杜鹃兰化学成分及其生物活性研究

李玉鹏; 陈兴龙; 袁盛兴; 陈亚娟; 张荣平

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20230209

杜鹃兰化学成分及其生物活性研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230209

李玉鹏¹,
陈兴龙²,
袁盛兴³,
陈亚娟^{1, 4, ,},
张荣平^{1, 2, ,}

1.
昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明　650500
2.
云南中医药大学中药学院，云南省南药可持续利用重点实验室，云南昆明　650500
3.
曲靖市第一人民医院超声科，云南昆明　655000
4.
昆明医科大学康复学院，云南昆明　650500

基金项目: 国家自然科学基金资助项目（ 81960666）；云南省自然科学基金资助项目（2019FA033）；云南省创新团队项目（ 202005AE160004）；云南省“云岭学者” 项目（ YNWR-YLXZ-2019-019 ）

详细信息

作者简介:
李玉鹏（1978～），男，云南宣威人，博士，副教授，主要从事有机化学、药物化学教学和科研工作

通讯作者:
陈亚娟，E-mail：chenyajuan0873@163.com

张荣平，E-mail：zrpkm@163.com

中图分类号: R284.1
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出版历程
- 收稿日期: 2022-12-16
- 网络出版日期: 2023-01-31
- 刊出日期: 2023-02-25

Chemical Compounds Isolated from Cremastra Appendiculata and Their Bioactive Activity

1.
School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500
2.
School of Chinese Materia Medica and Yunnan Key Laboratory of Southern Medicine Utilization，Yunnan University of Chinese Medicine y，Kunming Yunnan 650500
3.
Dept. of Ultrasound，the First People’s Hospital of Qujing City，Yunnan Province，Kunming Yunnan 655000
4.
School of Rehabilitation，Kunming Medical University， Kunming Yunnan 650500，China

摘要

摘要: 目的研究杜鹃兰化学成分，发现其抗肿瘤活性成分。方法杜鹃兰经95%乙醇提取、硅胶柱层析、半制备HPLC和Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化，波谱分析（核磁共振氢谱、碳谱、和质谱）确定结构；应用MTT法，对部分化合物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果从杜鹃兰分离鉴定12个化合物，分别为bisbenzopyran （1），（22E）-ergosta-6，22-dien-3β，5α，8α-triol （2），3β-hydroxycholesta-5-ene （3），β-sistosterol （4），pinoresinol （5），5，4′-dihydroxy-7-（4-hydroxybenzoyl） -3′- methoxyflavone （6），4-methoxy-2，3，7-trihydroxyphenanthrene （7），2-hydroxy-4，7-dimethoxyphenanthrene （8），4，4′-dimethoxy-[1，1′-biphenanthrene]- 2，2′，7，7′-tetrol （9），4，7，4′，9′-tetramethoxy-[1，1′-biphenanthrene] 2，2′，7，7′-tetrol （10），Bavachinine （11），3-hydroxyphenpropionic acid-（2′-methoxy-4′- carboxy-phenol） ester （12）；化合物7～12抗肿瘤活性测试结果表明9和10对MCF-7/S细胞株显示了很好的抑制活性。结论化合物2，3，5，7，10，12为首次从本植物中分离得到，9，10对MCF-7/S细胞株IC₅₀分别为2.16，5.09 μmol/L。
- 杜鹃兰 /
- 化学成分 /
- 生物活性
Abstract: Objective To study the chemical compounds from the medicinal plants of Cremastra appendiculata and find its antitumor bioactive compounds. Methods The compounds were extracted by alcohol （95%） and isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20. Their structures were identified by spectroscopic analysis （¹H NMR, ¹³CNMR and EIMS）. The antitumor activity of the compounds was studied by MTT assay in vitro. Results Twelve compounds were obtained and identified as bisbenzopyran （1）, （22E）-ergosta-6, 22-dien-3β, 5α, 8α-triol （2）, 3β-hydroxycholesta-5-ene （3）, β-sistosterol （4）, pinoresinol （5）, 5, 4′-dihydroxy-7- （4-hydroxybenzoyl） -3′- methoxyflavone （6）, 4-methoxy-2, 3, 7- trihydroxyphenanthrene （7）, 2-hydroxy-4, 7-dimethoxyphenanthrene （8）, 4, 4′-dimethoxy-[1, 1′-biphenanthrene]- 2, 2′, 7, 7′-tetrol （9）, 4, 7, 4′, 9′-tetramethoxy-[1, 1′-biphenanthrene] 2, 2′, 7, 7′-tetrol （10）, Bavachinine （11）, 3-hydroxyphenpropionic acid- （2′-methoxy-4′- carboxy-phenol） ester （12）; . The results of anti-tumor activity test of compounds 7～12 showed that 9 and 10 showed good inhibitory activity on MCF-7/S cell line. Conclusions Compounds 2, 3, 5, 7, 10 and 12 were isolated from this plant for the first time. IC₅₀ of 9 and 10 on MCF-7/S cell lines were 2.16 and 5.09 respectively μmol/L.
- Cremastra appendiculata /
- Chemical constituents /
- Bioactive activity

