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云南省暗娼人群生殖道沙眼衣原体基因型分析

张钰滢,  曾志君,  陈会超,  张小斌,  杨朝军,  戴洁,  董莉娟,  张琬悦,  马艳玲,  陈敏

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文章导航 > 昆明医科大学学报  > 2023 >  44(2): 40-44
张钰滢, 曾志君, 陈会超, 张小斌, 杨朝军, 戴洁, 董莉娟, 张琬悦, 马艳玲, 陈敏. 云南省暗娼人群生殖道沙眼衣原体基因型分析[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(2): 40-44. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230224
引用本文: 张钰滢, 曾志君, 陈会超, 张小斌, 杨朝军, 戴洁, 董莉娟, 张琬悦, 马艳玲, 陈敏. 云南省暗娼人群生殖道沙眼衣原体基因型分析[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(2): 40-44. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230224
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Yuying ZHANG, Zhijun ZENG, Huichao CHEN, Xiaobin ZHANG, Zhaojun YANG, Jie DAI, Lijuan DONG, Wanyue ZHANG, Yanling MA, Min CHEN. Analysis of Chlamydia Trachomatis Genotype among Female Sex Workers in Yunnan Province[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(2): 40-44. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230224
Citation: Yuying ZHANG, Zhijun ZENG, Huichao CHEN, Xiaobin ZHANG, Zhaojun YANG, Jie DAI, Lijuan DONG, Wanyue ZHANG, Yanling MA, Min CHEN. Analysis of Chlamydia Trachomatis Genotype among Female Sex Workers in Yunnan Province[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(2): 40-44. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230224
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云南省暗娼人群生殖道沙眼衣原体基因型分析

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230224
  • 1.

    昆明医科大学公共卫生学院，云南 昆明　650500

  • 2.

    云南省疾病预防控制中心性病艾滋病防制所，云南 昆明　650022

基金项目: 云南省科技人才和平台计划项目（2019HB053）；“十三五”国家科技重大专项（2018ZX10715006）
详细信息
    作者简介:

    张钰滢（1996～），女，重庆市永川人，硕士研究生，主要研究内容为HIV分子流行病学

    曾志君和张钰滢对本文有同等贡献

    通讯作者:

    马艳玲，E-mail：mayanling68@aliyun.com

    陈敏，E-mail：chenminyx@126.com

  • 中图分类号: R759

Analysis of Chlamydia Trachomatis Genotype among Female Sex Workers in Yunnan Province

  • 1.

    School of Public Health，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500

  • 2.

    Institute for AIDS/STDs Prevention and Control，Yunnan Provincial Center for Disease Control and Prevention，Kunming Yunnan 650022，China

摘要

    摘要
  • 摘要:   目的  了解云南省暗娼人群中生殖道沙眼衣原体（chlamydia trachomatis，CT）的亚型分布情况及流行病学特征。  方法  2020年结合艾滋病哨点监测开展生殖道沙眼衣原体调查，收集生殖道沙眼衣原体核酸阳性样本374例，使用巢式PCR扩增CT的OmpA基因区并进行分析。  结果  在173个成功获得序列的样本中，共检测出7种基因型，其中以E型、F型、J型和D型为主要基因型，分别占24.9%（43/173）、21.4%（37/173）、19.1%（33/173）、17.9%（31/173），其他包括G型（9.3%，16/173）、K型（4.6%，8/173）和H型（2.9%，5/173）。不同型别之间在调查地区、户籍、是否为边境州（市）、年龄、民族、文化程度、婚姻状况、样本来源和场所档次等特征上差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  云南省暗娼人群中存在多种的CT亚型，其分布在主要的人口学特征上无差异，可为进一步控制CT的传播提供指导，也可为将来治疗和疫苗研究提供基础信息。
    Abstract:   Objective  To investigate the serovar distribution and epidemiological characteristics of Chlamydia trachomatis （CT）in female sex workers （FSWs） from Yunnan Province.   Methods  A survey of Chlamydia trachomatis in the genital tract was conducted in 2020 in conjunction with HIV sentinel surveillance, and 374 nucleic acid-positive samples of Chlamydia trachomatis in the genital tract were collected. The OmpA gene region of CT was amplified by nested polymerase chain reaction （PCR） and analyzed.   Results  Seven genotypes were detected in 173 samples successfully genotyped, among which genotype E （24.9%, 43/173）, genotype F （21.4%, 37/173）, genotype J （19.1%, 33/173）, genotype D （17.9%, 31/173） were the main genotypes, and the others included genotype G （9.3%, 16/173）, genotype K （4.6%, 8/173）and genotype H （2.9%, 5/173）. No statistically significant differences were found among the different genotypes in characteristics such as survey area, household registration, whether it was a border state （city）, age, ethnicity, education level, marital status, sample source, and place class.   Conclusion  Multiple subtypes of CT exist in FSWs in Yunnan Province, and their distribution does not differ in terms of major demographic characteristics. This study may provide guidance for further control of CT transmission and provide basic information for future treatment and vaccine studies.
    • HTML全文

