Molecular Analysis on the Molecular Mechanism of Lung Development in the Piglet Model of Early Onset Scoliosis Complicated with Thoracic Insufficiency Syndrome
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摘要:
目的 基于已建立的早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征（EOS+TIS）幼猪模型及治疗模型获取组织标本，进行转录组测序，生物信息学分析。筛选出影响肺发育相关的部分HUB基因。 方法 建立EOS+TIS及治疗动物模型，进行HE及Masson染色观察肺组织形态及纤维化程度，并对3组（对照组、模型组、治疗组）肺组织测序。利用R软件的DESeq2进行差异分析，运用DAVID数据库进行差异基因的GO/KEGG富集分析，筛选核心基因，预测相关通路，并通过PCR和免疫印迹实验进行验证。 结果 （1）HE染色结果：模型组肺组织体现了显著的支气管肺发育不良，治疗组获得明显改善；Masson染色结果：模型组肺纤维化程度较重，治疗组减轻；（2）DESeq2分析表明，正常组与模型组有170个上调和262个下调基因，而模型组与治疗组有323个上调和467个下调基因；（3）GO功能注释显示差异基因主要富集在细胞外基质、质膜组成、免疫应答、炎症反应、钙离子结合、细胞因子活性等功能。KEGG显示差异基因主要富集在神经活性配体－受体相互作用、细胞因子－细胞因子受体相互作用等通路；（4）筛选出共同基因THBS1；（5）PCR和Western Blot实验验证，THBS1在模型组中下调，治疗后上调（P < 0.05），使用Western Blot实验检测TGF-β在3组中的表达量，模型组下降，治疗后上升（P < 0.05）。 结论 THBS1与TGF-β参与了早发性脊柱侧凸合并胸廓发育不良综合征幼猪模型的肺发育变化过程。 Abstract:Objective To identify key HUB genes involved in lung development through transcriptomic sequencing and bioinformatics analysis using tissue samples collected from an established piglet model of early-onset scoliosis with thoracic insufficiency syndrome （EOS+TIS） and its treatment model. Methods EOS+TIS and treatment animal models were established, followed by histological analysis using HE and Masson staining to observe lung tissue morphology and fibrosis severity. Lung tissue samples from three groups （control, model, treatment） were sequenced. Differential analysis was performed using the DESeq2 package in R, and differential gene GO/KEGG enrichment analysis was conducted using the DAVID database. Core genes were identified, relevant pathways were predicted, and validation was done via PCR and Western blot experiments. Results （1） HE staining results: The model group displayed significant bronchopulmonary dysplasia, which was notably improved in the treatment group. （2） Masson staining results: The model group showed severe lung fibrosis, which was alleviated in the treatment group. （3） DESeq2 analysis: The normal vs. model group comparison identified 170 upregulated and 262 downregulated genes, while the model vs. treatment group comparison