HTML全文

杜鹃兰 [Cremastra appendiculata （D. Don） Makino] 为兰科杜鹃兰属植物，该属植物仅有2种，另一种为斑叶杜鹃兰[Cremastra unguiculata （Finet） Finet in Bull ]。杜鹃兰生于林下湿地或沟边湿地上，海拔500～2900 m。分布于中国、尼泊尔、不丹、锡金、印度、越南、泰国和日本^[1]。国内外学者从该药用植物分离得到菲类、二氢菲类、联苄类、二聚菲、菲醌等结构类型的化合物，药理研究表明所得化合物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤活性^[2]。为发现新的活性化合物，笔者对其进行了化合物的分离、结构鉴定和化合物生物活性筛选。

1.   材料与方法

1.1   研究材料

核磁共振仪: Bruker ASENDAVIIIHD 600 MHz （TMS为内标），N-1100旋转蒸发仪，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 （20～80 μm，Pharmacia Uppsala），柱层析硅胶（80～100目，200～300目，青岛海洋化工厂），高效薄层层析硅胶G板，HPLC （RP-18）半制备柱（10 min×250 mm，YMC-Pack ODS），有机溶剂均为工业纯，重蒸后使用；显色剂为10%硫酸乙醇溶液。三种肿瘤细胞株A549、MCF-7/S、SKOV-3由昆明医科大学药学院提供，SKOV-3培养于McCoy’s 5A Medium Modified含10% Fetal Bovine Serum FBS （premium grade，USA），A549、MCF-7/S均培养于ATCC-formulated RPMI-1640 Medium含10% Fetal Bovine Serum FBS （premium grade，USA）。

1.2   植物来源

杜鹃兰药材于2019年5月由昆明植分公司娄安瑞先生采自四川乐山，植物学名经昆明医科大学药学院陆露研究员鉴定。标本（编号：20190525）保存在昆明医科大学药学院。

1.3   研究方法

1.3.1   提取与分离方法

杜鹃兰假鳞茎，切片、阴干（7.53 kg），经95%的乙醇提取3次。将提取液在减压下浓缩，得到褐色浸膏，加水溶解，经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取部分为（165.71 g）。将该部分浸膏以80～100目硅胶拌样，样品经硅胶柱层析，混合溶剂体系石油醚/ 乙酸乙酯（100∶0、90∶10、80∶20、70∶30、60∶40、50∶50、0∶1）洗脱，薄层检测合并为7个部分（Fr.1～7）。

Fr.2 （5.90 g）经硅胶柱层析，石油醚/EtOAc （25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脱，薄层检测合并为5个部分（Fr.2.1～2.5），Fr.2.1 （1.1g）经凝胶柱层析（CHCl₃/CH₃OH 10:90）得到3个化合物2 （15.0 mg），3 （7.3 mg）；Fr.2.2 （0.5 g）经制备薄层层析得到化合物4 （7.6 mg）；Fr.2.3 （0.7 g）经半制备HPLC得到化合物5 （11.5 mg），6 （6.5 mg）；Fr.2.5 （0.3g）经凝胶柱层析（CH₃OH/ H₂O，90∶10）得到化合物1 （10.5 mg）。

