Mechanisms of Progesterone on Proliferation and Migration of Human Ovarian Cancer Cells via HOXA9
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摘要:
目的 探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。 方法 （1）按照孕激素醋酸甲羟孕酮（MPA）药物浓度梯度（0.1、1、10、50、100 μmol/L）培养人卵巢癌细胞HO-8910，作用24 h、 48 h 、72 h后，光学显微镜观察细胞形态； CCK-8检测细胞存活率，确定IC50； Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。（2）将细胞分为H0-8910细胞4组：（1）NC组；（2）孕激素组；（3）孕激素+si-HOXA9组；（4）孕激素+ov-HOXA9组。H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h，qPCR 和Western blot 分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化（EMT）相关蛋白 （Vimentin，N-cadherin，E-cadherin）的表达变化；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell 实验用于检测细胞侵袭能力。 结果 （1）孕激素刺激后，HO-8910细胞株生长状态变差，排列稀疏，细胞增殖，迁移以及侵袭能力受到抑制（P < 0.0001），且细胞凋亡率上升（P < 0.0001）；（2）通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC50值为2.680 μmol/L；（3）相较于人卵巢上皮细胞CP-H055，HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910，SKOV3，A2780和OVCAR3中mRNA均高表达（P < 0.01），HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达（P < 0.001）；（4）孕激素可抑制HOXA9的表达（P < 0.0001），敲降HOXA9 后，孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显（P < 0.0001），而过表达HOXA9后，孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱（P < 0.0001）；（5）孕激素使E-cadherin蛋白表达上升（P < 0.01），而Vimentin，N-cadherin蛋白表达下降（P < 0.001）；敲降HOXA9 后，孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显（P < 0.05），而过表达HOXA9后，孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱（P < 0.05）。 结论 孕激素通过抑制HOXA9基因的表达，抑制细胞增殖，迁移，侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型，从而抑制卵巢癌发展进程。 Abstract:Objective To investigate the mechanism of HOXA9 in the process of progesterone inhibition of ovarian cancer progression. Methods （1） Human ovarian cancer cell line HO-8910 were cultured according to the gradient of progestin medroxyprogesterone acetate （MPA） concentration （0.1, 1, 10, 50 and 100 μmol/L）, and the cell morphology was observed after 24 h, 48 h and 72 h. CCK-8 was used to detect cell viability and determine IC50. The apoptosis rate was detected by Annexin V-FITC double staining. （2） H0-8910 were divided into four groups: 1） NC group; 2） progestin group; 3） progestin+si-HOXA9 group; 4） progestin+ov-HOXA9 group. H0-8910 cells were transfected with HOXA9 knockdown or overexpression plasmids and treated with MPA or not transfected with plasmids alone using MPA for 72 h. The qPCR and western blot were used to detect the mRNA and protein expression of HOXA9. as well as the expression of epithelial mesenchymal transition （EMT）-related