  • WHO估计2020年全球4种性传播感染（梅毒、淋病、CT和滴虫感染）新发病例共3.74亿人，其中CT感染者为1.29亿，较2016年增长1.4%[1]。在中国105个国家级性病监测点中，生殖道沙眼衣原体的感染率从2015年的37.18/10万增长到2019年的55.32/10万，年均增长10.44%[2]。就云南省而言，2012～2017年生殖道沙眼衣原体感染报告发病数年均增长率为26.15%，报告发病率年均增长率为25.35%，并且比数图法结果显示生殖道沙眼衣原体感染在云南省有流行的趋势[3]。沙眼衣原体分型是了解其感染流行病学特征的重要技术手段。毒株分型对确定毒株的器官/组织嗜性；鉴定和区分新感染、持续感染和再感染；了解性网络伴侣中的传播动态以及对特定克隆的进化监测具有重要意义。为进一步遏制云南省CT的传播，本研究针对暗娼人群展开了CT基因型的分子流行病学调查。

    1.   资料与方法

    1.1   研究对象

    资料来源按照《云南省淋病及生殖道沙眼衣原体感染专题调查工作方案》，在全省16个州（市）各抽取1个艾滋病监测哨点，同时开展淋病及生殖道沙眼衣原体感染情况的调查，每个点样本量为200，调查对象为目前从事商业性性交易的妇女，样本要求来源于社区（必须覆盖街头流动暗娼和乡镇暗娼），根据当地暗娼危险行为状况，可将发生高危行为的场所分为高、中、低3个层次。低等层次场所的暗娼不得低于调查样本量的10%，中等层次场所的暗娼不低于40%，并按要求采集尿液样本，调查对象签署知情同意书。最终收集调查对象中CT核酸检测为阳性的样本374例，进行CT的基因型检测，本研究通过云南省生物医学伦理审查委员会批准。

    1.2   方法

    1.2.1   流行病学资料收集

    整合艾滋病哨点监测工作，按照《云南省艾滋病哨点监测方案》中规定的方法，采用一对一问卷调查，填写《暗娼健康调查问卷》开展问卷调查，问卷内容主要包括一般人口学信息、性病艾滋病防治知识、毒品使用和性行为发生情况等。

    1.2.2   序列扩增和测定

    使用巢式PCR扩增CT的ompA基因，参考文献[4]后优化了扩增引物。第1轮PCR使用Ex Taq（Takara，大连，中国），其中核酸体积10 μL，PCR反应体系25 μL，引物为36F（5′-CGCTTTGAGTTCTGCTTCCTCCTT-3′）和1185R（5′-GCGGAATTGTGCATTTACGTGAGC-3′），扩增产物1150 bp。第2轮PCR使用2×Taq PCR MasterMix（Tiangen，北京，中国），其中第1轮扩增产物5 μl，PCR反应体系50 μL，引物为87F（5′-TGAACCAAGCCTTATGATCGACGG-3′）和1091R（5′-ACTGCAATACCGCAAGATTTTCTAGATTTC-3′），扩增产物1 005 bp。两轮PCR反应条件均为：94 ℃预变性3 min；94 ℃变性45 s，58 ℃退火45 s，72 ℃延伸70 s，40个循环；72 ℃延伸10 min。经琼脂糖凝胶电泳鉴定为扩增成功的样品送北京诺赛基因组研究中心有限公司进行测序，使用第2轮扩增引物进行双向测序。

    1.2.3   测序结果分析

    测序结果用Sequencher5.1软件进行序列拼接，拼接结果使用BioEdit7.0软件进行比对。通过使用美国国立生物技术信息中心（www.ncbi.nlm.nih.gov）的BLAST比对确定CT的基因型。

    1.3   统计学处理

    采用SPSS 19.0进行统计学分析，定量资料采用（$\bar x \pm s $）来描述，计数资料采用率或构成比（%）来描述。对影响CT基因型的因素进行χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

    2.   结果

    2.1   样本的人口学特征

    在收集到的CT核酸检测为阳性的374个样本中，173个样本扩增测序成功，见表1，获得序列的173个样本和总的374个阳性样本在年龄分组、样本来源、场所类别等特征上没有统计学差异。

