Correlation Analysis of HLA-DM Gene Polymorphisms with Polio Vaccine-induced Antibody Response
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摘要:
目的 探讨HLA-DM基因多态性与脊髓灰质炎疫苗诱导抗体应答的相关性。 方法 选取355名2~3月龄广西壮族自治区的健康婴幼儿为研究对象,采用Sanger测序法对DMA的外显子3和DMB的外显子2/3总共10个SNPs进行基因分型,在等位基因、基因型和单倍型水平上分析DMA和DMB基因与脊髓灰质炎疫苗诱导抗体应答的相关性。 结果 脊髓灰质炎疫苗诱导的I型抗体应答中,DMA*01:02、DMB*01:01、DMB*01:01/DMB*01:01和DMA*01:02-DMB*01:01在抗体非阳转组中的频率高于阳转组(P < 0.05);脊灰II型抗体应答中,DMA*01:02、DMA*01:02/DMA*01:02、DMB*01:01/DMB*01:01和DMA*01:02-DMB*01:01在抗体非阳转组中的频率高于阳转组( P < 0.05)。 结论 DMA*01:02和DMB*01:01等位基因可能与脊髓灰质炎疫苗诱导的I型和II型抗体应答有关。 Abstract:Objective To investigate the correlation between HLA-DM gene polymorphism and antibody response induced by poliomyelitis vaccine. Methods 355 healthy infants aged 2 to 3 months in Guangxi Zhuang Autonomous Region were selected as the study objects, and 10 SNPs of DMA exon 3 and DMB exon 2/3 were genotyped by Sanger sequencing. The correlation between DMA and DMB genes and poliomyelitis vaccine-induced antibody response was analyzed at allele, genotype and haplotype levels. Results In the type I antibody response induced by polio vaccine, the frequencies of DMA*01:02, DMB*01:01, DMB*01:01/DMB*01:01 and DMA*01:02-DMB*01:01 were higher in the non-seroconversion group than in the seroconversion group(P < 0.05). In the polio type II antibody response, the frequencies of DMA*01:02, DMA*01:02/DMA*01:02, DMB*01:01/DMB*01:01 and DMA*01:02-DMB*01:01 were higher in the non-seroconversion group than in the seroconversion group( P < 0.05). Conclusion Alleles DMA*01:02 and DMB*01:01 may be associated with type I and type II antibody responses induced by poliomyelitis vaccine. -
Key words:
- HLA-DM /
- Gene polymorphism /
- Polio vaccine /
- Antibody response