proteins （Vimentin, N-cadherin, E-cadherin）, respectively. Wound scratch assay was used to detect cell migration; Transwell assay was used to detect cell invasion. Results （1） After progesterone stimulation, the growth status of HO-8910 became poor, the arrangement was sparse, cell proliferation, migration and invasion ability were suppressed （P < 0.0001）, and the apoptosis rate increased （P < 0.0001）; （2） calculated by cck8 results, the IC50 value of H0-8910 cells treated with MPA for 72 h was 2.680 μmol/L; （3） compared with human ovarian epithelial cells CP- H055, HOXA9 mRNA was highly expressed in human ovarian cancer cell lines HO-8910, SKOV3, A2780 and OVCAR3 （P < 0.01）, and HOXA9 protein was likewise highly expressed in HO-8910 （P < 0.001）; （4） progesterone could inhibit HOXA9 expression （P < 0.0001）, and the inhibition of cell invasion and migration ability by progesterone was more obvious after knocking down HOXA9 （P < 0.0001）, while the inhibition of HO-8910 invasion and migration ability was slightly reduced after overexpression of HOXA9 （P < 0.0001）. （5） Progesterone increased E-cadherin protein expression （P < 0.01）, while Vimentin and N-cadherin protein expression decreased （P < 0.001）; after knocking down HOXA9, the effect of progesterone on EMT-related protein expression in HO-891 was more obvious （P < 0.05）, while after overexpressing HOXA9, the effect of progesterone on EMT-related protein expression in HO-891 was weakened （P < 0.05）. Conclusion Progesterone inhibits the development of ovarian cancer by suppressing the expression of HOXA9 gene and therefore suppressing the malignant biological phenotypes such as cell proliferation, migration, invasion and EMT process. -
Key words:
- Ovarian cancer /
- HOXA9 /
- Progesterone /
- Medroxyprogesterone acetate
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结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）侵袭人体肺部，引发肺结核（pulmonary tuberculosis，PTB）。肺结核是全球面临的严重公共卫生挑战，国际组织和各国政府纷纷采取措施，积极推动结核病防治工作的开展[1]。痰抗酸染色涂片镜检作为肺结核诊断的首选方法，具备耗时短、成本低的优势，但其诊断敏感度仅为50%～60%，可能引发误诊或漏诊[2]。尽管痰结核分枝杆菌培养阳性率较涂片有所提高，但培养周期较长，可能延误治疗[3]。在肺结核患者中，痰涂片阴性的涂阴肺结核占比高达70%[4]。由于涂阴肺结核诊断困难，诊疗延误，导致每年约有10%～20%的新发肺结核病例由涂阴肺结核患者传播[5−6]。因此，寻求快速、高效的检测手段对于涂阴结核病的早期诊断具有重要意义。本研究关注涂阴肺结核患者淋巴细胞亚群、细胞因子、血常规以及生化等实验室检测指标特征，旨在深入分析涂阴肺结核患者与涂阳肺结核患者及健康人群之间的差异，为临床诊断和治疗提供有力依据。
1. 资料与方法
1.1 研究对象
本研究选取2023年3月至2023年9月在云南省传染病医院确诊的50例初治肺结核患者和同期体检的30例健康人（对照组）作为研究对象，根据其入院时痰涂片抗酸染色阴性（至少3份痰标本阴性）为标准将研究对象分为痰涂片阳性组28例（涂阳组）与痰涂片阴性组22例（涂阴组）。纳入标准：（1）患者根据《肺结核诊断（WS 288-2017）》[7]临床诊断为初治肺结核；（2）对照组均为体检无异常的健康志愿者；（3）无其他自身免疫性疾病，未使用过免疫抑制剂和免疫增强剂。排除标准：（1）HIV抗体阳性；（2）患有其他感染性疾病或恶性肿瘤；（3）孕期或哺乳期女性。本研究已通过云南省传染病医院伦理委员会审查（科2022028），且所有研究对象知情同意。
