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不同FET方案对子宫内膜结核患者内膜厚度、内膜血流及妊娠结局的影响

宋家美,  孟昱时,  陈静思,  陈琳,  范文,  闫瑾,  刘洋

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文章导航 > 昆明医科大学学报  > 2023 >  44(9): 93-99
张盛庆宇, 舒逍, 吴锡南, 李志强, 武慧欣, 张媛, 蒋玉融, 杨思佳, 木云珍. 1 800 MHz射频电磁场暴露对大鼠海马GFAP、NCAM和GABA受体表达的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2021, 42(9): 13-19. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210939
引用本文: 宋家美, 孟昱时, 陈静思, 陈琳, 范文, 闫瑾, 刘洋. 不同FET方案对子宫内膜结核患者内膜厚度、内膜血流及妊娠结局的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(9): 93-99. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230911
shu
Sheng-qingyu ZHANG, Xiao SHU, Xi-nan WU, Zhi-qiang LI, Hui-xin WU, Yuan ZHANG, Yu-rong JIANG, Shi-jia YANG, Yun-zhen MU. The Effect of 1800 MHz Radio Frequency Electromagnetic Field Exposure on the Expression of GFAP，NCAM and GABA Receptors in Hippocampus of Rats[J]. Journal of Kunming Medical University, 2021, 42(9): 13-19. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210939
Citation: Jiamei SONG, Yushi MENG, Jingsi CHEN, Lin CHEN, Wen FAN, Jin YAN, Yang LIU. Effects of Different FET Schemes on Endometrial Thickness，Endometrial Blood Flow and Pregnancy Outcome in Patients with Endometrial Tuberculosis[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(9): 93-99. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230911
shu

不同FET方案对子宫内膜结核患者内膜厚度、内膜血流及妊娠结局的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230911

  • 昆明医科大学第二附属医院生殖医学科，云南　昆明　650101

基金项目: 云南省教育厅科学研究基金资助项目（2022J0240）；昆明医科大学第二附属医院院内科研基金资助项目（XJ2021000201，ynIIT2021015，2022yk05）
详细信息
    作者简介:

    宋家美（1988～），女，云南昭通人，医学硕士，主治医师，主要从事人类辅助生殖技术临床工作

    通讯作者:

    刘洋，E-mail：13518735544@163.com

  • 中图分类号: R711.6

Effects of Different FET Schemes on Endometrial Thickness，Endometrial Blood Flow and Pregnancy Outcome in Patients with Endometrial Tuberculosis

  • Dept. of Reproductive Medicine，The 2nd Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650101，China