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新生儿重症肺炎在床旁超声的监测下发现常合并肺实变[1-2]。新生儿肺实变使患儿处于持续低氧状态、进而影响呼吸循环系统的稳定性,是导致新生儿死亡的重要原因[3-5]。在新生儿重症肺炎的治疗中,氧疗、机械通气,恰当的抗生素的使用等治疗固然占据主导地位,但合适的护理措施也对重症肺炎的恢复起到至关重要的作用[6-8]。在常规的重症肺炎护理中,所有患儿无论肺部病变程度、性质如何,均给以固定时间间隔的翻身、拍背、吸痰等措施,以促进气道分泌物排出[9-10]。但由于新生儿气道清洁能力不足,自主活动能力差,常规护理往往收效甚微[11-12]。因此,为了提高新生儿重症肺炎并肺实变的疗效,需要制定针对不同肺部病变性质的精准护理措施[13]。随着肺脏超声在新生儿领域的广泛应用,该技术为新生儿重症肺炎并肺实变的精准护理提供了一种有效的方法,对缩短病程和提高疗效有重要价值。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选取2021年1月至12月昆明市儿童医院新生儿重症监护室(NICU)收治的60例重症肺炎新生儿为研究对象,该研究获得了昆明市儿童医院伦理委员会的批准(2022-03-130-K01)。纳入标准:新生儿重症肺炎的诊断标准符合第5版《实用新生儿学》中的诊断标准;患儿除咳嗽、鼻塞等呼吸道症状外,合并明显呼吸困难或循环不稳定者定义为重症肺炎[14]。排除标准:(1)伴有先天性疾病;(2)确诊脓毒血症;(3)放弃治疗。采用随机数字法随机分为研究组和对照组2组,每组各30例。研究组男 13 例,女 17例;年龄中位数1.5(8.0,18.5 ) d;体重中位数3.2(2.6,3.8 )kg;胎龄中位数38.5(36.8,40.3)周;剖宫产14例,阴道分娩16例;均有咳嗽咳痰等呼吸道症状,其中机械通气者12例(40%),普通吸氧者18例(60%)。 对照组患儿男 12例,女18例;年龄中位数11( 8.0,21.3) d;体重中位数3.0( 2.5,3.7) kg;胎龄中位数39(37,40)周;剖宫产 10例,阴道分娩 20例;均有咳嗽咳痰等呼吸道症状,其中机械通气者10例(30%),普通吸氧者20例(70%)。2组一般资料差异无统计学意义(P > 0.05),见 表1。
表 1 一般资料比较[M(P25,P75)/n(%)]Table 1. Comparison of general information [M(P25,P75)/n(%)]组别 胎龄(周) 日龄(d) 体重(kg) 咳嗽 腹胀 心衰 休克 中毒性脑病 机械通气 研究组 38.5(36.8,40.3) 11.5
(8.0,18.5 )3.2
(2.6,3.8 )30
(100)6(20) 10(30) 13(43) 2(7) 18(60) 对照组 39
(37,40)11
( 8.0,21.3)3.0
( 2.5,3.7)30
(100)8(27) 12(40 11(37) 1(3) 20(66) Z/χ2 −0.630 −0.220 −0.430 0.570 0.640 0.490 0.680 P 0.530 0.824 0.667 0.678 0.584 0.801 0.433 1.2 研究方法
2组患儿均采取普通吸氧或机械通气、抗感染、雾化、维持循环系统稳定等常规治疗。对照组给予常规护理干预:(1)基础护理: 保持病房清洁、常规口、脐、臀、皮肤护理,发热者及时降温处理,施与袋鼠式护理;(2)呼吸道护理:定时翻身、拍背、根据痰多少给予相应频次的吸痰。
研究组在对照组常规护理的基础上,每天使用床旁超声检查肺脏2~4次,根据超声发现采取不同护理干预措施,具体如下:(1)超声提示肺实变征象,见图1:实变面积较大时予纤维支气管镜下或气管插管下肺泡灌洗术;实变局限于胸膜线下,呈虫蚀样改变时以叩背、机械振动、手法震颤以及吸痰为主,根据严重程度选择一种或多种方式进行排痰,扣背、机械振动、手法震颤等措施位置主要为实变区域,并将患儿体位管理为实变对侧卧位为主。(2)超声提示肺间质综合征征象,见图2:予固定时间翻身,不常规行拍背吸痰。
1.3 观察指标
(1)接受机械通气的患儿撤离呼吸机的时间;(2)接受普通给氧的患儿停氧的时间;(3)咳嗽咳痰、肺部啰音、少吃少动症状体征消失的时间;(4)住院时间。
1.4 统计学处理
应用SPSS 22.0统计软件,计量资料中,对于符合正态分布的数据采用( $\bar x \pm s $)表示,2组间用独立样本t 检验进行比较;对于不符合正态分布的数据采用中位数和四分位间距即M(P25,P75)表示,2组间采用非参数秩和检验(Wilcoxon’s signed rank)比较。计数资料以n(%)表示,行χ2检验,P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 2组超声图像比较
超声下,对照组与研究组均显示肺炎征象,包括胸膜线下虫蚀样改变、实变位置深、至少累及2个肋间,胸腔积液、肺不张和支气管充液征,且以累及2个以上肋间以上的深度实变为主,多合并胸腔积液和肺不张,提示重症肺炎的患儿肺脏感染重,渗出液多,存在因炎性分泌物导致的中小气道堵塞。2组超声图像特征均差异无统计学意义(P > 0.05),见 表2。