Fr.3 （16.52 g）经RP-18柱色谱（CH₃OH/H₂O 7∶3），硅胶柱层析CHCl₃ / EtOAc （25∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1），薄层检测合并为3个部分（Fr.3.1～3.3），Fr.3.1 （2.3 g）经硅胶柱层析CHCl₃ / 丙酮（15∶1）得到化合物7 （25.7 mg）和化合物37 （31.3 mg）；Fr.3.2 （0.52 g）经HPLC （CH₃OH/H₂O，65∶35），得到化合物8 （39.8 mg）； Fr.3.3 （8.2 g）经硅胶柱层析（氯仿/丙酮10∶1）洗脱，经Sephadex LH-20 （CH₃OH/CHCl₃，10∶1）进行纯化，得到化合物9 （9.2 mg），10 （8.5 mg），11 （9.3 mg），12 （30.1 mg）。

1.3.2   抗肿瘤活性筛选方法

A549、MCF-7/S细胞接种于含10%FBS的RPMI-1640培养液中，SKOV-3细胞接种于含10%FBS的McCoy’s 5A 培养液中，均在37 ℃，95%湿度，5%CO₂培养箱中培养，1～2 d传代1次，调整细胞浓度不超过6×10⁴/mL，取指数生长期细胞进行实验。用MTT法检测化合物对A549、MCF-7/S、SKOV-3细胞增殖的抑制作用。取对数生长期的A549、MCF-7/S、SKOV-3细胞，调整细胞浓度为6×10⁴/mL，加入96孔培养板（使其终浓度为6×10³/100 μL），接种细胞之后静置1 h再放入细胞培养箱（避免96孔板的边缘效应）。24 h细胞贴壁之后再加化合物7～12使其终浓度为200，100，50，25，12.5，6.25 μmol/L，每个浓度设5个平行孔，并设阳性、阴性、空白及DMSO对照孔，在37 ℃，95%湿度，5%CO₂培养箱中孵育48 h后加入MTT 20 μL，继续孵育4 h后，以570 nm、630 nm双波长检测OD值。按公式计算不同浓度的OD值均数及标准差，再计算细胞增殖抑制率，实验重复3次，减少误差。

2.   结果

2.1   化合物波谱数据

化合物1 bisbenzopyran：白色晶体，MF: C₁₄H₁₀O₂，MW：210;¹HNMR （CD₃OD_， 600 MHz）: δ4.23 （2H，dd，J = 9.0，6.8 Hz，H-2a，H- 2a′），3.84 （2H，dd，J= 9.0，6.5 Hz，H-2e，H- 2e′），3.04 （2H，m，H-3，H- 3′），4.70 （2H，d，J = 4.2 Hz，H-4，H-4′），6.95 （2H，d，J = 1.8Hz，H-5，H-5′），6.80 （2H ，dd，J = 8.0，1.8 Hz，H-7，H-7′），6.82 （2H，dd，J = 8.0 Hz，H-8，H-8′），3.86 （6H，s，-OCH₃）. ¹³C NMR （CD₃OD_， 150 MHz）：δ_C71.2 （t，C-2，C-2′），53.9 （d，C-3，C-3′）， 86.1 （d，C-4，C-4′），114.4 （d，C-5，C-5′），147.7 （s，C-6，C-6′），118.6 （d，C-7，C-7′），109.6 （d，C-8，C-8′），145.9 （s，C-9，C-9′），132.4 （s，C-10，C-10′），55.0 （q，6，6′-OCH₃），其波谱数据与文献报道基本一致。