摘要

    摘要
  • 摘要:   目的  对比分析自然周期（natural cycle，NC）、激素替代周期（hormone replacement treatment cycle，HRT）与促性腺激素释放激素激动剂-激素替代周期（gonadotropin releasing hormone agonist-hormone replacement treatment cycle，GnRH-a-HRT）3种不同冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer，FET）方案对子宫内膜结核患者内膜转化日子宫内膜厚度、内膜血流及FET妊娠结局的影响。  方法  收集2017年01月01日至2021年01月01日在昆明医科大学第二附属医院生殖医学科行FET助孕的子宫内膜结核患者，根据患者FET内膜准备方案分为NC组、HRT组及GnRH-a-HRT组。比较3组患者子宫内膜厚度、内膜血流及胚胎移植结局。  结果  对3组患者的妊娠结局进行比较分析后发现，GnRH-a-HRT组患者胚胎种植率、临床妊娠率、继续妊娠率及活产率均高于HRT组与NC组患者，差异均具有统计学意义（P < 0.05）；HRT组患者胚胎种植率、临床妊娠率、继续妊娠率及活产率均高于NC组患者，差异均具有统计学意义（P < 0.05）。对3组患者子宫内膜厚度及内膜血流进行比较分析后发现，GnRH-a-HRT组患者子宫内膜厚度、内膜血流PSV值均高于HRT组与NC组患者，而内膜血流RI值与PI值均低于HRT组与NC组，差异具有统计学意义（P < 0.05）；HRT组患者子宫内膜厚度及内膜血流PSV值高于NC组，而内膜血流RI值与PI值均低于NC组，差异具有统计学意义（P < 0.05）。  结论  子宫内膜 结核患者采用GnRH-a-HRT进行内膜准备后，可改善提高患者内膜转化日内膜厚度及内膜血流PSV值，降低内膜血流RI及PI值，并最终改善子宫内膜结核FET妊娠结局。
    Abstract:   Objective  To compare and analyze the effects of three different frozen-thawed embryo transfer（FET） protocols natural cycle（NC）, hormone replacement cycle（HRT） and gonadotropin releasing hormone agonist-hormone replacement cycle（GnRH-a-HRT） on endometrial thickness on the day of endometrial transformation, endometrial blood flow and the pregnancy outcome of FET in patients with endometrial tuberculosis.   Methods  Patients with endometrial tuberculosis who underwent FET in the Reproductive Medicine Department of the Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University from January 1st, 2017 to January 1st, 2021 were collected. According to the FET endometrial preparation protocol, the patients were divided into NC group, HRT group and GnRH-a-HRT group respectively. After the comparation and analysis to the endometrial thickness, endometrial blood flow and embryo transfer outcomes were compared among the three groups;   Results  The embryo implantation rate, clinical pregnancy rate, continuing pregnancy rate and live birth rate in GnRH-a HRT group were higher than those in HRT group（P < 0.05）. The embryo implantation rate, clinical pregnancy rate, ongoing pregnancy rate and live birth rate in HRT group were higher than those in NC group, and the differences were statistically（P < 0.05）. The endometrial thickness and endometrial blood flow of the three groups, it was found that the endometrial thickness and PSV value of the endometrial blood flow in the GnRH-a HRT group were higher than those in the HRT group and NC group, while the RI value and PI value of the endometrial blood flow were lower than those in the HRT group and NC group（P < 0.05）. The endometrial thickness and PSV of the HRT group were higher than those of the NC group, while the RI and PI of the endometrial blood flow were lower than those of the NC group, and the differences were statistically（P < 0.05）;   Conclusion  GnRH-a-HRT can improve the endometrial thickness and PSV value of endometrial blood flow on the day of endometrial transformation, reduce the RI and PI value of endometrial blood flow, and finally improve the pregnancy outcome of FET for patients with endometrial tuberculosis.
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  • 射频电磁场（radiofrequency electromagnetic field，RF）是指频率在100 kHz～300 GHz的电磁场，主要由手机、基站等通信设备产生[1]。相关研究报道，长期的射频电磁场暴露可能对生物体的神经系统、消化系统、血液系统、生殖系统等方面均有不同程度的影响[2]。机体大脑是对射频电磁场敏感的器官之一[3]，脑组织受到射频电磁场后，会出现学习和记忆功能的改变，这是射频电磁场生物学效应的重点研究领域之一。胶原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）是星形胶质细胞中特异性的中间丝蛋白，随着生长发育过程发生变化，并在神经退行性病变过程中发生相应改变[4]。神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）是成人神经可塑性的主要贡献者，可能参与中枢神经系统损伤修复、神经发育以及与年龄相关的认知功能下降等过程[5-6]。γ-氨基丁酸（gamma-amino butyric acid，GABA）是中枢神经系统内重要的抑制性神经递质，许多研究都已经证实GABA与认知、学习记忆密切相关[7-8]。本研究通过观察SD大鼠暴露后的体重及其海马内的GFAP、NCAM和GABA受体的变化，评估射频电磁场对大鼠的生理发育指标和海马体的影响。

    1.   材料与方法

    1.1   动物分组

    14只7周龄SPF级SD大鼠，雄鼠体重均在250～270 g，雌鼠体重均在200～220 g，由上海斯莱克实验动物公司提供［动物许可证号：SCXK（沪）2017-0005］。适应环境1周后，分为暴露组和对照组，每组7只。暴露组雌雄比例3∶4，对照组雌雄比例4∶3。每天暴露时间固定12 h（20:00～8:00），持续3周。