identified 323 upregulated and 467 downregulated genes. （4） GO functional annotation: Differential genes were mainly enriched in functions like extracellular matrix, plasma membrane composition, immune response, inflammatory response, calcium ion binding, and cytokine activity. KEGG enrichment: Differential genes were primarily enriched in pathways like neuroactive ligand-receptor interaction and cytokine-cytokine receptor interaction. （5） Common gene identification: THBS1 was identified as a common gene. （6） PCR and Western Blot validation: THBS1 was downregulated in the model group and upregulated post-treatment （P < 0.05）. Western Blot analysis revealed that TGF-β expression was reduced in the model group and increased post-treatment （P < 0.05）. Conclusion THBS1 and TGF-β are involved in the process of lung development in the early onset scoliosis with thoracic insufficiency syndrome pig models. -
Key words:
- Early-onset scoliosis /
- Thoracic insufficiency syndrome /
- Bioinformatics analysis /
- THBS1 /
- TGF-β
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随着生育政策及社会经济形态的转变，高龄产妇（年龄≥35岁）数量日益增多。在妊娠及分娩过程中易损伤到盆底结构及功能，患盆底功能障碍性疾病（pelvic fIoor dysfunction，PFD）风险较高。诸多研究发现[1-2]，高龄产妇产后患盆底疾病风险远高于适龄产妇，且影响因素较多，一旦发生势必会对产妇生活质量造成严重影响，应给予高度重视。早期评估诊断盆底功能及结构变化对于预防及降低PFD疾病发生有着重要意义。盆底超声为评估PFD疾病的主要辅助检查技术之一，具有安全无创等优势。二维超声[3]、三维超声[4]为临床常用盆底超声技术，可量化评估观察盆底解剖结构形态学变化情况。但由于盆底结构较为复杂，误诊漏诊风险较高，仍需对超声技术诊断效能作进一步明确。基于此，本研究将对比盆底二维，三维超声评估适龄、高龄产妇产后早期盆底结构及功能的变化，旨在明确盆底超声诊断效能，为临床精准诊疗提供参考依据，现报道如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选择本院2021年7月至2022年12月就诊的产后早期（6～8周）高龄产妇86例作为观察组，选择同期就诊的产后早期适龄产妇50例作为对照组。观察组年龄35～43岁（38.67±4.35）岁；BMI（24.14±2.58）kg/m2；孕次0～3次（1.38±0.14）次，人工流产史6例；对照组年龄22～34岁（27.15±4.21）岁；BMI（23.97±2.64）kg/m2；孕次0～3次（1.29±0.18）次，人工流产史5例。两组除年龄资料以外各项资料进行匹配，差异无统计学意义（P > 0.05）。
纳入标准：（1）符合盆底超声诊断适应证[5]；（2）高龄产妇年龄≥35岁；（3）单胎妊娠、足月、阴道自然分娩；（4）患者家属签署知情同意书。
排除标准：（1）妊娠前存在PFD疾病；（2）存在妊娠合并症、产后大出血、持续恶露、泌尿系统炎症者；（3）既往有盆腔手术史、占位性病变者；（4）产后接受盆底功能恢复治疗者。
1.2 方法
