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2种诊断标准用于云南省18岁学生血压偏高的比较

杨云娟 查远翊 李图南

师雨晗, 李菁, 刘舒媛, 赵婷, 杨净思, 史荔, 梁疆莉. 壮族人群ERAP基因多态性与脊灰疫苗序贯免疫诱导的抗体应答的相关性分析[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(7): 22-28. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230711
引用本文: 杨云娟, 查远翊, 李图南. 2种诊断标准用于云南省18岁学生血压偏高的比较[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(3): 44-48. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230324
Yuhan SHI, Jing LI, Shuyuan LIU, Ting ZHAO, Jingsi YANG, Li SHI, Jiangli LIANG. Correlation of ERAP Gene Polymorphism with Antibody Response Induced by Sequential Immunization of Polio Vaccine[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(7): 22-28. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230711
Citation: Yunjuan YANG, Yuanyi ZHA, Tunan LI. Comparison of Two Diagnosis Standards for Evaluating Hypertension in 18 Years Old Students in Yunnan China[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(3): 44-48. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230324

2种诊断标准用于云南省18岁学生血压偏高的比较

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230324
基金项目: 云南省医学学科带头人项目(D-2018007);昆明市中青年学术和技术带头人项目(KMRCD-2018011);昆明市西山区科技局项目(西科字34号)
详细信息
    作者简介:

    杨云娟(1979~),女,云南昆明人,医学硕士,在读博士研究生,副主任医师,主要从事儿童青少年伤害、慢性病预防与控制及学校卫生工作

    查远翊与杨云娟对本文具有同等贡献

  • 中图分类号: R544.1

Comparison of Two Diagnosis Standards for Evaluating Hypertension in 18 Years Old Students in Yunnan China

  • 摘要:   目的  以《中国高血压防治指南》(2022年修订版)为金标准,以《中国高血压临床实践指南》(2022年11月版)为检验标准,比较分析2种诊断标准判定云南省18岁学生血压偏高的流行趋势、分布特征,探究《新指南》用于判定云南省18岁学生高血压的科学性及合理性,为今后制定学生血压异常判定标准提高科学依据。  方法  利用云南省2021年16个州(市)、32个县(区)、61所学校开展的18岁中学生血压异常流行病学调查数据进行Kappa比较分析。共调查3 175人。  结果  《新指南》诊断评估值为≥130 mmHg/80 mmHg,低于金标准(≥140 mmHg/90 mmHg)。金标准判定云南省18岁中学生血压偏高的检出率为2.93%。《新指南》诊断标准判定检出率为16.13%。同一人群的血压偏高检出水平《新指南》明显高于金标准(χ2 = 498.31,P < 0.01)。《新指南》诊断的Kappa值0.27(P < 0.01),提示一致性较弱。真实性评价为:灵敏度100%、特异度86.40%、误诊率13.60%、约登指数为0.86、阳性似然比7.35。可靠性评价为:符合率86.80%。  结论  《新指南》诊断标准下调,考虑到了高血压防治的关口前移。但是目前将诊断标准下调的证据尚不充分,建议谨慎对待该问题。
  • 目前预防感染性疾病的最有效方法为疫苗接种。然而,没有任何一个疫苗能够对机体产生100%的保护。疫苗的保护性抗体反应是遗传因素如年龄、性别等与其他因素共同作用的结果。Tan PL等[1]开展的双生子疫苗反应性研究表明:接种麻疹、腮腺炎、风疹联合疫苗后,抗体反应的遗传力分别为88.5%,45.7%和38.8%。Newport M J等[2]研究也发现:接种乙肝、脊髓灰质炎、破伤风、白喉疫苗后,诱导机体产生抗体的遗传力分别为77%,60%,44%和49%。在疫苗免疫反应的相关遗传因素中,抗原加工和呈递的中枢-人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)基因呈递系统占据了重要位置。外来抗原进入细胞后,在胞质中被编码蛋白酶组件的低分子多肽(low molecular mass protein,LMP)降解,变成5~25个氨基酸肽前体,然后被抗原加工相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)结合并运送到内质网,被内质网氨肽酶(endoplasmic reticulum aminopeptidases,ERAP)进一步将其切割成片段大小适合的抗原肽,经由HLA I类分子结合后形成HLA抗原符合体,表达于抗原呈递细胞表面,诱导免疫应答[3- 4]