    1.2   暴露装置

    射频电磁场暴露装置如之前研究所描述[9]，由惠普公司生产的信号发生装置（8614A Signal Generator 0.8～2.4 GHz）连接1个放大器（SCD Amplificateur Lineaire 1.3～2.6 GHz Made France）产生频率 1800 MHz微波，功率密度为0.5 mW/cm2。

    1.3   主要仪器与试剂

    兔抗鼠GFAP多克隆抗体（武汉博士德公司），山羊抗兔SP免疫组化试剂盒和DAB染色剂（福州迈新公司），多聚甲醛、明胶等免疫组化实验常规试剂均为分析纯，8592C频谱分析仪（惠普，美国），Model7620微波辐射测试仪（Narda，美国），8614A信号发生装置、信号放大器（惠普，美国），TX-B8H WiFi 2400 MHz 发射装置（深圳市特信电子有限公司，中国），CM1900冰冻切片机（德国莱卡公司），90i摄影生物显微镜（日本尼康公司），Image Pro Plus 6.0病理图像分析系统（美国 Media Cybernetics 公司）。

    1.4   大鼠海马组织CA1区、CA3区、DG区GFAP表达的测定

    1.4.1   取材

    大鼠用戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉，解剖后经主动脉插管，用4%多聚甲醇溶液（pH = 7.4）灌流固定，断头取脑，浸入装有多聚甲醇溶液的容器中，放在4 ℃冰箱中后固定

    1.4.2   组织切片

    将固定好的脑组织块应用梯度蔗糖溶液脱水至脑组织沉底，随后将大鼠海马组织从脑组织中分离，再用冰冻切片机将海马组织沿长轴方向行20 μm厚的连续冠状切片，每个海马组织取20～30张切片，将切片放入0.01 ml/L磷酸盐缓冲液中孵育保存并尽快测定。

    1.4.3   免疫组化染色

    使用免疫组化反应链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（streptavidin-peroxidase method，SP法）进行染色，按说明书操作。用PBS冲洗，加一抗（1∶ 4000）4 ℃过夜。再次用PBS冲洗，二抗37 ℃ 2 h。常规脱水，透明，封片。

    1.4.4   图像及分折

    每张切片分别在海马CA1区、CA3区、DG区随机选取2个视野摄片，每张切片拍摄6次。拍片时均使用研究级显微镜，预实验找到最佳拍摄条件后，所有标本均按此条件进行拍片。拍摄完成后用IPP6.0图像分析软件进行图片分析，测定GFAP、NCAM、GABA阳性染色平均光密度值（mean optical density，MOD），然后求6个视野所测MOD值的平均值，此平均值即为该区域的最终MOD值。

    1.5   统计学处理

    应用SPSS17.0录入数据进行分析，对数据进行正态性检验。如数据符合正态分布，采用独立样本t检验进行比较，数据采用均数±标准差（ $ \bar x \pm s $）表示，P < 0.05差异有统计学意义。

    2.   结果

    2.1   一般结果

    各组未发现老鼠出现死亡和其他异常情况，外观正常。各组体重指标经统计分析，差异无统计学意义（p > 0.05），2组大鼠的体重无明显不同，见 表1。

    表  1  大鼠一般情况分析（ $ \bar x \pm s $）
    Table  1.  General situation analysis of rat （ $ \bar x \pm s $）
    分组　 动物数（n） 性别（雌/雄） 体重（g） t/P
    暴露组 7 3/4 223.50 ± 35.94 t= −0.49
    对照组 7 4/3 215.57 ± 34.51 P= 0.633
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    2.2   GFAP在大鼠海马各区的表达