    表  1  获得分型和收集到的研究对象的构成[n（%）]
    Table  1.  Obtained typing and composition of the collected study subjects [n（%）]
    人口学特征总样本（n = 374）获得分型样本（n = 173）χ2P
    调查地区 4.784 0.310
    　滇东北 41（11.0） 15（8.7）
    　滇东南 56（15.0） 24（13.9）
    　滇中 34（9.1） 16（9.2）
    　滇西北 159（42.5） 83（48.0）
    　滇西南 84（22.5） 35（20.2）
    年龄（岁） 2.843 0.092
    　≤25 203（54.3） 102（59.0）
    　>25 171（45.7） 71（41.0）
    民族 0.151 0.697
    　汉族 210（56.1） 99（57.2）
    　其他 164（43.9） 74（42.8）
    样本来源 0.383 0.536
    　娱乐场所 173（46.2） 83（48.0）
    　非娱乐场所 201（63.8） 90（52.0）
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    在173个样本中，感染者的平均年龄为（26.8±9.7）岁；云南省户籍占87.9%；汉族占57.2%；未婚占57.2%；初中学历占53.2%；研究对象主要来自滇西北（48.0%）和滇南地区（34.1%），见表2。

    表  2  不同亚型感染者的人口学特征[n（%）]
    Table  2.  Demographic characteristics of patients with different subtypes of infection [n（%）]
    人口学特征合计CT基因型（n，%）χ2P
    E（n = 43）F（n = 37）J（n = 33）D（n = 31）其他（n = 29）
    调查地区a 19.181 0.259
    　滇东北 15 3 （20.0） 2 （13.3） 3 （20.0） 2 （13.3） 5 （33.3）
    　滇东南 24 5 （20.8） 10 （41.7） 4 （16.7） 3 （12.5） 2 （8.3）
    　滇中 16 5 （31.3） 3 （18.8） 2 （12.5） 5 （31.3） 1 （6.3）
    　滇西北 83 21 （25.3） 14 （16.9） 20 （24.1） 11 （13.3） 17 （20.5）
    　滇西南 35 9 （25.7） 8 （22.9） 4 （11.4） 10 （28.6） 4 （11.4）
    户籍 2.684 0.620
    　本省 152 38 （25.0） 35 （23.0） 28 （18.4） 26 （17.1） 25 （16.4）
    　其他 21 5 （23.8） 2 （9.5） 5 （23.8） 5 （23.8） 4 （19.0）
    是否为边境州（市）b 3.160 0.536
    　是 117 30 （25.6） 28 （23.9） 20 （17.1） 22 （18.8） 17 （14.5）
    　否 56 13 （23.2） 9 （16.1） 13 （23.2） 9 （16.1） 12 （21.4）
    年龄/岁 4.318 0.365
    　≤25 102 22 （21.6） 26 （25.5） 17 （16.7） 18 （17.6） 19 （18.6）
    　>25 71 21 （29.8） 11 （15.5） 16 （22.5） 13 （18.3） 10 （14.0）
    民族 4.533 0.343
    　汉族 99 23（23.2） 20（20.2） 17（17.2） 23（23.2） 16（16.2）
    　其他 74 20（27） 17（23） 16（21.6） 8（10.8） 13（17.6）
    文化程度 11.620 0.162
    　小学及以下 29 10 （34.5） 3 （10.3） 6 （20.7） 5 （17.2） 5 （17.2）
    　初中 92 20 （21.7） 23 （25.0） 14 （15.2） 22 （23.9） 13 （14.1）
    　高中及以上 52 13 （25.0） 11 （21.2） 13 （25.0） 4 （7.7） 11 （21.2）
    婚姻状况 12.527 0.109
    　未婚 99 21 （21.2） 24 （24.2） 17 （17.2） 17 （17.2） 20 （20.2）
    　同居或已婚 60 16 （26.7） 12 （20.0） 16 （26.7） 10 （16.7） 6 （10.0）
    　离异或丧偶 14 6 （42.9） 1 （7.1） 0 （0.0） 4 （28.6） 3 （21.4）
    样本来源c 2.250 0.690
    　娱乐场所 83 18 （21.7） 20 （24.1） 16 （19.3） 13 （15.7） 16 （19.3）
    　非娱乐场所 90 25 （27.8） 17 （18.9） 17 （18.9） 18 （20.0） 13 （14.4）
    　　a：滇东北：昭通市、曲靖市；滇东南：红河州、文山州；滇中：昆明市、玉溪市、楚雄州；滇西北：大理州、丽江市、迪庆州、怒江州、保山市、德宏州；滇西南：临沧市、普洱市、西双版纳州。b：边境州（市）：文山州、红河州、西双版纳州、普洱市、临沧市、德宏州、保山市、怒江州；非边境州（市）：昭通市、曲靖市、昆明市、玉溪市、楚雄州、大理州、迪庆州、丽江市。c：娱乐场所：卡拉ok厅/歌舞厅/酒吧、夜总会；非娱乐场所：宾馆/酒店、路边店/小饭店、街头、桑拿/洗浴中心、洗脚屋/发廊、其他。
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    2.2   CT基因型分布特征