化合物2 （22E）-ergosta-6，22-dien-3β，5α，8α-triol：黄色固体，MF：C₂₈H₄₆O₃，ESI-MS m/z：431 [M+H]⁺. ¹HNMR （CDCl₃）：δ 6.61 （1H，d ，J = 8.3 Hz，H-7），6.25 （1H，d，J = 8.3 Hz，H-6），5.20 （1H，m，H-23），5.18 （1H，m，H-22），2.10 and 1.91 （2H，m，CH₂-4），2.04 （1H，m，H-24），2.03 （1H，m，H-2β），1.94 （1H，m，H-2α），1.86 （1H，m，H-20），1.76 and 1.58 （2H，m，CH₂-12），1.68 （1H，m，H-1β），1.61 （2H，m，CH₂-11），1.58 （1H，m，H-9），1.48 （1H，m，H-25），1.34 （1H，m，CH₂-16），1.25 （1H，m，H-2α），1.22 （2H，m，CH₂-15），1.21 （1H，m，H-14），1.09 （3H，d，J = 6.3 Hz，CH₃-28），0.92 （3H，d，J = 6.1 Hz，CH₃-21），0.90 （3H，s，CH₃-19），0.84 （3H，d，J = 6.5 Hz，CH₃-26），0.82 （3H，s，CH₃-18），0.81 （3H，d，J = 6.5 Hz，CH₃-27）. ¹³CNMR （CDCl₃）：δ 33.4 （t，C-1），30.5 （t，C-2），66.8 （d，C-3），39.7 （t，C-4），82.5 （s，C-5），135.8 （d，C-6），131.1 （d，C-7），79.8 （s，C-8），51.5 （d，C-9），37.3 （s，C-10），20.3 （t，C-11），37.3 （t，C-12），44.9 （s，C-13），51.5 （d，C-14），23.8 （t，C-15），29.0 （t，C-16），56.7 （d，C-17），13.2 （q，C-18），18.5 （q，C-19），40.0 （d，C-20），20.3 （q，C-21），135.6 （d，C-22），131.1 （d，C-23），43.2 （d，C-24），33.4 （d，C-25），20.0 （q，C-26），21.0 （q，C-27），17.9 （q，C-28）。

化合物3 3β-hydroxy-cholesta-5-ene:白色晶体，MF：C₂₇H₄₆O，ESI-MS m/z：389 [M+H]⁺. ¹HNMR （CDCl₃）：δ 5.35 （1H，s ，H-6），3.54 （1H，m，H-3），1.01 （3H，s，H-19），0.81～0.92 （9H，m，3×CH₃），0.68 （3H，s，18-CH₃）. ¹³CNMR （CDCl₃）：δ 37.3 （t，C-1），31.7 （t，C-2），71.8 （d，C-3），42.3 （t，C-4），140.8 （s，C-5），121.7 （d，C-6），31.9 （t，C-7），31.9 （s，C-8），50.2 （d，C-9），36.5 （s，C-10），21.1 （t，C-11），39.8 （t，C-12），42.3 （s，C-13），56.8 （d，C-14），24.3 （t，C-15），28.2 （t，C-16），56.1 （d，C-17），12.0 （q，C-18），19.1 （q，C-19），36.2 （d，C-20），18.8 （q，C-21），29.2 （t，C-22），23.1 （t，C-23），39.8 （t，C-24），28.2 （d，C-25），23.1 （q，C-26），23.1 （q，C-27）。

化合物4：β-sistosterol 白色针状晶体，易溶于氯仿。与标准品β-sistosterol共薄层层析，在三种溶剂系统均显一个点，R_f与β-谷甾醇基本一致。

化合物5 Pinoresinol :白色固体，C₂₀H₂₂O₆，¹HNMR （CD₃OD_， 600 MHz）: δ 6.95 （2H，s，H-2′，H- 2′′），6.81 （2H，d，J = 8.0 Hz，H-6′，H- 6′′），6.77 （2H，d，J = 8.0 Hz，H-5′，H-H-5′′），4.70 （2H，d，J = 4.2 Hz，H-2，H-6），4.22 （2H ，dd，J = 9.0，6.8 Hz，H_b-4，H-8），3.87 （6H，s，-OCH₃），3.86 （2H，dd，J= 9.3，3.7 Hz，H_a-4，H-8），3.03 （2H，m，H-1，H-5）. ¹³CNMR （CD₃OD_， 150 MHz）: δ147.7 （s，C-3′，C-3′′），145.9 （s，C-4′，C-4′′）， 132.4 （s，C-1′，C-1′′），118.6 （d，C-6′，C-6′′），114.4 （d，C-5′，C-5′′），109.6 （d，C-2′，C-2′′），86.1 （d，C-2，C-6），71.2 （t，C-4，C-8），55.0 （d，C-3′，C-3′′）。