1.2 相关定义
初治结核病[8]，从未因结核病使用过抗结核药物治疗、正进行标准化疗方案规则用药未满疗程的患者或不规则化疗未满1个月的患者。
1.3 血液采集及相关指标检测
采用乙二基四乙胺二钾EDTA-K2抗凝采血管和非抗凝真空采血管采集患者空腹静脉血液4～5 mL，非抗凝血液以
3000 r/min离心10 min后分离血清。使用BD FACSLyric流式细胞仪进行淋巴细胞亚群（CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T、B细胞和NK细胞）和细胞因子（IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、TNF-α、IFN-α和IFN-γ）检测，全自动血细胞分析仪XN1000对抗凝血液进行血常规指标检测，全自动生化分析仪罗氏C6000对患者血清进行生化指标检测。所有检测步骤严格按照仪器试剂说明书操作。1.4 观察指标
（1）研究对象基本特征；（2）研究对象淋巴细胞亚群水平；（3）研究对象细胞因子水平；（4）研究对象血常规及生化指标。
1.5 统计学处理
使用SPSS 26.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（$ \bar x \pm s $）描述，组间比较采用t检验；非正态的计数资料以“M（P25，P75）”描述，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验；计数资料组间比较采用χ2检验和Fisher确切概率法。以P < 0.05为差异有统计学意义，多重比较调整检验水准，调整后结果以P < 0.017为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 人口学特征
本研究共纳入研究对象80例，其中病例组50例，男性30例（60.0%），女性20例（40.0%），平均年龄（43.34±15.33）岁；对照组30例，男性17例（56.7%），女性13例（43.3%），平均年龄（42.37±11.64）岁，病例组与对照组在性别组成（χ2 = 0.176，P = 0.675）和年龄分布（t = -0.296，P = 0.771）差异无统计学意义（P > 0.05）。涂阴组22例（44.00%），平均年龄为（44.32±15.02）岁；涂阳组28例（56.00%），平均年龄（42.57±15.81）岁，涂阴组与涂阳组在性别、民族、职业、婚姻状况组成和年龄分布（t = -0.396，P = 0.694）差异无统计学意义（P > 0.05）。涂阴组在有吸烟史、耐药肺结核、痰培养阳性、GeneXpert阳性及有肺部空洞的比例均显著低于涂阳组（P < 0.05），见表1。
表 1 肺结核患者基本特征分析 [n（%）]Table 1. Analysis of basic characteristics of patients with pulmonary tuberculosis [n（%）]指 标 涂阴组（n = 22） 涂阳组（n = 28） χ2 P 性别 男 14（63.64） 19（67.86） 0.098 0.754 女 8（36.36） 9（32.14） 民族 汉族 14（63.64） 22（78.57） 1.363 0.243 少数民族 8（36.36） 6（21.43） 职业 农民 15（68.18） 20（71.43） 0.062 0.804 其他 7（31.82） 8（28.57） 婚姻状况 已婚/有伴侣 16（72.73） 21（75.00） 0.033 0.856 未婚/无伴侣 6（27.27） 7（25.00） 吸烟史 有 12（42.86） 17（77.27） 5.990 0.014* 无 16（57.14） 5（22.73） 耐药肺结核 是 0（0.00） 11（39.29） 17.623 <0.001* 否 22（100.00） 17（60.71） 痰培养 阳性 5（22.73） 26（92.86） 25.718 <0.001* 阴性 17（77.27） 2（7.14） GeneXpert 阳性 7（31.82） 28（100.00） 27.273 <0.001* 阴性 15（68.18） 0（0.00） 肺部空洞 有 3（13.64） 14（50.00） 7.260 0.007* 无 19（86.36） 14（50.00） *P < 0.05。 2.2 实验室指标特征
2.2.1 淋巴细胞亚群特征
本研究结果显示，涂阴组肺结核患者的CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T和NK细胞计数显著低于健康对照组（P < 0.05），CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T和B细胞计数显著高于涂阳组肺结核患者（P < 0.05），涂阴组肺结核患者的淋巴细胞亚群百分比与对照组和涂阳组无较大差异（P > 0.05）。见表2。