    在173份样本中共检测到7种基因型，其中以E型、F型、J型和D型为主要基因型，分别占24.9%、21.4%、19.1%、17.9%，其他亚型包括G型（9.6%）、K型（4.6%）和H型（2.9%）。CT基因型在主要人口学特征上差异无统计学意义（P > 0.05）。

    3.   讨论

    本研究依托艾滋病哨点监测平台在云南省开展暗娼人群生殖道沙眼衣原体基因型调查，涵盖了不同类型和档次的暗娼人群。暗娼是艾滋病和性病防治的重点人群，且该人群总体受教育程度不高，同时呈现出年轻化的特征，在本次调查中研究对象教育程度以初中及以下、25岁以下和未婚为主，这与以往的调查结果相一致[5-6]。相关的调查也显示，暗娼人群年龄≤25 岁、未接受过健康咨询服务是CT感染的危险因素[7]，因此需要进一步依托艾滋病的防治加强暗娼人群的性病预防干预和宣传教育。

    CT主要分为15种血清型，其不同型别与不同疾病相关，A至C型与沙眼有关，D至K型与泌尿生殖系统感染有关，L1至L3型与系统性性病淋巴肉芽肿（lymphogranuloma venereum，LGV）有关。CT的基因型分布具有一定的地区差异，如印度以D（48.4%）、E（32.8%）、F（7.8%）和I（9.4%）为主[8]；奥地利地区以E（50.1%）、F（16.2%）、D/Da（9.7%）和G/Ga（9.0%）为主[9]；日本以F（32%）、E（17%）为主[10]。我国的一项调查显示前四位的基因型为F（25.6%），E（17.1%），J（16.3%）和D（15.5%），但不同省份间也存在差异[11]。此外，CT的基因型也存在一定的人群分布特征。在我国广西和天津的一项调查中表明，性病门诊的女性患者其主要流行基因型为E（29.9%），J（19.7%）和 D（15.3%） [12]。一项在深圳、南京和武汉开展的研究显示，MSM中CT以D和G型为主，但D型和G型分别是南京和武汉首要的基因型[4]。本次调查发现云南省暗娼人群的CT以E（24.9%）、F（21.4%）、J（19.1%）和D型（17.9%）为主要基因型，显示了差异化的流行特征，为进一步了解本地CT的流行趋势需要开展进一步的分子流行学研究。

    本调查使用OmpA基因进行分型，这是CT分型的传统方法，但使用单一的基因存在一定的局限性，不能对传播的关联性进行分析。近年来多位点可变数目串联重复分析（Multiple Locus Variable-number tandem repeat Analysis，MLVA）和多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing，MLST）常被用于CT的基因分析，相比OmpA分型方法，这些方法的区分能力更强[13]，可更加精细地用于CT传播的溯源。今后，可以尝试使用这些方法，加强对CT传播风险的分析，有针对性地实施干预。

    本研究首次在云南省暗娼人群中开展了CT分子流行病学调查，提供了该人群中CT亚型的基本特征，由于该人群具有隐蔽性，同时在性传播疾病中起着关键性作用，本研究的结果可为进一步控制CT的传播提供指导，也可为将来治疗和疫苗研究提供基础信息。

  • 表  1  获得分型和收集到的研究对象的构成[n（%）]

    Table  1.   Obtained typing and composition of the collected study subjects [n（%）]

    人口学特征总样本（n = 374）获得分型样本（n = 173）χ2P
    调查地区 4.784 0.310
    　滇东北 41（11.0） 15（8.7）
    　滇东南 56（15.0） 24（13.9）
    　滇中 34（9.1） 16（9.2）
    　滇西北 159（42.5） 83（48.0）
    　滇西南 84（22.5） 35（20.2）
    年龄（岁） 2.843 0.092
    　≤25 203（54.3） 102（59.0）
    　>25 171（45.7） 71（41.0）
    民族 0.151 0.697
    　汉族 210（56.1） 99（57.2）
    　其他 164（43.9） 74（42.8）
    样本来源 0.383 0.536
    　娱乐场所 173（46.2） 83（48.0）
    　非娱乐场所 201（63.8） 90（52.0）
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    表  2  不同亚型感染者的人口学特征[n（%）]