化合物6 5，4′-dihydroxy-7-（4-hydroxybenzoyl）-3′-methoxyflavone：黄色粉末，MF：C₂₃H₁₆O₈，MW：420；EI-MS，420 [M]⁺；¹HNMR [CD₃OD，500 MHz]：δ 6.90 （2H，d，J = 8.6，H-3′′，5′′），7.82 （2H，d，J = 8.6，H-2′′，6′′），6.57 （1H，s，H-3），6.19 （1H，s，H-6），6.44 （1H，s，H-8），7.45 （1H，s，H-2′），6.92 （2H，d，J = 8.0，H-5′），7.47 （1H，d，J = 8.0，H-6′），3.95（3H，s，3′-OCH₃）; ¹³CNMR [CD₃OD，125 MHz]: δ 166.3 （s，C-2），103.8 （s，C-3），183.9 （s，C-4），100.1 （d，C-4a），163.2 （s，C-5），100.1 （s，C-6），166.6 （s，C-7），95.0 （d，C-8），159.4 （s，C-8a），123.2 （s，C-1′），107.0 （d，C-2′），149.1（s，C-3′），152.5 （s，C-4′），117.0 （d，C-5′），121.7 （d，C-6′），117.5 （s，C-1′′），129.4 （d，C-2′′，6′′），117.0 （d，C-3′′，5′′），162.8 （s，C-4′′），166.3 （s，C-7′′），64.1 （q，3′-OCH₃），其波谱数据与文献报道基本一致。

化合物7 4-methoxy-2，3，7-trihydroxyphenanthrene：白色粉末，MF：C₁₅H₁₂O₄，MW：256；ESI-MS：m/z 257[M+H]⁺，¹HNMR [（CD₃）₂CO，600 MHz]：δ 7.12 （1H，s，H-1），9.38 （1H，d，J = 9.3，H-5），7.20 （1H，d，J = 9.3，2.8，H-6），7.29 （1H，d，J = 2.8，H-8），7.98 （1H，d，J = 8.7，H-9），7.29 （1H，d，J = 8.7，H-10），4.07 （3H，s，4-OCH₃）；¹³CNMR [（CD₃）₂CO，125MHz]：δ 107.9 （d，C-1），155.2 （s，C-2），153.2 （s，C-3），156.7 （s，C-4），121.0 （s，C-4a），124.4 （s，C-4b），129.1 （d，C-5），115.8 （d，C-6），159.2 （s，C-7），115.9 （d，C-8），133.2 （s，C-8a），127.3 （d，C-9），125.1 （d，C-10），125.1 （s，C-10a），54.2 （q，3-OCH₃）。

化合物8 2-hydroxy-4，7-dimethoxyphenanthrene：紫色固体，MF：C₁₆H₁₄O₃，MW：254；ESI-MS：m/z 255[M+H]⁺，¹HNMR [（CD₃）₂CO，600 MHz]：δ 9.44 （1H，d，J = 9.4，H-5），7.64 （1H，d，J = 8.7，H-9），7.57 （1H，d，J = 8.7，H-10），7.32 （1H，d，J = 2.8，H-8），7.19 （1H，d，J = 9.4，2.8，H-6），6.94 （1H，d，J = 1.9，H-1），6.85 （1H，d，J = 1.9，H-3），4.11 （3H，s，4-OCH₃），3.95 （3H，s，7-OCH₃）；¹³CNMR [（CD₃）₂CO，125MHz]：δ 159.5 （s，C-4），156.7 （s，C-2），155.5 （s，C-7），134.8 （s，C-10a），133.1 （s，C-8a），129.0 （d，C-5），127.7 （d，C-9），127.1 （d，C-10），125.0 （s，C-4b），116.2 （d，C-6），114.7 （s，C-4a），108.7 （d，C-8），104.6 （d，C-1），99.5 （d，C-3），55.1 （q，4-OCH₃），54.6 （q，7-OCH₃），其波谱数据与文献报道基本一致。