表 2 研究对象淋巴细胞亚群分布特征[M（P25，P75）]Table 2. Distribution characteristics of lymphocyte subsets in the study subjects[M（P25，P75）]指 标 对照组（n = 30） 涂阴组（n = 22） 涂阳组（n = 28） H P CD45+计数 2211 （1788 ，2435 ）1425 （1049 ，1991）△#1030 （685，1354 ）△40.760 <0.001* CD3+T计数 1527 （1234 ，1829）981（719， 1419 ）△#729（468，961）△ 33.982 <0.001* CD3+T百分比 72.87（65.46，77.43） 69.27（63.17，77.81） 71.39（65.54，76.45） 0.134 0.935 CD4+T计数 776（654，979） 549（344，785）△# 365（241，544）△ 34.107 <0.001* CD4+T百分比 35.84（31.90，41.40） 39.05（35.19，41.99） 36.43（31.00，41.40） 1.121 0.571 CD8+T计数 561（410，826） 383（247，640）△# 288（181，405）△ 24.117 <0.001* CD8+T百分比 27.17（21.84，33.31） 24.20（18.39，32.59） 27.54（23.35，32.62） 1.139 0.566 CD4+T/CD8+T 1.31（1.02，1.64） 1.55（1.02，2.11） 1.23（0.99，1.71） 1.945 0.378 B细胞计数 222（155，293） 171（101，280）# 126（68，195）△ 13.928 0.001* B细胞百分比 10.07（7.66，12.98） 12.42（6.93，19.50） 12.41（8.21，15.50） 1.985 0.371 NK细胞计数 392（283，463） 209（118，303）△ 153（78，216）△ 32.118 <0.001* NK细胞百分比 15.91（13.74，23.10） 13.33（8.04，21.16） 11.70（9.37，24.45） 4.440 0.109 *P < 0.05；绝对计数单位为个/μL；百分比单位为%；CD4+/CD8+无单位；与对照组比较，△P < 0.017；与涂阳组比较，#P < 0.017。 2.2.2 细胞因子特征
涂阴组肺结核患者IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17和IFN-γ水平显著高于健康对照组，IL-12和IFN-α水平显著低于健康对照组（P < 0.05）；涂阴组肺结核患者IL-2、IL-5、IL-6、IL-12、IL-17和IFN-γ水平显著低于涂阳组肺结核患者（P < 0.05）。见表3。
表 3 研究对象细胞因子分布特征[M（P25，P75）]Table 3. Distribution characteristics of cytokines in the study subjects[M（P25，P75）]指 标 对照组（n = 30） 涂阴组（n = 22） 涂阳组（n = 28） H P IL-1β 1.58（1.09，2.12） 5.68（3.38，8.41）△ 8.61（3.87，11.45）△ 26.655 <0.001* IL-2 2.49（1.71，4.04） 3.75（2.02，5.78）# 8.21（3.69，10.93）△ 12.521 0.002* IL-4 3.90（3.21，6.11） 3.13（0.72，5.83） 5.69（0.98，9.74） 4.595 0.101 IL-5 2.55（1.79，3.54） 1.49（0.43，3.39）# 3.36（0.74，5.04） 6.221 0.045* IL-6 7.90（6.31，14.62） 16.49（10.68，55.11）△# 56.86（21.24，99.64）△ 27.535 <0.001* IL-8 14.50（11.35，16.18） 31.70（18.47，69.06）△ 32.95（22.32，64.04）△ 18.696 <0.001* IL-10 3.12（2.54，5.89） 9.16（4.80，13.87）△ 10.81（5.85，14.41）△ 15.694 <0.001* IL-12 2.00（1.22，5.90） 0.23（0.06，1.43）△# 2.29（0.26，7.14） 12.210 0.002* IL-17 6.64（5.35，9.33） 11.99（7.42，14.33）△# 15.27（9.53，24.73）△ 15.697 <0.001* IFN-α 2.04（1.78，4.60） 0.23（0.06，0.96）△ 1.03（0.07，3.32） 16.769 <0.001* IFN-γ 4.06（3.47，5.92） 32.34（13.45，59.68）△# 53（26.31，103.19）△ 35.680 <0.001* TNF-α 1.77（1.44，2.25） 3.07（1.19，4.10） 3.69（0.98，9.74） 3.314 0.191 *P < 0.05；单位为pg/mL；与对照组比较，△P < 0.017；与涂阳组比较，#P < 0.017。 2.2.3 血常规及生化指标特征
涂阴组肺结核患者中性粒细胞比、CRP和降钙素原水平显著高于健康对照组（P < 0.05），红细胞、血红蛋白、总蛋白、白蛋白、白球比和前白蛋白水平显著低于健康对照组（P < 0.05）；涂阴组肺结核患者单核细胞水平和单核细胞比例显著低于涂阳组PTB患者（P < 0.05）。见表4。