所有研究对象均接受盆底二维、三维超声诊断，所有操作均由同一位超声科医生完成。仪器选择：GE Voluson E10彩色多普勒超声诊断仪，并配备经阴道探头RM6C-D及编码对比成像软件。具体操作如下：叮嘱产妇排空大便，并保持膀胱适度充盈，选择截石体位，保持髋部微曲及轻度外展，充分暴露会阴部。检查者采用耦合剂均匀涂抹于探头表面上，并采用安全套包裹，将探头轻柔置入阴道，对其子宫双附件进行检查后，将其放置于受检者会阴部。首先进行二维超声扫描，选择盆底正中矢状切面（显示膀胱颈、膀胱、尿道、耻骨联合前下缘、后间隙等结构）进行扫描，观察盆底器官位置及运动情况，并于静息状态、Valsalva动作（深吸气后屏气向下用力，持续6 s）下测量膀胱颈位置（bladder neck position，BNP）、膀胱尿道后角（posterior urethravesical angel，PUA），并计算膀胱颈移动度（bladder neck descent，BND）、尿道旋转角（urethral rotation angel，URA）。接着开启三维超声扫描，进行盆底正中矢状切面、肛管横切面扫查（显示耻骨、直肠、尿道、阴道、肛门括约肌、肛提肌等结构），获取肛提肌裂孔图像，测量静息状态、Valsalva动作下肛提肌裂孔前后径 （ levator hiatal anteroposterior diameter，LHAP）、肛提肌裂孔左右径（levator hiatal lateral diameter，LHLP）、肛提肌裂孔面积（levator hiatal area，LHA）。
1.3 观察指标
（1）对比2组产妇盆底二维超声评估参数；（2）对比2组产妇盆底三维超声评估参数；（3）对比盆底二维、三维超声对适龄、高龄产妇产后PFD的诊断效能：以PFD疾病相关权威指南诊断标准（盆腔脏器脱垂[6]、压力性尿失禁等）为金标准，患PFD为阳性，未患为阴性，计算两种技术诊断灵敏度（真阳性/（真阳性+假阴性））、特异度（真阴性/（真阴性+假阳性））及准确性（（真阳性+真阴性）/总样本数）；（4）盆底二维、三维超声诊断图像。
1.4 统计学处理
将数据纳入SPSS23.0软件中分析，计量资料（盆底二维、三维超声评估参数）比较采用t检验，并以（
$\bar x \pm s$ ）表示，计数资料（诊断效能）采用χ2检验，并以率（%）表示，（P < 0.05）为差异有统计学意义。2. 结果
2.1 2组产妇盆底二维超声评估参数比较
观察组静息状态BNP、PUA、Valsalva动作BNP水平、BND水平明显高于对照组（P < 0.05）；而Valsalva动作PUA及URA水平对比差异无统计学意义（P > 0.05），见表1。
表 1 盆底二维、三维超声对适龄产妇产后PFD的诊断效能比较（n）Table 1. Comparison of the diagnostic efficacy of two-dimensional and three-dimensional ultrasound （n）诊断技术 金标准 灵敏度（%） 特异度（%） 准确性（%） 阳性 阴性 合计 二维超声 阳性 7 3 10 77.78（7/9） 92.68（38/41） 90.00（45/50） 阴性 2 38 40 合计 9 41 50 三维超声 阳性 8 1 9 88.89（8/9） 97.56（40/41） 96.00（48/50） 阴性 1 40 41 合计 9 41 50 χ2 − − − − 0.400 1.051 1.383 P − − − − 0.527 0.305 0.240 2.2 2组产妇盆底三维超声评估参数比较
观察组Valsalva动作LHAP、LHLP、LHA水平均明显高于对照组（P < 0.05）；而静息状态LHAP、LHLP、LHA水平对比差异无统计学意义（P > 0.05），见表2。
表 2 2组产妇盆底二维超声评估参数比较（$ \bar x \pm s $ ）Table 2. Comparison of the two groups of puerpera pelvic floor two-dimensional ultrasound evaluation parameter between the two groups （$ \bar x \pm s $ ）组别 n 静息状态 Valsalva动作 BND（cm） URA（°） BNP（cm） PUA（°） BNP（cm） PUA（°） 观察组 86 −2.34 ± 0.47* 120.47 ± 25.34* −0.59 ± 0.23* 137.45 ± 24.32 1.75 ± 0.35* 30.78 ± 6.53 对照组 50 −3.11 ± 0.56 104.68 ± 20.15 −1.74 ± 0.39 139.54 ± 25.47 1.37 ± 0.44 29.45 ± 5.84 t − 8.577 3.766 21.654 0.475 5.545 1.190 P − <0.001 <0.001 <0.001 0.636 <0.001 0.236 与对照组比较，*P < 0.05。 2.3 盆底二维、三维超声对高龄产妇产后PFD的诊断效能比较
50例适龄产妇中PFD患者9例，膀胱脱垂5例，压力性尿失禁4例，及阴道、直肠脱垂。盆底二维、三维对比无差异（P > 0.05）。86例高龄产妇中PFD患者27例，其中盆底脱垂15例，压力性尿失禁12例。盆底三维超声诊断灵敏度（92.59%）、准确性（91.53%）明显高于二维超声（70.37%、77.91%），P < 0.05，见表3、表4。