    ERAP是氨基肽酶M1家族一员,其基因位于5q15区域,包括ERAP1和ERAP2基因。ERAP1基因长47379 bp,包括20个外显子;ERAP2基因长41438 bp,由19个外显子组成。ERAP是一个高度多态的基因系统,存在大量单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。目前的研究证实[5]ERAP的SNPs与自身免疫性疾病、感染性疾病等具有相关性。由于ERAP在抗原呈递中的作用,研究推测,这些SNP可能改变抗原肽段的呈递,从而影响免疫应答,导致不同的疾病结局[6-8]

    全球开展的脊髓灰质炎(以下简称“脊灰”)疫苗的接种,让脊灰可成为第二个通过疫苗接种消灭的传染病。笔者前期开展的脊灰序贯免疫接种临床研究表明[9-10],在接种2剂脊灰灭活疫苗(inactivated polio vaccine,IPV)和1剂二价脊灰减毒活疫苗(bivalent oral polio vaccine,bOPV)后,各型抗体滴度和II型脊灰抗体阳转率均显示差异。基于以上研究,本研究共选取与ERAP功能密切相关的6个ERAP1和2个ERAP2的SNPs进行基因分型,分析ERAP多态性与脊灰疫苗诱导的抗体应答的相关性,尝试探讨宿主遗传因素在脊灰疫苗诱导的免疫应答中的作用。

    选取广西壮族自治区参加中国医学科学院医学生物学研究所 “随机、盲法、单中心、平行对照试验评价I型+III型口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)和I型+III型脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(人二倍体细胞)与IPV联合序贯免疫接种在2月龄婴儿中的免疫原性和安全性临床试验”研究项目的243名壮族2~3月龄儿童为研究对象,取得监护人知情同意并通过广西伦理审查委员会伦理审核(伦理批件号:GXIRB2015-0024)。

    入组个体均在2月龄和3月龄各接种1剂IPV,4月龄接种1剂bOPV,完成基础免疫接种程序。分别在免疫前和基础免疫后28 d采集受试者血液2.5 mL,对血清和血浆进行分离,血清保存于-20 ℃冰箱中,血浆保存在-80 ℃冰箱中。采用微量中和试验对脊灰I、II、III型中和抗体进行检测,依据WHO规定定义血清抗体阳转[11-12]

    使用Qiagen血基因组DNA试剂盒,提取外周血DNA,使用超微量紫外可见分光光度计进行DNA浓度和纯度检测,样品保存于-80 ℃冰箱中保存。

    采用TaqMan探针法基因分型法对ERAP1基因rs27037 (G > T)、rs27044 (C > G)、rs30187 (C > T)、rs26618 (T > C)、rs26653 (C > G)、rs3734016 (C > T)和ERAP2基因rs2549782 (T > G)、rs2248374 (G > A)进行分型,见表1。PCR反应体积为5 μL,包括Mix 2.5 μL、双蒸水1.25 μL、引物0.25 μL、DNA样本1 μL,反应条件为95 ℃温度下预变性10 min,92 ℃温度下变性15 s,60 ℃温度下退火延伸1 min,共40个循环,40 ℃长延伸5 min。使用TaqMan Genotyper Software软件对结果进行分析。随机选取每个位点的不同基因型样本进行测序验证。