表 2 2组超声图像比较[n(%)]Table 2. Comparison of two groups of ultrasound images [n(%)]组别 实变范围 胸腔积液 肺不张 支气管
充液征虫蚀样 深,累及2个及
以上肋间对照组 8(27) 22(73) 19(63) 5(17) 30(100) 研究组 6(20) 24(80) 22(73) 4(13) 30(100) χ2 0.740 0.834 0.830 0.670 P 0.564 0.681 0.632 0.547 2.2 2组临床症状缓解时间及住院时间比较
研究组咳嗽咳痰、肺部啰音、少吃少动症状消失的时间中位数分别为8(6.5,10.0)d及(4.5,10.0)d,住院时间中位数10(8.0,11.0)d;对照组咳嗽咳痰、肺部啰音、少吃少动症状消失的时间中位数分别为11(10.0,12.3)d及15(7.0,18.0)d,住院时间中位数14(12.0,15.3)d。研究组患儿咳嗽咳痰、肺部啰音消、少吃少动消失时间及住院时间均较对照组缩短(P < 0.05),见 表3。
表 3 2组临床征象缓解时间及住院时间比较[M(P25,P75),d]Table 3. Comparison of clinical remission time and hospitalization time between two groups [M(P25,P75),d]组别 临床症状消失 住院时间 咳嗽咳痰 肺部啰音 少吃少动 腹胀 心衰 休克 研究组 8
(6.5,10.0)4
(3.5,11.07
(4.5,10)3(1,5) 2(1,4) 3(1.5,5) 10(8.0,11.0) 对照组 11
(10.0,12.3)10
(9,13)15
(7,18)7(13,9) 5(2,7) 4(2,6) 14(12.0,15.3) Z −4.642 11.031 8.983 9.043 10.031 9.532 −5.642 P < 0.001* < 0.001* < 0.001* < 0.001* < 0.001* < 0.001* < 0.001* *P < 0.05。 2.3 2组撤离呼吸机或停氧时间比较
研究组撤离呼吸机时间中位数为5(4.0,6.3)d,停氧时间中位数7(5.1,9.5)d;对照组撤离呼吸机时间中位数为8(6.0,9.3)d,停氧时间中位数10(8.0,12)d。研究组患儿撤离呼吸机或停氧时间均较对照组短(P < 0.05) ,见 表4。
表 4 2组撤离呼吸机或停氧时间比较[M(P25,P75),d]Table 4. Comparison of extubation time or deaeration time between two groups [M(P25,P75),d]组别 撤离呼吸机 停氧 研究组 5(4.0,6.3) 7(5.1,9.5) 对照组 8(6.0,9.3) 10(8.0,12) Z −4.812 −4.674 P < 0.001* < 0.001* *P < 0.05。 3. 讨论
3.1 新生儿肺实变的特点
新生儿肺实变好发部位与成人和儿童有很大差别 很少有报道新生儿肺实变的好发部位,成人和儿童重症肺炎时发生肺实变常见部位为肺下段,但新生儿发生肺实变的常见部位为脊柱两侧以及肩甲骨区域部位[15]。分析发现与体位有关,成人和儿童当患重症肺炎时,卧床期间,肺下段处于低位,而新生儿卧床期间,一般下肢处于卷曲状态,导致身体处于低位的部位为后备及胸廓段,由于重力的原因,痰液集聚在处于低位的肺段处,故存在新生儿肺实变的区域与成人和儿童不同。
3.2 超声引导精准护理治疗肺实变的价值
新生儿肺实变隐匿且治疗困难 新生儿实变区域多数在脊柱两侧及肩胛骨区域,床旁X-线片很难发现脊柱两侧细小的实变区,但在B超下能明显显示实变[16]。且该区域被骨组织覆盖,在治疗时考虑到施力后导致骨折的原因,导致在进行扣背、手法震颤等护理措施时力度不敢过大,加之震颤的穿透力在透过骨组织时会被大大的削弱,导致治疗效果相对差[17-19]。故发生在新生儿脊柱两侧及肩甲骨区域的肺实变精准护理的时间相对长方能有效。
3.3 体位管理在新生儿肺实变精准护理中的价值
体位引流与儿童及成人差异较大 儿童和成年人建立翻身卡能明确左、右侧卧位以及俯卧位,这类人群能自主维持相应的体位;但新生儿除了俯卧有明确的更换体位外,达到完全的侧卧极为困难,新生儿不能自主维持任何体位,当新生儿处于俯卧位时,如果体位摆放不规范,可能会有“婴儿猝死综合征”的危险[20]。当新生儿摆放侧卧位时,因为新生儿本身处于卷曲状态,侧卧位不能完全实现,导致体位引流效果不如成人及儿童,所以在施以新生儿体位管理时,需要有相应的辅助支撑的用具方能提高体位管理的效果。