表 3 2组产妇盆底三维超声评估参数比较（$ \bar x \pm s $ ）Table 3. Comparison of pelvic floor three-dimensional ultrasound evaluation parameters between the two groups （$ \bar x \pm s $ ）组别 n 静息状态 Valsalva动作 LHAP（cm） LHLP（cm） LHA（cm2） LHAP（cm） LHLP（cm） LHA（cm2） 观察组 86 5.45 ± 1.26 3.01 ± 0.84 16.41 ± 2.54 6.07 ± 1.34* 4.16 ± 1.22* 25.25 ± 2.76* 对照组 50 5.12 ± 1.23 3.07 ± 0.58 15.72 ± 2.36 5.54 ± 1.25 3.73 ± 0.85 20.66 ± 2.52 t − 1.486 0.447 1.567 2.279 2.200 9.649 P − 0.140 0.656 0.119 0.024 0.030 <0.001 与对照组比较，*P < 0.05。 表 4 盆底二维、三维超声对高龄产妇产后PFD的诊断效能比较（n）Table 4. Comparison of the diagnostic effcacy of two-dimensional and three-dimensional ultrasound of pelvic floor for PFD in older women （n）诊断技术 金标准 灵敏度（%） 特异度（%） 准确性（%） 阳性 阴性 合计 二维超声 阳性 19 11 30 70.37（19/27） 70.37（48/59） 77.91（67/86） 阴性 8 48 56 合计 27 59 86 三维超声 阳性 25 5 30 92.59（25/27） 91.53（54/59） 91.86（79/86） 阴性 2 54 56 合计 27 59 86 χ2 − − − − 4.418 2.603 6.525 P − − − − 0.036 0.107 0.011 2.4 盆底二维、三维超声诊断图像
适龄、高龄产妇患者盆底二维、三维超声诊断图像分别见图1、图2，其中A为静息状态下盆底正中矢状切面；B为Valsalva动作下盆底正中矢状切面；C为断层成像模式观察肛提肌连续性，层间距2.5 mm（中间3幅图依次显示耻骨联合开放、正在关闭、已关闭状态；D为肛提肌裂孔；E为断层成像模式观察肛门括约肌连续性，其中左侧为肛门内括约肌下缘，右侧为外括约肌上缘。
图 1 适龄产妇A：静息状态下盆底正中矢状切面；B：Valsalva动作下盆底正中矢状切面；C：肛提肌；D：肛提肌裂孔；E：肛门括约肌。Figure 1. Image of maternal age women
图 2 高龄产妇A：静息状态下盆底正中矢状切面；B：Valsalva动作下盆底正中矢状切面；C：肛提肌；D：肛提肌裂孔；E：肛门括约肌。Figure 2. Image of elderly parturient women3. 讨论
妊娠及分娩为引起女性盆底结构及功能损伤的主要因素，妊娠期间由于子宫体积增长，机体为适应妊娠会出现支持盆腔器官组织过度延伸，达到一定程度时将肌肉将可能丧失收缩恢复能力；分娩过程中阴道周围支持组织受到牵拉、扩张，甚或肌肉纤维断裂，继而导致盆底肌损伤。而进行产后盆底功能检测对于PFD早期诊断及预防有着重要意义。盆底超声为临床产后检查评估盆底结构主要技术，可观察盆底解剖结构形态学变化，继而评估其组织功能状态，为临床诊治及疗效评估提供客观依据。二维经阴道超声是评估的主要筛查工具，具有简单、可重复性、成像清晰等特征，可用于评估膀胱、膀胱颈、尿道等组织形态变化，辅助盆底功能及结构评估[7-9]。三维超声具有较高空间分辨率，可通过多平面成像及图像重建后处理，为临床评估盆底结构及功能提供可靠数据[10-12]。
本研究显示，观察组静息状态BNP、PUA、Valsalva动作BNP水平、BND水平明显高于对照组（P < 0.05）；而Valsalva动作PUA及URA水平对比差异无统计学意义（P > 0.05）。观察组Valsalva动作LHAP、LHLP、LHA水平均明显高于对照组（P < 0.05）；而静息状态LHAP、LHLP、LHA水平对比差异无统计学意义（P > 0.05）。说明相较于适龄产妇，高龄产妇产后早期更易出现肛提肌、膀胱等盆底组织功能及结构变化，适龄产妇变化不大。李宁等[13]研究报道，高龄产妇的Valsalva动作LHA水平高于适龄产妇，该结果与本研究结果一致。其原因在于相较于适龄产妇，高龄产妇的生理功能出现逐步下降，尤其是盆底肌群收缩反应时间延长，速度减慢，盆底肌肉、神经长时间处于压迫状态，出现盆底组织损伤概率较高；此外盆底肌肉组织中胶原、弹性蛋白含量降低，无法维持正常收缩功能，出现超声异常征象。盆底三维超声诊断灵敏度、准确性明显高于二维超声。此处已删减研究报道，孕妇的盆底肌肉不仅受到与分娩相关的机械损伤的影响，还受到怀孕期间生理变化的影响，继而使得提肌裂孔增大[14]。其原因在于虽然二维超声可以全面评估显示盆底结构，但该技术无法显示示肛提肌、盆膈裂孔等结构，而三维超声可通过多平面成像及图像重建后处理，更加准确、立体显示盆底结构组织及结构变化，该技术对于测量肛提肌裂孔各参数有着较高精确度，其中肛提肌裂孔可进一步反映肛提肌顺应性，继而提高临床诊断效能[15]。