    表  1  SNPs的位点信息
    Table  1.  SNPs information
    基因SNP位点位置突变类型
    ERAP1 rs27037(G/T) chr5:96758990 intron
    rs27044(C/G) chr5:96783148 Gln730Glu(Q>E)
    rs30187(C/T) chr5:96788627 Lys528Arg(K>R)
    rs26618(T/C) chr5:96795133 Ile276Met(I>M)
    rs26653(C/G) chr5:96803547 Arg127Pro(R>P)
    rs3734016(C/T) chr5:96803761 Glu56Lys(E>K)
    ERAP2 rs2549782(T/G) chr5:96895296 Lys392Asn(K>N)
    rs2248374(G/A) chr5:96900192 splice region variant
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    哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HW)使用PLINK软件进行样本检验。脊髓灰质炎疫苗诱导的抗体阳转组与非阳转组的等位基因、基因型的频率差异使用χ2检验进行分析,多重比较采用Bonferroni校正。脊灰中和抗体效价经log2转换后采用GraphPad Prism 7软件中的T检验分析性别及等位基因间脊灰GMT水平差异,用方差分析(One-way ANOVA)3组数据基因型之间脊灰GMT水平差异,多重比较采用Tukey校正。P < 0.05为差异有统计学意义。

    受试者共243例,男月龄(2.388±0.269)月,女月龄(2.352±0.252)月,其中男性128例,女性115例。I、II、III型脊灰中和抗体GMT水平在男女之间差异无统计学意义(P > 0.05),见表2

    表  2  研究对象基本特征($\bar x \pm s $
    Table  2.  Basic characteristics of the subjects ($\bar x \pm s $
    型别性别(nGMTtP
    I型 男(128) 11.628 ± 2.043 1.350 0.178
    女(115) 11.964 ± 1.814
    II型 男(128) 6.110 ± 1.806 0.945 0.345
    女(115) 6.335 ± 1.910
    III型 男(128) 11.409 ± 1.699 1.292 0.198
    女(115) 11.675 ± 1.492
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    Hardy-Weinberg检验结果表明所选的8个SNP位点在人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡(P > 0.05),表明样本具有代表性。

    ERAP1中6个SNPs位点的等位基因型均未显示与脊髓灰质炎病毒I、II、III型抗体水平具有相关性(P > 0.05)。由于ERAP2中的2个SNPs 位点高度连锁,其等位基因与脊髓灰质炎疫苗诱导的抗体水平的相关性一致。在I型脊灰抗体应答中,携带ERAP2 rs2549782-G等位基因型个体的GMT低于携带T等位基因型个体(11.590 ± 1.979 vs 11.950 ± 1.895,Padj = 0.031)。同样,携带ERAP2 rs2248374-A等位基因个体GMT低于携带rs2248374-G等位基因个体(11.590 ± 1.979 vs 11.950 ± 1.895,Padj = 0.031)。但在II、III型脊髓灰质炎疫苗抗体应答中,所有SNP等位基因型均未显示差异(P > 0.05),见表3

