Car-R/Ceph-S的铜绿假单胞菌<i>OprD</i>基因突变分析

郑喜; 马金珠; 李琴春; 高瑜; 潘颖; 宋贵波

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20230121

Car-R/Ceph-S的铜绿假单胞菌OprD基因突变分析

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230121

郑喜¹,
马金珠¹,
李琴春¹,
高瑜¹,
潘颖¹,
宋贵波^2, ,

1.
云南中医药大学第二附属医院检验科，云南昆明　650041
2.
昆明医科大学第一附属医院医学检验科/云南省检验医学重点实验室/云南省医学检验临床医学研究中心，云南昆明　650032

基金项目: 云南省高层次人才培养支持计划基金资助项目（YNWR-QNBJ-2020-261）;云南省医学学科后备人才基金资助项目（H-2018075）

详细信息

作者简介:
郑喜（1992～），男，云南昭通人，理学学士，检验师，主要从事临床微生物检验工作

通讯作者:
宋贵波，E-mail：songgb1229@163.com

中图分类号: R446.5
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出版历程
- 收稿日期: 2022-10-15
- 网络出版日期: 2022-12-23
- 刊出日期: 2023-01-18

Mutation Analysis of OprD Gene in Pseudomonas Aeruginosa with Car-R/ Ceph-S

1.
The Clinical Laboratory，The 2nd Affiliated Hospital of Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，KunmingYunnan 650041
2.
Dep. of Medical Laboratory，The 1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Yunnan Key Laboratory of Laboratory Medicine，Yunnan Medical Laboratory Clinical Medical Research Center，Kunming Yunnan 650032，China

摘要

摘要: 目的研究对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感（carbapenem-resistant but cephalosporin-susceptible ，Car-R/Ceph-S）的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）中OprD基因的突变类型。方法对2021年1月至2021年3月昆明医科大学第一附属医院临床分离的10株对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感的铜绿假单胞菌进行分离培养；使用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测该表型铜绿假单胞菌中OprD基因的携带情况，并测序分析OprD基因的突变类型。结果 10株菌株均显示出明显的OprD扩增条带，测序分析显示有以下突变类型，分别是移码突变2株、氨基酸替代突变8株、提前终止密码子2株、大片段缺失4株。结论对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感（Car-R/Ceph-S）的铜绿假单胞菌中OprD基因的突变类型呈多样化，点突变频率最高，还有大片段的缺失以及提前终止密码子。这些突变导致OprD结构发生改变，从而使得耐药现象的发生。
- 铜绿假单胞菌 /
- 碳青霉烯类耐药 /
- 头孢菌素敏感 /
- OprD /
- 基因突变 /
- 测序
Abstract: Objective To study the mutation types of OprD gene in Pseudomonas aeruginosa resistant to carbapenems but sensitive to cephalosporins （Car-R/Ceph-S）. Methods Ten strains of Pseudomonas aeruginosa which were resistant to carbapenems but sensitive to cephalosporins were isolated and cultured in the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University from January 2021 to March 2021. Polymerase chain reaction （PCR） was used to detect the carrying status of OprD gene in Pseudomonas aeruginosa, and the mutation type of OprD gene was analyzed by sequencing. Results All the 10 strains showed obvious OprD bands and the sequencing analysis showed that there were 2 frameshift mutations, 8 amino acid substitutions, 2 early termination codons and 4 large fragment deletions. Conclusion The mutation types of OprD gene in carbapenem-resistant but cephalosporin-sensitive （Car-R/Ceph-S） strains of Pseudomonas aeruginosa are diversified with the highest frequency of point mutations, deletion of large segments and early termination of codons. These mutations lead to changes in the structure of OprD, resulting in the occurrence of drug resistance.
- Pseudomonas aeruginosa /
- Carbapenem resistance /
- Cephalosporin sensitivity /
- OprD /
- Gene mutation /
- Sequencing

HTML全文

图 1 10株铜绿假单胞菌OprD的扩增条带

M：Marker；P1～P10分别表示10株菌株OprD的扩增条带。

Figure 1. Amplified bands of OprD of 10 Pseudomonas aeruginosa strains

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表 1 PA对12种抗生素的耐药率（n=10）

Table 1. Resistance rate of PA to 12 antibiotics （n=10）

抗菌药物	敏感		中介		耐药
抗菌药物	株数	敏感率（%）	株数	中介率（%）	株数	耐药率（%）
头孢他啶	10	100	0	0	0	0
头孢吡肟	10	100	0	0	0	0
亚胺培南	0	0	0	0	10	100
美罗培南	0	0	0	0	10	100
哌拉西林	8	80	2	20	0	0
哌拉西林/他唑巴坦	9	90	1	10	0	0
阿米卡星	10	100	0	0	0	0
庆大霉素	8	80	1	10	1	10
妥布霉素	8	80	0	0	2	20
环丙沙星	3	30	0	0	7	70
左氧氟沙星	3	30	1	10	6	60
氨曲南	1	10	6	60	3	30

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表 2 10株铜绿假单胞菌OprD基因突变分析

Table 2. Analysis of OprD gene mutation in 10 strains of Pseudomonas aeruginosa

菌株	突变类型	突变特征
P1	移码突变	533位点缺失1个碱基（C）
P2	移码突变	175-176位点缺失2个碱基（AG）
P3	氨基酸替代、提前终止密码子	D43N S57E S59R 193-195位点TGG→TGA
P4	氨基酸替代	T103S K115T F170L E185Q P186G V189T Q310E A315G G425A
P5	氨基酸替代、大片段缺失	S57E S59R V127L 466-830位点大片段缺失
P6	氨基酸替代、大片段缺失	S57E S59R V127L 466-830位点大片段缺失
P7	氨基酸替代、小片段缺失	D43N S57E S59R E202Q I210A E230K S240T N262T A267S A281G K296Q R310G V359L 1116-1118位点缺1个氨基酸（GTC）
P8	氨基酸替代、大片段缺失	S57E S59R V127L 466-830位点大片段缺失
P9	氨基酸替代、提前终止密码子	T103S K115T F170L E185Q P186G R310E A315G 1249-1251位点TGG→TGA
P10	氨基酸替代、大片段缺失	S57E S59R V127L 466-830位点大片段缺失

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