综上所述，高龄产妇产后早期更易出现盆底功能及结构变化，相较于二维超声，盆底三维超声更有助于提高PFD诊断效能。
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图 1 HE及Masson染色结果（标尺：100 μm）
A：对照组肺组织HE染色；B：模型组肺组织HE染色；C：治疗组肺组织HE染色；A1：对照组肺组织Masson染色；B1：模型组肺组织Masson染色；C1：治疗组肺组织Masson染色；红色代表肌纤维，蓝色为胶原纤维。
Figure 1. Results of HE and Masson staining （ scale bar 100 μm ）
图 2 3组肺泡计数、肺泡间隔厚度、平均胶原纤维含量测量结果
A：3组放射状肺泡计数、肺泡间隔厚度；B：3组平均胶原纤维含量。
Figure 2. Measurement results of three groups of alveolar count，alveolar septal thickness，and average collagen fiber content
图 3 差异基因的火山图和热图
A：模型组与对照组差异基因的火山图，绿色代表下调基因，红色代表上调基因；B：差异基因在模型组与对照组中的热图，蓝色为对照组（CON），红色为模型组（MX）；C：治疗组与模型组差异基因的火山图；D：差异基因在治疗组与模型组中的热图，蓝色为模型组（MX），红色为治疗组（ZL）。
Figure 3. Volcanic map and heat map of differentially expressed genes
图 4 模型组与对照组差异基因的GO和KEGG情况
A：生物学过程（BP）；B：细胞组分（CC）；C：分子功能（MF）；D：KEGG富集结果。
Figure 4. GO and KEGG enrichment analysis of differential genes between the model group and the control group
图 5 粉色为钙离子相关基因、紫色区域代表免疫相关基因、绿色区域代表细胞外基质相关基因
Figure 5. Pink represents calcium-related genes，purple area represents immune-related genes，and green area represents extracellular matrix-related genes
图 6 THBS1在3组中的基因相对表达量情况
Figure 6. Relative gene expression levels of THBS1 among the three groups
图 8 THBS1在3组中的蛋白相对表达量情况
Figure 8. Relative protein expression levels of THBS1 among the three groups
图 10 TGF-β在3组中的蛋白相对表达量情况
Figure 10. Relative protein expression levels of TGF-β among the three groups
表 1 THBS1及内参的引物序列
Table 1. Primer sequences of THBS1 and internal reference
序列 名称 长度（bp） CATCCAAAGCATCTTCAC THBS1（pig）-F 77 GTGAGAAGGACATTGGTA THBS1（pig）-R GTTCCAGTATGATTCCAC GAPDH（pig）-F 56 GACTCCACAACATACGTA GAPDH（pig）-R 
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表 2 3组幼猪肺组织HE和Masson染色的测量结果（$\bar x \pm s$）
Table 2. Results of HE and Masson staining in lung tissue of three groups of piglets （$\bar x \pm s$）
参数 对照组 模型组 治疗组 F P 放射状肺泡计数（个） 9.24±2.56 6.53±2.08*** 7.88±3.34# 19.25 <0.001※ 肺泡壁厚度（μm） 5.81±2.78 12.04±3.10*** 9.44±2.63## 88.37 <0.001※ 平均胶原纤维量 0.02±0.01 0.18±0.02*** 0.13±0.02### 1834.28 <0.001※ 与对照组比较，***P < 0.001；与模型组比较，#P < 0.05，##P < 0.01，###P < 0.001；※P < 0.001。