化合物9 4，4′-dimethoxy-[1，1′-biphenanthrene] 2，2′，7，7′-tetrol：红色油状物，MF：C₃₀H₂₂O₆，MW: 478; ESI-MS：m/z 479 [M+H]⁺，¹HNMR [CD₃OD，600 MHz]: δ 9.49 （2H，d，J = 9.30，H-5，5′），7.14 （2H，dd，J = 9.30，2.7，H-6，6′），7.33 （2H，d，J = 9.2，H-9，9′），7.03 （1H，d，J = 9.2，H-10，10′），7.01 （2H，s，H-3，3′），7.09 （2H，d，J = 2.7，H-8，8′），4.18 （6H，s，4，4′-OCH₃）; ¹³CNMR [（CD₃）₂CO，125MHz]: δ 110.1 （d，C-1，1′），159.2 （s，C-2，2′），99.0 （d，C-3，3′），153.2 （s，C-4，4′），115.6 （s，C-4a，4a′），124.4 （s，C-4b，4b′），129.1 （d，C-5，5′），110.7 （d，C-6，6′），154.0 （s，C-7，7′），115.9 （d，C-8，8′），133.2 （s，C-8a，8a′），127.1 （d，C-9，9′），124.6 （d，C-10，10′），134.1 （s，C-10a，10a′），54.7 （q，4，4′-OCH₃），其波谱数据与文献报道基本一致。

化合物10 4，7，4′，9′-tetramethoxy-[1，1′-biphenanthrene]2，2′，7，7′-tetrol :红色油状物，MF: C₃₂H₂₆O₈，ESI-MS: m/z 537[M-H]⁺; ¹HNMR [（CD₃）₂CO，600 MHz]: δ 6.95 （1H，s，H-3），9.32 （1H，d，J = 9.4，H-5），7.20 （1H，dd，J = 9.4，2.4，H-6），7.76 （1H，d，J = 2.4，H-8），6.94 （1H，s，H-10），4.15 （3H，s，4-OCH₃），3.84 （3H，s，9-OCH₃），7.03 （1H，s，H-3′），9.25 （1H，s，H-5′），7.24 （1H，s，H-8′），7.39 （1H，d，J = 8.6，H-9′），7.01 （1H，d，J = 8.6，H-10′），4.24 （3H，s，4′-OCH₃），4.07 （3H，s，6′-OCH₃）; ¹³CNMR [（CD₃）₂CO，150 MHz]: δ 109.3 （s，C-1），159.4 （s，C-2），99.2 （d，C-3），159.5 （s，C-4），115.5 （s，C-4a），125.4 （s，C-4b），127.2 （d，C-5），122.4 （d，C-6），159.4 （s，C-7），109.0 （d，C-8），127.1 （s，C-8a），154.2 （s，C-9），101.0 （d，C-10），134.6 （s，C-10a），55.2 （q，4-OCH₃），55.1 （q，9-OCH₃），111.3 （s，C-1′），150.0 （s，C-2′），99.7 （d，C-3′），159.4 （s，C-4′），120.7 （s，C-4a′），124.9 （s，C-4b′），109.3 （d，C-5′），147.7 （s，C-6′），145.2 （s，C-7′），111.3 （d，C-8′），127.1 （s，C-8a′），126.7 （d，C-9′），124.5 （d，C-10′），134.2 （s，C-10a′），60.5 （q，4′-OCH₃），55.3 （q，6′-OCH₃）。

化合物11 Bavachinine:黄色粉末，MF: C₂₁H₂₂O₄，MW: 338; ESI-MS，361 [M+Na]⁺; ¹HNMR [CDCl₃，500 MHz]: δ 7.30 （2H，d，J = 8.0，H-3′，5′），6.91 （2H，d，J = 8.0，H-2′，6′），7.67 （1H，s，H-5），6.43 （1H，s，H-8），5.36 （1H，dd，J = 13.0，3.0，H-2），5.27 （1H，m，H-12），3.23 （2H，d，J = 7.5，H-11），3.03 （1H，dd，J = 17.0，，13.5，H-3a），2.78 （1H，d，J = 17.0，3.0，H-3b），1.72 （3H，s，H-14），1.68 （1H，s，H-15），3.85（3H，s，7-OCH₃）; ¹³CNMR [CDCl₃，125 MHz]: δ 80.2 （d，C-2），44.3 （t，C-3），192.6 （s，C-4），127.5 （d，C-5），125.5 （s，C-6），164.9 （s，C-7），99.3 （d，C-8），163.1 （s，C-9），114.2 （s，C-10），28.2 （t，C-11），122.1 （d，C-12），133.5 （s，C-13），18.1 （q，C-14），26.2 （q，C-15），130.8 （s，C-1′），128.3 （d，C-2′，6′），116.2 （d，C-3′，5′），157.2 （s，C-4′），其波谱数据与文献报道基本一致。