    表  3  ERAP基因的SNPs位点等位基因与脊灰中和抗体(GMT)水平的相关性($\bar x \pm s $
    Table  3.  Correlation between ERAP SNPs alleles and GMT of neutralizing antibody against poliovirus ($\bar x \pm s $
    基因SNP位点脊灰抗体型等位基因nGMTP
    ERAP1 rs27037 I G 295 11.860 ± 1.873 0.351
    T 191 11.670 ± 2.038
    II G 295 6.205 ± 1.765 0.961
    T 191 6.233 ± 1.986
    III G 295 11.600 ± 1.463 0.838
    T 191 11.430 ± 1.801
    rs27044 I C 252 11.870 ± 1.913 0.282
    G 234 11.700 ± 1.968
    II C 252 6.272 ± 1.733 0.416
    G 234 6.156 ± 1.937
    III C 252 11.620 ± 1.450 0.760
    G 234 11.450 ± 1.755
    rs30187 I C 249 11.860 ± 1.915 0.338
    T 237 11.710 ±1.966
    II C 249 6.297 ± 1.784 0.245
    T 237 6.131 ± 1.923
    III C 249 11.610 ± 1.467 0.815
    T 237 11.460 ± 1.738
    rs26618 I C 157 11.740 ± 1.902 0.579
    T 329 11.810 ± 1.960
    II C 157 6.277 ± 1.804 0.497
    T 329 6.187 ± 1.878
    III C 157 11.650 ± 1.410 0.657
    T 329 11.480 ± 1.690
    rs26653 I C 247 11.760 ± 1.947 0.657
    G 239 11.820 ± 1.936
    II C 247 6.114 ± 1.899 0.155
    G 239 6.322 ± 1.802
    III C 247 11.470 ± 1.725 0.910
    G 239 11.800 ± 1.472
    rs3734016 I C 428 11.730 ± 1.954 0.077
    T 58 12.190 ± 1.792
    II C 428 6.170 ± 1.858 0.129
    T 58 6.558 ± 1.790
    III C 428 11.510 ± 1.634 0.582
    T 58 11.720 ± 1.374
    ERAP2 rs2549782 I G 221 11.590 ± 1.979 0.031*
    T 265 11.950 ± 1.895
    II G 221 6.187 ± 1.836 0.992
    T 265 6.241 ± 1.870
    III G 221 11.560 ± 1.578 0.943
    T 265 11.510 ± 1.630
    rs2248374 I A 221 11.590 ± 1.979 0.031*
    G 265 11.950 ± 1.895
    II A 221 6.187 ± 1.836 0.992
    G 265 6.241 ± 1.870
    III A 221 11.560 ± 1.578 0.943
    G 265 11.510 ± 1.630
      *P < 0.05。
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    进一步的基因型比对分析表明,在II、III型脊灰抗体应答中,所有SNPs等位基因型均未显示差异(P > 0.05)。ERAP2中2个SNP基因型携带者间I型脊灰病毒中和抗体GMT水平差异有统计学意义(P = 0.043)。rs2549782基因型GT诱导的中和抗体低于TT (11.590±1.942 vs 12.280±1.802,Padj = 0.043),rs2248374基因型AG诱导的中和抗体低于GG (11.590±1.942 vs 12.280±1.802,Padj = 0.043),见表4

    表  4  ERAP基因SNPs的基因型与脊灰I型中和抗体GMT水平的相关性($\bar x \pm s $
    Table  4.  Correlation between ERAP SNPs genotypes and GMT of neutralizing antibody against polio type1 ($\bar x \pm s $
    ERAPSNP位点抗体型别基因型nGMTP
    ERAP1 rs27037 I型 GG 86 12.099 ± 1.792 0.109
    GT 123 11.535 ± 1.948
    TT 34 11.910 ± 2.202
    rs27044 I型 CC 58 12.010 ± 2.001 0.563
    CG 136 11.750 ± 1.841
    GG 49 11.630 ± 2.150
    rs30187 I型 CC 56 11.990 ± 2.033 0.626
    CT 137 11.750 ± 1.822
    TT 50 11.650 ± 2.167
    rs26618 I型 CC 20 11.930 ± 1.591 0.672
    CT 117 11.670 ± 2.005
    TT 106 11.890 ± 1.939
    rs26653 I型 CC 57 11.780 ± 2.083 0.830
    CG 133 11.730 ± 1.839
    GG 53 11.930 ± 2.064
    rs3734016 I型 CC 189 11.690 ± 1.968 0.235
    CT 50 12.080 ± 1.854
    TT 4 12.900 ± 1.286
    ERAP2 rs2549782 I型 GG 48 11.600 ± 2.046 0.043*
    GT 125 11.590 ± 1.942
    TT 70 12.280 ± 1.802
    rs2248374 I型 AA 48 11.600 ± 2.046 0.043*
    AG 125 11.590 ± 1.942
    GG 70 12.280 ± 1.802
      *P < 0.05。
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    脊灰疫苗基础免疫1月后,I、III型抗体完全阳转,而II型阳转率为79.8%。因此,根据抗体阳转情况,将样本分为II型抗体阳转组和非阳转组,比较2组间SNP等位基因及基因型频率。结果表明,ERAP基因SNPs不同等位基因型以及基因型携带者的脊灰阳转率在2组间差异无统计学意义(P > 0.05),数据未显示。