表 4 研究对象血常规及生化指标分布特征[M（P25，P75）/（$\bar x \pm s $）]Table 4. Distribution characteristics of blood routine and biochemical indicators of the study subjects[M（P25，P75）/（$\bar x \pm s $）]指 标 对照组（n = 30） 涂阴组（n = 22） 涂阳组（n = 28） H/F P 白细胞（×109/L） 5.45（4.77，6.62） 6.15（4.93，6.95） 6.40（4.15，8.93） 1.399 0.497 中性粒细胞（×109/L） 3.07（2.68，3.89） 4.12（2.91，5.14） 4.33（2.96，6.20） 6.010 0.049* 中性粒细胞比（%） 57.35（54.97，60.77） 69.55（61.03，75.63）△ 67.70（60.30，74.93）△ 18.138 <0.001* 单核细胞（×109/L） 0.38±0.11 0.49±0.20# 0.63±0.27△ 10.312a <0.001* 单核细胞比（%） 6.74±1.76 7.83±2.56# 9.49±3.13△ 8.619a <0.001* 红细胞（×1012/L） 5.05±0.36 4.34±0.94△ 4.52±0.61△ 8.817a <0.001* 血红蛋白（g/L） 157±13.21 122±23.75△ 130±17.06△ 29.066a <0.001* 总蛋白（g/L） 74.40（71.35，77.20） 68.45（59.08，73.83）△ 68.30（61.93，70.95）△ 22.184 <0.001* 白蛋白（g/L） 46.6（44.58，48.65） 38.55（31.95，43.80）△ 37.55（34.95，43.10）△ 44.108 <0.001* 球蛋白（g/L） 27.90（26.27，29.62） 27.50（24.35，32.48） 28.35（26.13，31.88） 1.007 0.605 白球比 1.71±0.18 1.35±0.31△ 1.31±0.31△ 19.126a <0.001* 前白蛋白（mg/L） 268±49.19 173±48.99△ 180±78.29△ 4.413 0.018* CRP（mg/L） 0.64（0.43，1.53） 14.87（4.90，44.36）△ 20.61（5.99，38.65）△ 34.295 <0.001* 降钙素原（ng/L） 0.021（0.020，0.024） 0.09（0.04，0.13）△ 0.06（0.04，0.11）△ 25.259 <0.001* *P < 0.05；a表示检验统计量为F值；与对照组比较，△P < 0.017；与涂阳组比较，#P < 0.017。 3. 讨论
近年来，肺结核的研究焦点主要集中在涂阳和培阳肺结核的探究上，而在我国肺结核疫情中，痰涂片阴性的肺结核患者也具有显著影响力。相较于涂阳肺结核患者，涂阴肺结核患者的症状通常不典型，病情发展隐匿，对结核疫情的防控造成沉重负担[9]。因此，本研究通过对涂阴肺结核患者的实验室指标特征分析，剖析其独特之处，有助于进一步了解病情特点，为临床诊断和治疗提供科学、准确依据，从而提高肺结核患者的治愈率和生存质量。
本研究显示，涂阴肺结核仅占纳入患者的44.00%，与沈雷雷等[10]研究中涂阴肺结核病例所占比例类似，但明显低于70%，考虑与纳入患者均为住院患者，病情相对重有关。本研究中的吸烟史、耐药肺结核、痰培养阳性、GeneXpert阳性及肺部空洞等方面，涂阴组患者所占比例均低于涂阳组，这提示在某些风险因素上可能相对较少暴露或者其感染的结核分枝杆菌菌株差异会导致涂阴肺结核的发生。然而，由于本研究仅对部分因素进行了比较分析，仅能提供一个关于涂阴肺结核流行病学特征的初步认识。未来可扩大该部分研究范围，深入探讨涂阴肺结核患者的风险因素，以确认是否存在其他主要影响因素，为肺结核的预防和治疗提供新思路。
3.1 涂阴肺结核患者淋巴细胞亚群特征分析
在免疫学领域的研究中，肺结核患者的免疫状态备受关注。从CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T和NK细胞计数来看，涂阴组PTB患者的这些免疫细胞数量低于健康对照组，这说明涂阴肺结核患者的细胞免疫功能受到一定程度的损害，Yang等[11]学者也得出了类似结果。细胞免疫是机体抵抗病原体的重要防线，免疫细胞数量的减少可能使患者在面对结核分枝杆菌感染时，抵抗力减弱，更容易发病[12]。值得注意的是，尽管涂阴组PTB患者的免疫细胞计数较低，但仍然高于涂阳组。这表明涂阴肺结核患者的免疫功能损害程度相对较轻，这可能与他们体内的B细胞计数增高有关，B细胞计数的增高是机体在应对结核感染时，体液免疫发挥作用的表现。体液免疫是机体抵抗病原体的另一种重要防线，B细胞能够分泌抗体，特异性地识别和清除结核分枝杆菌[13]。在这种情况下，B细胞计数的增加表明机体对结核感染的应对能力较强，有助于控制病情的发展[14]。涂阳肺结核患者免疫细胞计数更低，可能意味着他们的免疫功能受损更严重，因此病情可能更为复杂。
3.2 涂阴肺结核患者细胞因子特征分析
细胞因子是一类由细胞产生的蛋白质，它们在生物体内起到调节免疫反应、炎症反应和细胞生长等多种生理过程的作用[15]。本研究发现，在涂阴组肺结核患者中，细胞因子水平存在显著变化。与健康对照组相比，涂阴组患者的IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17和IFN-γ水平明显升高。这表明肺结核感染状态下，患者体内存在强烈的免疫应答和炎症反应，高水平的细胞因子可能反映了结核分枝杆菌感染所引发的免疫系统激活[16]。然而，与涂阳组相比，涂阴组患者的IL-2、IL-5、IL-12和IFN-α水平较低，这种差异可能反映了涂阴肺结核在炎症程度和免疫应答上的不同，较低的IL-2、IL-5、IL-12和IFN-α水平可能意味着涂阴肺结核患者的炎症反应程度较轻，有相关研究表明IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10、IL-6等细胞因子不仅参与了结核感染的免疫反应，还能在一定程度上反映病情的活动性和严重程度[17]。