    Table  2.   Demographic characteristics of patients with different subtypes of infection [n（%）]

    人口学特征合计CT基因型（n，%）χ2P
    E（n = 43）F（n = 37）J（n = 33）D（n = 31）其他（n = 29）
    调查地区a 19.181 0.259
    　滇东北 15 3 （20.0） 2 （13.3） 3 （20.0） 2 （13.3） 5 （33.3）
    　滇东南 24 5 （20.8） 10 （41.7） 4 （16.7） 3 （12.5） 2 （8.3）
    　滇中 16 5 （31.3） 3 （18.8） 2 （12.5） 5 （31.3） 1 （6.3）
    　滇西北 83 21 （25.3） 14 （16.9） 20 （24.1） 11 （13.3） 17 （20.5）
    　滇西南 35 9 （25.7） 8 （22.9） 4 （11.4） 10 （28.6） 4 （11.4）
    户籍 2.684 0.620
    　本省 152 38 （25.0） 35 （23.0） 28 （18.4） 26 （17.1） 25 （16.4）
    　其他 21 5 （23.8） 2 （9.5） 5 （23.8） 5 （23.8） 4 （19.0）
    是否为边境州（市）b 3.160 0.536
    　是 117 30 （25.6） 28 （23.9） 20 （17.1） 22 （18.8） 17 （14.5）
    　否 56 13 （23.2） 9 （16.1） 13 （23.2） 9 （16.1） 12 （21.4）
    年龄/岁 4.318 0.365
    　≤25 102 22 （21.6） 26 （25.5） 17 （16.7） 18 （17.6） 19 （18.6）
    　>25 71 21 （29.8） 11 （15.5） 16 （22.5） 13 （18.3） 10 （14.0）
    民族 4.533 0.343
    　汉族 99 23（23.2） 20（20.2） 17（17.2） 23（23.2） 16（16.2）
    　其他 74 20（27） 17（23） 16（21.6） 8（10.8） 13（17.6）
    文化程度 11.620 0.162
    　小学及以下 29 10 （34.5） 3 （10.3） 6 （20.7） 5 （17.2） 5 （17.2）
    　初中 92 20 （21.7） 23 （25.0） 14 （15.2） 22 （23.9） 13 （14.1）
    　高中及以上 52 13 （25.0） 11 （21.2） 13 （25.0） 4 （7.7） 11 （21.2）
    婚姻状况 12.527 0.109
    　未婚 99 21 （21.2） 24 （24.2） 17 （17.2） 17 （17.2） 20 （20.2）
    　同居或已婚 60 16 （26.7） 12 （20.0） 16 （26.7） 10 （16.7） 6 （10.0）
    　离异或丧偶 14 6 （42.9） 1 （7.1） 0 （0.0） 4 （28.6） 3 （21.4）
    样本来源c 2.250 0.690
    　娱乐场所 83 18 （21.7） 20 （24.1） 16 （19.3） 13 （15.7） 16 （19.3）
    　非娱乐场所 90 25 （27.8） 17 （18.9） 17 （18.9） 18 （20.0） 13 （14.4）
    　　a：滇东北：昭通市、曲靖市；滇东南：红河州、文山州；滇中：昆明市、玉溪市、楚雄州；滇西北：大理州、丽江市、迪庆州、怒江州、保山市、德宏州；滇西南：临沧市、普洱市、西双版纳州。b：边境州（市）：文山州、红河州、西双版纳州、普洱市、临沧市、德宏州、保山市、怒江州；非边境州（市）：昭通市、曲靖市、昆明市、玉溪市、楚雄州、大理州、迪庆州、丽江市。c：娱乐场所：卡拉ok厅/歌舞厅/酒吧、夜总会；非娱乐场所：宾馆/酒店、路边店/小饭店、街头、桑拿/洗浴中心、洗脚屋/发廊、其他。
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-12-12
  • 网络出版日期:  2023-02-01
  • 刊出日期:  2023-02-25

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摘要
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  • 1.   资料与方法

  • 1.1   研究对象

  • 1.2   方法

  • 1.3   统计学处理

  • 2.   结果

  • 2.1   样本的人口学特征

  • 2.2   CT基因型分布特征

  • 3.   讨论

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