    GAFP在大鼠海马CA1区、CA3区和DG区均有表达，阳性免疫组化染色结果呈褐色或棕褐色，形似蜘蛛，见图1。

    图  1  GFAP在大鼠海马各区的表达（SP法染色，×400）
    A：GFAP在暴露组大鼠海马CA1区表达；B：GFAP在暴露组大鼠海马CA3区表达；C：GFAP在暴露组大鼠海马DG区表达；D：GFAP在对照组大鼠海马CA1区表达；E：GFAP在对照组大鼠海马CA3区表达；F：GFAP在对照组大鼠海马DG区表达。
    Figure  1.  Expression of GFAP in rat hippocampus（SP，×400）
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    2.2.1   GFAP在大鼠海马各区MOD结果比较

    海马各区GFAP经统计分析，与对照组相比，CA1区、DG区差异有统计学意义（P < 0.05），CA3区无统计学意义（ P > 0.05）。经射频电磁辐射21 d，暴露组大鼠海马CA1区、DG区GFAP的表达下降，见 表2。

    表  2  大鼠海马不同区域的GFAP表达MOD值（ $ \bar x \pm s $）
    Table  2.  MOD value of GFAP expression in different regions of rat hippocampus （ $ \bar x \pm s $）
    分组　 动物数（n） CA1区 CA3 DG区
    暴露组 7 0.07 ± 0.06* 0.11 ± 0.05 0.07 ± 0.06*
    对照组 7 1.50 ± 0.52 0.05 ± 0.06 1.50 ± 0.51
    t = −3.349 t = −1.894 t = −3.809
    P = 0.006 P = 0.083 P = 0.002
    　　与对照组相比，*P < 0.05。
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    2.3   NCAM在大鼠海马各区的表达

    NCAM受体在海马CA1区、CA3区及DG区均有表达，阳性表达免疫组化呈棕色或棕褐色，形状为颗粒状，见图2。

    图  2  NCAM在大鼠海马各区的表达（免疫组化SP法染色，×400）
    A：NCAM在暴露组大鼠海马CA1区表达；B：NCAM在暴露组大鼠海马CA3区表达；C：NCAM在暴露组大鼠海马DG区表达；D：NCAM在对照组大鼠海马CA1区表达；E：NCAM在对照组大鼠海马CA3区表达；F：NCAM在对照组大鼠海马DG区表达。
    Figure  2.  The expression of NCAM in rat hippocampus（SP，×400）
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    2.3.1   NCAM免疫组织MOD结果比较

    NCAM表达的海马各区MOD值经统计分析分析，差异无统计学意义（P > 0.05）。经射频电磁辐射21 d，暴露组大鼠海马各区NCAM的表达无改变，见 表3。

    表  3  大鼠海马不同区域的NCAM表达MOD值（ $ \bar x \pm s $）
    Table  3.  MOD value of NCAM expression in different regions of rat hippocampus（ $ \bar x \pm s $）
    分组　 动物数（n） CA1区 CA3 DG区
    暴露组 7 0.05 ± 0.03 0.03 ± 0.02 0.05 ± 0.02
    对照组 7 0.04 ± 0.03 1.50 ± 0.52 0.06 ± 0.03
    t = 0.591 t = −0.200 t = −1.100
    P = 0.565 P = 0.854 P = 0.293
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    2.4   GABA在海马各区的表达

    GABA 受体在海马CA1区、CA3区及DG区均有表达，阳性表达免疫组化呈棕色或棕褐色，形状为颗粒状，见图3。

    图  3  GABA在大鼠海马各区表达（免疫组化SP法染色，×400）
    A：GABA在暴露组大鼠海马CA1区表达；B：GABA在暴露组大鼠海马CA3区表达；C：GABA在暴露组大鼠海马DG区表达；D：GABA在对照组大鼠海马CA1区表达；E：GABA在对照组大鼠海马CA3区表达；F：GABA在对照组大鼠海马DG区表达。
    Figure  3.  The expression of GABA in rat hippocampus（SP，×400）
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    2.4.1   GABA免疫组织MOD值比较结果

    GABA表达的海马各区MOD值经统计分析结果如下，差异无统计学意义（P > 0.05）。经射频电磁辐射21 d，暴露组大鼠海马各区NCAM的表达无改变，见 表4。