化合物12 3-hydroxy-phenpropionic acid-（2′-methoxy-4′-carboxy-phenol） ester ：红色晶体，MF: C₁₇H₁₆O₆，MW: 316; ESI-MS: m/z 317[M+H]⁺; ¹HNMR [（CD₃）₂CO，600 MHz]: δ 6.69 （1H，M，H-2），6.61 （1H，dd，J = 7.9，1.9，H-4），6.93 （1H，t，J = 7.9，H-5），6.91 （2H，m，H-6），2.79 （2H，t，J = 8.0，H-7），2.06 （2H，t，J = 8.0，H-8），7.60 （1H，s，H-3′），7.57 （1H，d，J = 8.0，H-5′），6.92 （1H，d，J = 8.0，H-6′），3.93 （3H，s，2′-OCH₃）; ¹³CNMR [（CD₃）₂CO，125MHz]: δ 143.2 （s，C-1），115.1 （d，C-2），161.7 （s，C-3），112.6 （d，C-4），130.0 （d，C-5），119.5 （d，C-6），29.3 （t，C-7），37.7 （t，C-8），170.0 （s，C-9），151.2 （s，C-1′），147.2 （d，C-2′），114.6 （d，C-3′），122.0 （s，C-4′），124.0 （d，C-5′），115.1 （d，C-6′），54.4 （q，2′-OCH₃），166.7 （s，-COOH）。

2.2   化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果

对化合物7～12进行了人体肺癌细胞株（A549）、人体乳腺癌药物敏感细胞株（MCF-7/S）、人体卵巢癌细胞株（SKOV-3）抑制活性，见表1。

表 1 化合物7～12对3种细胞株的细胞毒活性IC₅₀ （μmol/L）

Table 1. Cytotoxic activities of compounds 7～12 on three cell lines IC₅₀ （μmol/L）

化合物 A549 MCF-7/S SKOV-3

7 41.33 43.30 41.57
8 87.08 92.87 40.59
9 51.69 2.16 56.05
10 23.33 5.09 23.08
11 44.34 40.47 20.11
12 15.73 12.30 22.95
DDP 22.02 10.02 14.15

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研究结果如上表，研究发现化合物9和10对MCF-7/S细胞株显示了很好的抑制活性，其IC₅₀分别为2.16，5.09 μmol/L，以上作用强于阳性对照品DDP。

3.   讨论

药用植物杜鹃兰分离鉴定化合物结构类型为：化合物1为吡喃酮类二聚体^[3]，化合物3～4为甾体化合物^[4-8]，化合物5为木脂素类化合物^[9]，化合物6为黄酮类化合物^[10]，化合物7～10为菲类化合物^[7-15]，化合物11为二氢黄酮类化合物^[16-17]，化合物12为酯类化合物^[16-17]。抗肿瘤活性测试结果表明化合物9和10对MCF-7/S细胞株显示了很好的抑制活性。该研究为杜鹃兰的开发和利用提供了基础研究。

近年来，国内学者Wang Y等^[18]从杜鹃兰中分离得到化合物Blestriarene A，Blestriarene B，使用 MTT 方法评估化合物对 A549 和 Bel7402 细胞系的细胞毒性，以bufalin作为阳性对照。在检测的化合物中，两个化合物对A549细胞株表现出较弱的细胞毒活性（IC₅₀分别为47.5、48.2 l M）。刘量等^[19] 从杜鹃兰分离出5种新的双菲cremaphenanthrenes A-E 以及6个已知的双菲，对所获得的化合物都在体外测试了对结肠（HCT-116）、宫颈（Hela）和乳腺癌（MDA-MB-231）癌细胞系的细胞毒性活性，所得二聚菲化合物均对三种细胞株表现出中等或弱的细胞毒性。《中国药典》中收载的中药材山慈菇，为兰科植物杜鹃兰、独蒜兰或云南独蒜兰的干燥假鳞茎。随着对山慈菇及其提取物生物活性研究的不断深入，其抗肿瘤、抗氧化、神经保护、抗菌、抗痛风、降脂降糖、提高造血功能及增强免疫等药理作用受到广泛关注；山慈菇还常与其他中药组成复方，在呼吸系统、消化系统、内分泌代谢系统等疾病的治疗方面疗效确切，具有很好的临床应用前景^[20～22]。