床旁肺脏超声在新生儿肺实变临床诊断上有非常大的敏感性[21]。精准化护理措施在超声动态监视下能动态监测肺实变的治疗效果,但在精准化护理措施实施过程中,医护协助极为重要,且治疗过程中力度的掌握、病情的监护极为重要。
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表 1 HLA-DMA基因分型SNPs位点信息
Table 1. HLA-DMA genotyping SNPs locus information
外显子区域 外显子3 氨基酸编码位点 condon140 condon155 condon184 SNPs rs1063478 rs6926628 rs17214044 rs41555121 DMA*01:01 GTC GGA CGC CGC DMA*01:02 ATC GGA CGC CGC DMA*01:03 GTC GCA CAC CAC DMA*01:04 ATC GGA TGC TGC 表 2 HLA-DMB基因分型SNPs位点信息
Table 2. HLA-DMB genotyping SNPs locus information
外显子区域 外显子2 外显子3 氨基酸编码位点 condon10 condon27 condon31 condon53 condon144 condon179 SNPs rs17583782 rs41560814 rs17617333 rs17617321 rs2071555 rs1042337 DMB*01:01 ACC TCC GAT AGC GCG ATT DMB*01:02 ACC TCC GAT AGC GAG ATT DMB*01:03 ACC TCC GAT AGC GCG ACT DMB*01:04 ACC TCC GAT AGC GTG ACT DMB*01:05 ACC TCC GAT AGC GTG ATT DMB*01:06 ACC TTC GAT AGC GAG ACT DMB*01:07 GCC TCC GTT AAC GCG ATT 表 3 引物序列及片段大小
Table 3. Primers sequence and fragment size
扩增片段 正向引物 反向引物 目的片段长度(bp) DMA外显子3 5′-TCTCCCAAAGCCTGACCC-3′ 5′-AGAAAGAAGCCTCCTCCC-3′ 479 DMB外显子2 5′-ACATTGACCTGTTCTCCCTT-3′ 5′-CTGCACTTCCTGGTAGCC-3′ 358 DMB外显子3 5′-CGATCCACATCTCATTTTCTCTGC-3′ 5′-CTATGCAGGGCCACCATCTG-3-3′ 353 表 4 研究对象基本情况
Table 4. Basic information on research subjects
血清型 性别/民族 抗体阳转组 抗体非阳转组 χ2 P 频数 频率 频数 频率 I 男 192 0.549 4 0.800 1.260 0.385 女 158 0.451 1 0.200 II 男 159 0.560 37 0.521 0.345 0.557 女 125 0.440 34 0.479 III 男 194 0.551 2 0.667 0.161 1.000 女 158 0.449 1 0.333 I 汉族 113 0.323 1 0.200 0.341 0.675 壮族 237 0.677 4 0.800 II 汉族 90 0.317 24 0.338 0.116 0.733 壮族 194 0.683 47 0.662 III 汉族 113 0.321 1 0.333 0.002 1.000 壮族 239 0.679 2 0.667 表 5 DMA和DMB各等位基因在抗体阳转组和非阳转组中的频率分布
Table 5. Comparison of frequencies of alleles of DMA and DMB between two groups