    解析疫苗免疫应答水平在人群中的异质性与遗传变异的关系一直是疫苗学研究的热点。本研究以ERAP基因的8个SNP位点为研究对象,探究ERAP基因多态性与脊灰疫苗序贯免疫诱导的抗体应答的相关性。

    HLA I类抗原呈递基因系统对抗原的加工过程中,ERAP1ERAP2相互协同完成对抗原肽的剪切[5]ERAP1ERAP2一方面可以将与HLA I类结合的前体肽修饰到正确的长度,另一方面增加了HLA I类分子和抗原肽复合物的构象稳定性[13]ERAP基因多态性可影响ERAP对抗原肽的切割,导致抗原肽不能有效的被切割成最终正常大小,从而影响后续的与HLA I类分子结合过程以及抗原提呈给CD8+T细胞的过程,从而影响免疫应答[14-16]

    本研究结果显示,ERAP2基因的2个SNP rs2549782和rs2248374在等位基因型和基因型水平上,均显示与脊灰序贯免疫诱导的脊灰I型抗体的GMT水平相关,且具有一致性。rs2549782位于ERAP催化中心附近,等位基因G的突变可引起非保守的氨基酸取代(赖氨酸变成天冬酰胺),这可能改变ERAP2的酶活性和对底物的特异性,从而引起抗原肽呈递的改变[8]。在本研究的壮族中,rs2248374和rs2549782完全连锁,rs2248374虽然位于内含子区域,但等位基因G的突变可引起无义介导的mRNA降解,影响蛋白表达[17]。因此,ERAP2的2个SNP位点可能同时影响到了蛋白表达和酶的活性。研究发现,rs2248374和rs2549782位点变异与自身免疫性疾病和感染性疾病具有相关性。如在意大利人群研究中,rs2549782-TT基因型在HIV-1人群中高于非感染人群;在西班牙毒品吸入HIV阳性人群中,rs2549782-TT显示高风险[18-19]。笔者前期研究发现携带rs2248374-A等位基因型个体的慢性HCV患病风险高于rs2248374-G携带者[20]。然而,ERAP与疾病关联分析结果在不同人群中并不一致。在荷兰和波兰人群开展的一项研究显示,寻常型银屑病与rs2248374多态性有关[21],但在西班牙人和非裔美国人和智利人群的研究中并没有发现rs2248374多态性和葡萄膜炎、炎症性肠病有关[21-23]。虽然在脊灰疫苗诱导的抗体应答中,未发现不同民族群体间的差异[24-25]。本临床研究中,也未显示壮族和汉族间的差异,但仍需要进一步开展不同群体ERAP基因与抗体应答的研究。此外,由于ERAP变异与疫苗免疫应答方面的研究有限,还需要进一步开展不同疫苗诱导的免疫应答与ERAP多样性的研究。

    尽管ERAP位于HLA I类基因抗原呈递通路上,但多项研究表明,HLA I类基因也同样影响抗体阳转及中和抗体水平。在麻腮风联合疫苗诱导的抗体应答中发现,HLA-A*01、HLA-B*07等基因与麻疹抗体非阳转相关,HLA-B*27:05与腮腺炎抗体水平相关[26-27]。在对乙肝疫苗的抗体应答中也发现,HLA-A*11:01、HLA-B*35、HLA-B*46等基因与乙肝疫苗诱导的抗体水平相关[28]。除经典HLA I类基因外,HLA I类抗原呈递基因系统的其他基因多态性也影响着疫苗诱导的抗体应答。对麻疹疫苗无应答和高应答的比对分析发现,将抗原运送至内质网的TAP2基因型可影响麻疹抗体的高应答与无应答[29];Yucesoy等[30]的研究也发现,TAP2基因的rs690550影响着麻疹疫苗诱导的抗体水平。推测因TAP在HLA I类抗原呈递中将LMP加工的短肽片段从胞质内转运至内质网,其多态可能引起TAP的转运的改变,导致后续抗原呈递的不同结局[31]。本研究发现ERAP2与脊髓灰质炎序贯免疫诱导的脊髓灰质炎疫苗诱导的抗体水平相关,但由于本研究仅是相关性研究,具体ERAP2如何影响抗体水平的机制需在未来的研究中通过功能实验进一步研究。

