、临床分期、SCCA的高低、肿瘤直径密切相关。患者临床分期越晚、肿瘤直径越大、SCCA表达量越高、分化越低，hsa-miR-1246的表达量越高，进一步表明hsa-miR-1246可能促进肿瘤的发生与发展，与患者预后不良密切相关。且hsa-miR-1246的表达与病理类型密切相关，在腺癌中的表达量明显高于鳞状细胞癌。
本文首次报道了宫颈癌相关的一种LncRNA（LINC00982） ，该 LncRNA在宫颈癌组织中表达下调，提示其可能参与宫颈癌的发生与发展，为宫颈癌的诊断提供新的生物标志物及治疗提供潜在而有效的靶点。同时我们发现，hsa-miR-1246在子宫颈癌组织中高表达，且hsa-miR-1246的表达与宫颈癌组织的分化程度、临床分期、SCCA的高低、肿瘤直径密切相关，表明hsa-miR-1246可能作为癌基因，参与肿瘤的发生与发展。此外，LINC00982与miR-1246的表达呈负相关，表明LINC00982可能通过靶向hsa-miR-1246参与肿瘤的发生、发展过程，其机制有待进一步深入研究。
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图 1 LINC00982剪切体1及LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况
A：LINC00982剪切体1在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况；B： LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况。 与对照组比较，#P < 0.05。
Figure 1. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2in normal cervical and cervical carcinoma
图 2 hsa-miR-1246在正常宫颈及子宫颈癌组织中的表达情况
与对照组比较，*P < 0.05 。
Figure 2. expression of hsa-miR-1246 in normal cervical and cervical carcinoma
图 3 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化
A：LINC00982剪切体1在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与低、中分化组比较，#P < 0.05。
Figure 3. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervical and cervical cancer tissues with different degrees of differentiation
图 4 hsa-miR-1246在人正常宫颈及不同分化程度的宫颈癌组织中的表达变化
与对照组比较，*P < 0.05 ；与低、中分化组比较，#P < 0.05。
Figure 4. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervical and cervical cancer tissues with different degrees of differentiation.
图 5 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化
A：LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。
Figure 5. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervix and cervical cancer tissues of different stages
图 6 hsa-miR-1246在人正常宫颈及不同分期的宫颈癌组织中的表达变化
与对照组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。
Figure 6. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervix and cervical cancer tissues of different stages.
图 7 LINC00982剪切体1和剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化
A：LINC00982剪切体1在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化；B：LINC00982剪切体2在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05，与鳞状细胞癌组比较，# P < 0.05。
Figure 7. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in different pathological types of normal cervix and cervical cancer tissues.
图 8 hsa-miR-1246在正常子宫颈及子宫颈癌组织不同病理类型中的表达变化
与对照组比较，*P < 0.05，与鳞状细胞癌组比较，#P < 0.05。
Figure 8. expression of hsa-miR-1246 in different pathological types of normal cervix and cervical cancer tissues.
图 9 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量
A：LINC00982-1在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量；B：LINC00982-2在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量。 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。
Figure 9. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in normal cervix and cervical cancer tissues with different SCCA levels
图 10 hsa-miR-1246在正常人子宫颈及子宫颈癌组织不同SCCA表达量
与对照组比较，*P < 0.05 ；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。
Figure 10. Expression of hsa-miR-1246 in normal cervix and cervical cancer tissues with different SCCA levels
图 11 LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化
A：LINC00982剪切体1和LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化图；B：LINC00982剪切体2在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化。 与对照组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。
Figure 11. Expression of LINC00982-1 and LINC00982-2 in the normal cervix and different tumor sizes of cervical cancer
图 12 hsa-miR-1246在正常人子宫颈及子宫颈癌不同肿瘤大小中的表达变化
与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。
Figure 12. Expression of hsa-miR-1246 in the normal cervix and different tumor sizes of cervical cancer.
表 1 实时荧光定量PCR引物序列
Table 1. The sequence of RT-PCR primers
Primer 序列 LINC00982-1：F 5′-CCTGGCAGCAACGAAAATGG-3′ LINC00982-1：R 5′-TTTGCAAGCCGAGTCTGGAT-3′ LINC00982-2：F 5′-TGGCACCAGAGATTGAGACTG-3′ LINC00982-2：R 5′-CCGCACACGAGTAGGAGTCGT-3′ GAPDH：F 5′-GAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′ GAPDH：R 5′-GCTGTTGTCATACTTCTCATCG-3′ hsa-miR-1246 5′-AATGGATTTTTGGAGCAGG-3′ U6 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′ 
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表 2 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 2. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 宫颈癌组 43 0.6561 ± 0.2487 0.1173 ± 0.1391 2.0500 ± 0.2345 F 18.88 334.3 154 P 0.0029* 0.0080* 0.0047* 与正常宫颈组比较，*P < 0.05。
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表 3 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 3. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 低、中分化 30 0.6142 ± 0.1887* 0.1751 ± 0.1537* 1.8950 ± 0.5421* 高分化 13 0.4234 ± 0.1452*# 0.0037 ± 0.0045*# 1.561 ± 1.0107*# F 59.63 306.5 13.46 P 0.0012 0.0001 0.0001 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与低、中分化组比较，#P < 0.05。
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表 4 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 4. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246 （
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 Ⅰ/Ⅱ 28 0.0318 ± 0.0528* 0.0044 ± 0.0023* 1.314 ± 0.1513* Ⅲ/Ⅳ 15 1.3420 ± 0.1155*# 0.2796 ± 0.2371*# 3.365 ± 1.1452*# F 1105 307.1 82.81 P 0.0002 0.0001 0.0001 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与Ⅰ/Ⅱ期比较，#P < 0.05。
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表 5 LINC00982、hsa-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 5. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 SSC 38 0.4373 ± 0.0529* 0.0053 ± 0.0052* 1.436 ± 0.2348* ADS 5 0.2022 ± 0.1151*# 0.0172 ± 0.0145*# 4.455 ± 0.3146*# F 346.6 995.5 808.9 P 0.0002 0.0001 0.0004 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与鳞状细胞癌组比较，#P < 0.05。
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表 6 LINC00982、has-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 6. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 SSCA（ < 1.5 ng/mL） 28 0.5360 ± 0.2155* 0.0078 ± 0.0022* 1.425 ± 0.1545* SCCA（≥1.5 ng/mL） 15 0.2822 ± 0.1946*# 0.0057 ± 0.0019*# 1.66 ± 0.1446*# F 72.16 273.1 48.88 P 0.0391 0.0001 0.0025 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与SCCA（ < 1.5 ng/mL）组比较，#P < 0.05。
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表 7 LINC00982、has-miR-1246表达量（
$\bar x \pm s $ ）Table 7. Expression levels of LINC00982 and hsa-miR-1246（
$\bar x \pm s $ ）组别 n LINC00982-1 LINC00982-2 hsa-miR-1246 正常宫颈组 21 1.00 ± 0.123 1.00 ± 0.145 1.00 ± 0.2883 ≤4 cm 12 0.4156 ± 0.1546* 0.0037 ± 0.0040* 1.509 ± 0.1376* > 4 31 0.5814 ± 0.1398*# 0.0335 ± 0.0070*# 2.201 ± 0.1795*# F 87.04 969.3 198.6 P 0.0007 0.0001 0.0108 与正常宫颈组比较，*P < 0.05；与≤4 cm颈肿瘤组织组比较，#P < 0.05。
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