表 1 化合物7～12对3种细胞株的细胞毒活性IC₅₀ （μmol/L）

Table 1. Cytotoxic activities of compounds 7～12 on three cell lines IC₅₀ （μmol/L）

化合物 A549 MCF-7/S SKOV-3

7 41.33 43.30 41.57
8 87.08 92.87 40.59
9 51.69 2.16 56.05
10 23.33 5.09 23.08
11 44.34 40.47 20.11
12 15.73 12.30 22.95
DDP 22.02 10.02 14.15

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参考文献(22)

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1. 材料与方法
1.1 研究材料
1.2 植物来源
1.3 研究方法
2. 结果
2.1 化合物波谱数据
2.2 化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果
3. 讨论

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杜鹃兰化学成分及其生物活性研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230209

作者简介:
李玉鹏（1978～），男，云南宣威人，博士，副教授，主要从事有机化学、药物化学教学和科研工作

通讯作者:
陈亚娟，E-mail：chenyajuan0873@163.com

张荣平，E-mail：zrpkm@163.com

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Chemical Compounds Isolated from Cremastra Appendiculata and Their Bioactive Activity

1. 材料与方法

1.1 研究材料

1.2 植物来源

1.3 研究方法

1.3.1 提取与分离方法

1.3.2 抗肿瘤活性筛选方法

2. 结果

2.1 化合物波谱数据

2.2 化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果

3. 讨论

期刊类型引用(4)

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目录

1. 材料与方法

1.1 研究材料

1.2 植物来源

1.3 研究方法

2. 结果

2.1 化合物波谱数据

2.2 化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果

3. 讨论

化合物	A549	MCF-7/S	SKOV-3
7	41.33	43.30	41.57
8	87.08	92.87	40.59
9	51.69	2.16	56.05
10	23.33	5.09	23.08
11	44.34	40.47	20.11
12	15.73	12.30	22.95
DDP	22.02	10.02	14.15

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[12]	李玉鹏, 翁瑞旋, 陶永生, 李双, 王娟, 黄荣, 文小玲, 张桂花. 云南傣药竹叶兰化学成分的研究, 昆明医科大学学报.
[13]	陈亚萍. 云南球花石斛花化学成分的研究, 昆明医科大学学报.
[14]	陈亚萍. 地花菌属真菌化学成分及药理活性研究, 昆明医科大学学报.
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杜鹃兰化学成分及其生物活性研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230209

作者简介: 李玉鹏 （1978～ ），男，云南宣威人，博士，副教授，主要从事有机化学、药物化学教学和科研工作

通讯作者: 陈亚娟，E-mail：chenyajuan0873@163.com 张荣平，E-mail：zrpkm@163.com

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出版历程

Chemical Compounds Isolated from Cremastra Appendiculata and Their Bioactive Activity

1. 材料与方法

1.1 研究材料

1.2 植物来源

1.3 研究方法

1.3.1 提取与分离方法

1.3.2 抗肿瘤活性筛选方法

2. 结果

2.1 化合物波谱数据

2.2 化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果

3. 讨论

期刊类型引用(4)

其他类型引用(1)

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出版历程

目录

1. 材料与方法

1.1 研究材料

1.2 植物来源

1.3 研究方法

2. 结果

2.1 化合物波谱数据

2.2 化合物7～12抗肿瘤活性筛选结果

3. 讨论

作者简介:
李玉鹏（1978～），男，云南宣威人，博士，副教授，主要从事有机化学、药物化学教学和科研工作

通讯作者:
陈亚娟，E-mail：chenyajuan0873@163.com

张荣平，E-mail：zrpkm@163.com