基因 血清型 等位基因 抗体阳转组 抗体非阳转组 χ2 P 频数 频率 频数 频率 DMA Ⅰ DMA*01:01 493 0.704 4 0.400 4.347 0.074 DMA*01:02 177 0.253 6 0.600 6.210 0.022* DMA*01:03 30 0.043 0 0.000 0.447 1.000 Ⅱ DMA*01:01 406 0.715 91 0.641 2.958 0.085 DMA*01:02 135 0.238 48 0.338 5.980 0.014* DMA*01:03 27 0.048 3 0.021 1.958 0.241 Ⅲ DMA*01:01 493 0.700 4 0.667 0.032 1.000 DMA*01:02 181 0.257 2 0.333 0.181 1.000 DMA*01:03 30 0.043 0 0.000 0.267 1.000 DMB Ⅰ DMB*01:01 347 0.496 9 0.900 6.446 0.021* DMB*01:02 129 0.184 1 0.100 0.468 0.699 DMB*01:03 193 0.276 0 0.000 3.786 0.070 DMB*01:05 4 0.006 0 0.000 0.057 1.000 DMB*01:07 27 0.039 0 0.000 0.401 1.000 Ⅱ DMB*01:01 275 0.484 81 0.570 3.382 0.066 DMB*01:02 105 0.185 25 0.176 0.059 0.808 DMB*01:03 160 0.282 33 0.232 1.395 0.238 DMB*01:05 4 0.007 0 0.000 1.006 0.589 DMB*01:07 24 0.042 3 0.021 1.386 0.328 Ⅲ DMB*01:01 352 0.500 4 0.667 0.661 0.686 DMB*01:02 129 0.183 1 0.167 0.011 1.000 DMB*01:03 192 0.273 1 0.167 0.338 0.687 DMB*01:05 4 0.006 0 0.000 0.034 1.000 DMB*01:07 27 0.038 0 0.000 0.239 1.000 *P < 0.05。 表 6 DMA和DMB各基因型在抗体阳转组和非阳转组中的频率分布
Table 6. Comparison of frequencies of genotypes of DMA and DMB between two groups
基因 血清型 基因型 抗体阳转组 抗体非阳转组 χ2 P 频数 频率 频数 频率 DMA I DMA*01:01/DMA*01:01 174 0.497 0 0.000 4.875 0.061 DMA*01:01/DMA*01:02 123 0.351 4 0.800 4.317 0.057 DMA*01:01/DMA*01:03 22 0.063 0 0.000 0.335 1.000 DMA*01:02/DMA*01:02 23 0.066 1 0.200 1.410 0.297 DMA*01:02/DMA*01:03 8 0.023 0 0.000 0.117 1.000 II DMA*01:01/DMA*01:01 142 0.500 32 0.451 0.552 0.457 DMA*01:01/DMA*01:02 102 0.359 25 0.352 0.012 0.912 DMA*01:01/DMA*01:03 20 0.070 2 0.028 1.744 0.272 DMA*01:02/DMA*01:02 13 0.046 11 0.155 10.736 0.001* DMA*01:02/DMA*01:03 7 0.025 1 0.014 0.288 0.703 III DMA*01:01/DMA*01:01 173 0.491 1 0.333 0.298 1.000 DMA*01:01/DMA*01:02 125 0.355 2 0.667 1.257 0.555 DMA*01:01/DMA*01:03 22 0.063 0 0.000 0.200 1.000 DMA*01:02/DMA*01:02 24 0.068 0 0.000 0.219 1.000 DMA*01:02/DMA*01:03 8 0.023 0 0.000 0.070 1.000 DMB I DMB*01:01/DMB*01:01 92 0.263 4 0.800 7.209 0.020* DMB*01:01/DMB*01:02 57 0.163 1 0.200 0.050 1.000 DMB*01:01/DMB*01:03 93 0.266 0 0.000 1.800 0.332 DMB*01:01/DMB*01:07 11 0.031 0 0.000 0.162 1.000 DMB*01:02/DMB*01:02 14 0.040 0 0.000 0.208 1.000 DMB*01:02/DMB*01:03 35 0.100 0 0.000 0.555 1.000 DMB*01:02/DMB*01:07 