    综上,本研究初步探讨了抗原提呈通路基因ERAP1ERAP2与脊灰疫苗诱导脊灰抗体应答的相关性,结果表明ERAP2基因多态性与脊灰I型抗体GMT相关,可能影响脊灰疫苗诱导的抗体水平。然而,笔者目前对于疫苗诱导的免疫应答机制了解非常有限,本研究仅仅是对抗体反应的一个初步分析,仍需要进一步开展不同疫苗的研究,同时开展功能实验探寻抗原呈递基因在疫苗应答中的作用。

  • 表  1  2021年云南省18岁中学生不同判定标准的血压偏高统计表

    Table  1.   The prevalence of hypertension with different judgement standardds of different groups among 18 aged school students in Yunnan in 2021

    变量n≥140/90 mmHg≥130/80 mmHg率差值(%)χ2P
    血压偏高人数%血压偏高人数%
    性别
     男 1464 73 4.99 317 21.65 16.66 277.998 < 0.001*
     女 1711 20 1.17 195 11.40 10.23 157.326 < 0.001*
    民族
     汉族 1512 61 4.03 294 19.44 15.41 263.338 < 0.001*
     少数民族 1663 32 1.92 218 13.11 11.19 216.272 < 0.001*
    城乡
     城区 2226 82 3.68 394 17.70 14.02 395.862 < 0.001*
     郊/县区 949 11 1.16 118 12.43 11.27 78.375 < 0.001*
    经济状况
     好 109 1 0.92 11 10.09 9.17 8.99 < 0.001*
     中 902 20 2.22 131 14.52 12.30 120.38 < 0.001*
     差 2164 72 3.33 370 17.10 13.77 361.12 < 0.001*
    地区
     昆明市 109 1 0.92 11 10.09 9.17 8.992 < 0.001*
     昭通市 286 11 3.85 53 18.53 14.68 50.293 < 0.001*
     曲靖市 161 13 8.07 40 24.84 16.77 42.779 < 0.001*
     楚雄州 176 2 1.14 26 14.77 13.63 11.671 < 0.001*
     玉溪市 170 4 2.35 24 14.12 11.77 24.920 < 0.001*
     红河州 154 0 0 12 7.79 7.79 7.789 < 0.001*
     文山州 177 2 1.13 8 4.52 2.29 42.733 < 0.001*
     普洱市 121 4 3.31 22 18.18 14.87 18.615 < 0.001*
     西双版纳州 157 2 1.27 23 14.65 13.38 11.803 < 0.001*
     大理州 241 1 0.41 29 12.03 11.62 7.341 < 0.001*
     保山市 211 22 10.43 87 41.23 30.80 35.006 < 0.001*
     德宏州 233 10 4.29 45 19.31 15.02 43.651 < 0.001*
     丽江市 217 4 1.84 22 10.14 8.30 36.120 < 0.001*
     怒江州 182 3 1.65 20 10.99 9.34 24.707 < 0.001*
     迪庆州 329 5 1.52 35 10.64 9.12 42.648 < 0.001*
     临沧市 251 9 3.59 55 21.91 18.32 33.266 < 0.001*
    合计 3175 93 2.93 512 16.13 13.20 498.305 < 0.001*
      *P < 0.05。
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    表  2  《新指南》筛检云南省18岁儿童血压偏高效果的评价结果统计表(n)

    Table  2.   Evaluation of the New Guidelines on screening hypertension among 18-year-old children in Yunnan Province (n)

    筛检试验标准(≥130/80 mmHg)金标准(≥140/90 mmHg)χ2P
    血压偏高者正常者合计
    阳性93419 512 498.305 < 0.001*
    阴性0 26632663
    合计9330823175
      *P < 0.05。
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-11-28
  • 网络出版日期:  2023-03-02
  • 刊出日期:  2023-03-25

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