    表  4  大鼠海马不同区域的GABA表达MOD值（ $ \bar x \pm s $）
    Table  4.  MOD value of GABA expression in different regions of rat hippocampus （ $ \bar x \pm s $）
    分组　 动物数（n） CA1区 CA3 DG区
    暴露组 7 0.07 ± 0.04 0.07 ± 0.03 0.03 ± 0.02
    对照组 7 0.05 ± 0.04 0.04 ± 0.02 0.05 ± 0.05
    t = 0.550
    		t = 1.662 t = −0.870
    P = 0.593 P = 0.131 P = 0.402
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    3.   讨论

    本次实验选择的GFAP、NCAM、GABA受体变化可反应RF-EMF对脑部的损伤程度暴露条件，模拟人群所处的 1800 MHz射频电磁场环境，进行全身暴露。经过3周，12 h/d的暴露后，2组大鼠的形态学未发现改变，大鼠海马CA1区、DG区GFAP的表达下降。

    海马体是哺乳动物中枢神经系统的重要组成部分，是学习记忆功能的结构基础[10-14]。Maskey等[15]将大鼠暴露于835 MHz射频电磁场中，暴露1个月后，海马CA1区神经变性。在Altum等[16]的报告中，在射频电磁场暴露15 d，海马CA1区和CA2区神经元明显减少，而CA3区无明显差异。有报道，每天通过手机产生的900 MHz射频电磁场，动物暴露此环境15 d后，在海马CA1、CA3和齿状回亚区出现神经变性[17]。由此，笔者推测射频电磁场可能海马的CA1、CA3和DG区有所影响。

    星形胶质细胞能够调节脑内的离子和神经递质的稳态，具有代谢功能，并在脑损伤时做出反应[18]。GFAP与阿尔茨海默病（alzheimer’s disease，AD）、抑郁症、中风和脑缺血等脑部疾病有关[19-21]。相关研究发现，将大鼠暴露于高强度射频电磁场后发现，脑内GFAP含量增加并对记忆功能有所影响[22]。国内研究发现，将50只雄性大鼠暴露在高功率的射频电磁场后发现，大鼠的学习记忆明显降低，星形胶质细胞中的GFAP含量增加[23]。因此，GFAP含量的增多可能会导致学习和记忆功能下降。NCAM与胶质细胞瘤、一氧化碳中毒后迟发性脑病和痴呆等疾病有关[24-26]，同时也参与了学习记忆的过程。研究发现， 1800 MHz电磁波，度值为0.5 m W/cm2的暴露下可致出生后SD大鼠海马NCAM表达下调，并且NCAM的下调可能是低剂量电磁波影响学习记忆的原因之一[27-28]。γ-氨基丁酸是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，具有极重要的功能，与认知功能存在一定的关系。早期便有研究者证明了在一定条件的电磁辐射暴露下，GABA受体表达较对照组增高进而可能影响人的神经行为[29]。另外，在强度为 2450 MHz，功率密度为为5.0、10.0 mW/cm2的条件下，研究者发现昆明小鼠的GABA含量增高，学习记忆损伤逐渐加重[30]。在其他领域也证实，低功率密度微波辐射可以通过增加GABA、降低谷氨酸对小鼠的学习记忆产生损害[31]。

    本研究结果表明，大鼠暴露于射频电磁场21 d后，大鼠海马CA1区、DG区GFAP的表达下降。根据相关的研究，笔者认为，在本实验条件下， 1800 MHz射频电磁场暴露可对海马CA1和DG区的GFAP表达有影响，本实验只进行了初步探索，在同样条件是否对海马CA1区、CA3区以及DG区的GFAP、NCAM和GABA受体表达产生影响，还需要进一步的研究。

  • 表  1  3组患者一般情况比较（ $\bar{x} \pm s $）

    Table  1.   Comparison of general conditions among the three groups（ $\bar{x} \pm s $）