7 0.020 0 0.000 0.102 1.000 DMB*01:03/DMB*01:03 28 0.080 0 0.000 0.434 1.000 DMB*01:03/DMB*01:07 9 0.026 0 0.000 0.132 1.000 II DMB*01:01/DMB*01:01 67 0.236 29 0.408 8.570 0.003* DMB*01:01/DMB*01:02 51 0.180 7 0.099 2.725 0.099 DMB*01:01/DMB*01:03 78 0.275 15 0.211 1.180 0.277 DMB*01:01/DMB*01:07 10 0.035 1 0.014 0.844 0.476 DMB*01:02/DMB*01:02 10 0.035 4 0.056 0.669 0.492 DMB*01:02/DMB*01:03 27 0.095 8 0.113 0.198 0.656 DMB*01:02/DMB*01:07 5 0.018 2 0.028 0.328 0.631 DMB*01:03/DMB*01:03 23 0.081 5 0.070 0.087 0.768 DMB*01:03/DMB*01:07 9 0.032 0 0.000 2.309 0.214 III DMB*01:01/DMB*01:01 94 0.267 2 0.667 2.408 0.179 DMB*01:01/DMB*01:02 58 0.165 0 0.000 0.591 1.000 DMB*01:01/DMB*01:03 93 0.264 0 0.000 1.074 0.570 DMB*01:01/DMB*01:07 11 0.031 0 0.000 0.097 1.000 DMB*01:02/DMB*01:02 14 0.040 0 0.000 0.124 1.000 DMB*01:02/DMB*01:03 34 0.097 1 0.333 1.876 0.268 DMB*01:02/DMB*01:07 7 0.020 0 0.000 0.061 1.000 DMB*01:03/DMB*01:03 28 0.080 0 0.000 0.259 1.000 DMB*01:03/DMB*01:07 9 0.026 0 0.000 0.079 1.000 *P < 0.05。 表 7 DMA-DMB单倍型在抗体阳转组和非阳转组中的频率分布
Table 7. Comparison of frequencies of genotypes of DMA and DMB between two groups
血清型 单倍型 抗体阳转组 抗体非阳转组 χ2 P 频数 频率 频数 频率 I DMA*01:01-DMB*01:01 172 0.245 3 0.300 0.156 0.714 DMA*01:01-DMB*01:02 125 0.178 1 0.100 0.416 1.000 DMA*01:01-DMB*01:03 193 0.275 0 0.000 3.786 0.069 DMA*01:02-DMB*01:01 169 0.241 6 0.600 6.825 0.017* DMA*01:03-DMB*01:07 24 0.034 0 0.000 0.354 0.999 II DMA*01:01-DMB*01:01 141 0.248 34 0.239 0.047 0.827 DMA*01:01-DMB*01:02 102 0.179 24 0.169 0.086 0.768 DMA*01:01-DMB*01:03 160 0.281 33 0.232 1.394 0.237 DMA*01:02-DMB*01:01 128 0.225 47 0.330 6.825 0.008* DMA*01:03-DMB*01:07 21 0.036 3 0.021 0.873 0.444 III DMA*01:01-DMB*01:01 173 0.245 2 0.333 0.245 0.639 DMA*01:01-DMB*01:02 125 0.177 1 0.166 0.004 0.999 DMA*01:01-DMB*01:03 192 0.272 1 0.166 0.338 0.999 DMA*01:02-DMB*01:01 173 0.245 2 0.333 0.245 0.639 DMA*01:03-DMB*01:07 24 0.034 0 0.000 0.211 0.999 *P < 0.05。 -
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