3.3 涂阴肺结核患者部分血常规和生化指标特征分析
本研究还对涂阴肺结核患者的部分血常规和生化指标作了比较分析，与对照组相比涂阴组肺结核患者中性粒细胞比、CRP和降钙素原水平升高，而红细胞、血红蛋白、总蛋白、白蛋白等水平降低，肺结核病作为一种慢性消耗性疾病，会导致患者体内营养物质的大量消耗，进而引发营养不良[18]，这些变化反映了涂阴肺结核患者存在炎症反应和营养不良的情况。单核细胞水平和比例的差异，也进一步揭示了涂阴肺结核与涂阳肺结核在免疫细胞分布上的差异，从而导致病情的发展的差异。值得注意的是，黄平等[19]的研究发现单核细胞与淋巴细胞比值及预后营养指数对菌阴肺结核的辅助诊断具有一定的价值，且联合诊断价值更高，这意味着，通过监测这些指标，不仅可以更准确地判断患者病情，还有助于提高诊断的准确性和治疗效果。
综上所述，涂阴肺结核与涂阳肺结核及健康人群在淋巴细胞亚群、细胞因子、血常规和生化指标等多个方面均存在显著差异。这些差异不仅有助于笔者更深入地理解涂阴肺结核的本质，也为制定针对性的诊疗方案提供了重要依据。未来，还需要进一步的研究来探索这些差异背后的机制，并寻找更有效的诊疗策略。
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图 1 HO-8910细胞经不同浓度MPA处理72h后细胞形态变化（10×）
A：MPA 0.1 μmol/L 作用HO-8910细胞；B：MPA 1 μmol/L 作用HO-8910细胞；C：MPA 10 μmol/L 作用HO-8910细胞；D：MPA 100 μmol/L 作用HO-8910细胞。
Figure 1. Cell morphology of HO-8910 after 12h treatment with different concentrations of pregestational hormone （10×）
图 2 不同浓度MPA对HO-8910细胞增殖以及凋亡影响
A：不同浓度MPA刺激下的HO-8910细胞增殖率；B：通过AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度的MPA刺激下HO-8910的细胞凋亡状况；C：不同浓度MPA刺激下的HO-8910细胞凋亡率。* P < 0.05；****P < 0.0001。
Figure 2. Effects of different concentrations of pregestational hormoneon proliferation and apoptosis of HO-8910 cell line
图 3 HOXA9在人卵巢癌细胞株中高表达
A：HOXA9在正常卵巢上皮细胞CP-H055，人卵巢癌细胞株HO-8910，SKOV3，A2780和OVCAR3的相对mRNA表达；B，C：HOXA9在正常卵巢上皮细胞CP-H055，人卵巢癌细胞株HO-8910的相对蛋白表达。**P < 0.01，****P < 0.0001。
Figure 3. HOXA9 was highly expressed in human ovarian cancer cell lines.
图 4 si-HOXA9质粒以及pcDNA-HOXA9质粒转染效率验证
A：qPCR验证HOXA9的mRNA表达水平；B～C：Western blot验证HOXA9的蛋白表达水平。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。
Figure 4. Validation of transfection efficiency of si- HOXA9 plasmid and pcDNA-HOXA9 plasmid
图 5 MPA通过降低HOXA9表达抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭
A，B：划痕实验验证MPA刺激下HOXA9对HO-8910细胞株侵袭能力的影响；C，D：Transwell实验验证MPA 刺激下HOXA9对HO-8910细胞株迁移能力的影响。*P < 0.05，***P < 0.001，****P < 0.0001。
Figure 5. MPA inhibited migration and invasion of human ovarian cancer cell line by reducing HOXA9 expression
图 6 MPA通过降低HOXA9表达抑制人卵巢癌细胞EMT进程
A： Westernblot检测HO-8910细胞株中EMT相关蛋白 Vimentin，N-cadherin，E-cadherin的表达变化；B：HO-8910细胞株中Vimentin的相对蛋白表达；C：HO-8910细胞株中N-cadherin的相对蛋白表达；D：HO-8910细胞株中E-cadherin的相对蛋白表达。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。
Figure 6. MPA repressed EMT in human ovarian cancer cells by reducing HOXA9 expression
表 1 抗体信息表
Table 1. information of antibodies
抗体（公司） 抗体稀释比例 HOXA9抗体（abcam ab140631） 1∶1 000 Vimentin抗体（CST 5741） 1∶1 000 E-cadherin抗体（CST 14472） 1∶1 000 N-cadherin抗体（CST 13116） 1∶1 000 GAPDH抗体（abcam ab8245） 1∶500 通用二抗（CST 7074） 1∶2 000 
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