    组别n年龄
    （岁）    		不孕年
    限（a）    		BMI
    （kg/m2）    		基础FSH
    （mIU/mL）    		基础LH
    （mIU/mL）    		基础E2
    （pg/mL）    		基础P
    （ng/mL）    		基础PRL
    （ ng/mL）    		基础T
    （ ng/dL）    		AMH
    （ng/mL）    		TSH
    （mIU/L）
    NC组 31 30.35 ± 4.33 3.77 ± 2.01 22.01 ± 1.95 4.89 ± 1.09 5.05 ± 0.95 45.34 ± 10.22 0.39 ± 0.17 18.89 ± 3.24 20.21 ± 1.86 1.79 ± 0.45 2.17 ± 0.75
    HRT组 29 29.93 ± 3.42 4.34 ± 1.76 21.69 ± 1.38 5.20 ± 0.81 5.02 ± 0.83 46.49 ± 11.25 0.42 ± 0.19 17.44 ± 3.97 19.64 ± 2.55 1.91 ± 0.48 2.06 ± 0.64
    GnRH-a-
    HRT    		 29 30.69 ± 4.51 4.10 ± 1.84 21.90 ± 1.30 5.27 ± 0.76 5.27 ± 0.68 48.04 ± 9.16 0.46 ± 0.21 18.58 ± 3.04 19.46 ± 1.94 1.89 ± 0.60 1.86 ± 0.55
    F / 0.25 0.70 0.32 1.54 0.78 0.52 1.06 1.45 1.02 0.49 1.79
    P / 0.78 0.50 0.73 0.22 0.46 0.59 0.35 0.24 0.37 0.61 0.17
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    表  2  3组患者子宫内膜厚度及内膜血流比较（$\bar{x} \pm s $）

    Table  2.   Comparison of endometrial thickness and endometrial blood flow among the 3 groups（$\bar{x} \pm s $）

    组别n子宫内膜厚度（mm）RIPIPSV
    NC组 31 7.00 ± 1.13* 0.55 ± 0.04* 1.97 ± 0.11* 16.33 ± 0.79*
    HRT组 29 7.86 ± 0.95# 0.51 ± 0.04# 1.87 ± 0.09# 16.76 ± 0.62#
    GnRH-a-HRT组 29 8.45 ± 1.15∆ 0.48 ± 0.04∆ 1.70 ± 0.06∆ 17.32 ± 0.75∆
    F 13.65 18.10 72.92 13.93
    P < 0.001☆ < 0.001☆ < 0.001☆ < 0.001☆
    　　与HRT组比较，*P < 0.05；与GnRH-a-HRT组比较，#P < 0.05；NC组组比较；∆P < 0.05；☆P < 0.05。
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    表  3  3组患者移植后结局比较 （n）

    Table  3.   Comparison of outcomes after transplantation among the three groups （n）

    组别n胚胎种植率临床妊娠率生化妊娠率早期流产率继续妊娠率活产率
    NC组 31 （6/31）* （6/31）* （2/31） （1/4） （3/31）* （3/31）*
    HRT组 29 （13/29）# （13/29）# （2/29） （1/10） （9/29）# （9/29）#
    GnRH-a-HRT组 29 （21/29）∆ （21/29）∆ （1/29） （2/20） （18/29）∆ （17/29）∆
    X2 17.24 17. 24 0.39 0.77 18.54 16.39
    P < 0.001☆ < 0.001☆ 0.824 0.682 < 0.001☆ < 0.001☆
    　　与HRT组比较，*P < 0.05；与GnRH-a-HRT组比较，#P < 0.05；与NC组比较，∆P < 0.05；☆P < 0.05。
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    • 参考文献(33)
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-04-06
  • 网络出版日期:  2023-09-21
  • 刊出日期:  2023-09-30

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摘要
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  • 1.   材料与方法

  • 1.1   动物分组

  • 1.2   暴露装置

  • 1.3   主要仪器与试剂

  • 1.4   大鼠海马组织CA1区、CA3区、DG区GFAP表达的测定

  • 1.5   统计学处理

  • 2.   结果

  • 2.1   一般结果

  • 2.2   GFAP在大鼠海马各区的表达

  • 2.3   NCAM在大鼠海马各区的表达

  • 2.4   GABA在海马各区的表达

  • 3.   讨论

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