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表 3 钙离子相关基因
Table 3. Calcium ion-related genes
基因名称 LogFC P 校正后P FBN2 1.976806186 5.53E-47 1.71E-44 RCVRN −1.699843423 7.65E-10 1.89E-08 TENM2 −2.236357095 2.22E-07 3.50E-06 CLSTN2 −1.324235347 0.01174761 0.04453978 TNFAIP6 1.061241719 0.000194661 0.001447986 ACTN2 1.683023897 5.87E-08 1.04E-06 DGKB −2.383519856 1.67E-07 2.70E-06 PON1 2.571409628 6.39E-45 1.74E-42 VWDE 3.543226537 0.000610734 0.003897322 TUBB4A 1.433642182 0.007848305 0.032416471 THBS1 −1.256610433 6.47E-86 4.87E-83 THBS4 −3.280684277 0.000147676 0.001142492 MYL4 −4.865802484 6.08E-21 4.71E-19 SCGN 3.150720501 0.00280126 0.014003149 EGFLAM −1.048561742 0.000400331 0.002700883 VSNL1 1.482799905 6.29E-09 1.33E-07 SYT10 −3.851326165 0.006301379 0.027241397 EFHD1 −1.084242649 1.75E-05 0.000178469 ANXA9 −1.111630395 2.47E-12 8.42E-11 ASTN2 −1.202867655 6.21E-05 0.000542506 LOC100522787 1.087678946 0.009057674 0.036435259 PPEF2 1.557961567 0.003120276 0.015314764 UMODL1 1.277593564 0.006711926 0.028675953
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表 5 免疫应答相关基因
Table 5. Genes related to immune response
基因名称 LogFC P 校正后P CD274 −1.171256037 2.60E-17 1.49E-15 SLA-DRB1 1.337022797 3.35E-38 6.62E-36 JUN −1.850222012 6.44E-158 3.44E-154 CXCL8 −1.561364145 2.25E-38 4.50E-36 OSM −1.138466837 1.79E-05 0.000182168 CXCL14 −1.021217549 2.23E-09 5.16E-08 CXCL2 −1.789799638 1.19E-37 2.27E-35 THBS1 −1.256610433 5.47E-86 4.87E-83 IL1A −1.242147858 2.09E-21 1.64E-19 CCL8 −1.300951991 4.26E-26 4.32E-24 CTSL −2.367477476 5.27E-05 0.000470351 IL1B −1.733900902 8.48E-19 5.37E-17 SLA-2 1.181319808 3.31E-28 3.87E-26
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表 4 细胞外基质相关基因
Table 4. Genes related to extracellular matrix
基因名称 LogFC P 校正后P ASAH2 −1.681188858 0.010202271 0.039995696 TNFAIP6 1.061241719 0.000194661 0.001447986 PON1 2.571409628 6.39E-45 1.74E-42 WFIKKN2 1.000982632 6.38E-10 1.60E-08 KLK5 3.198981333 0.011602127 0.04414435 CD1E 1.412361441 1.11E-07 1.86E-06 CXCL14 −1.021217549 2.23E-09 5.16E-08 THBS1 −1.256610433 5.47E-86 4.87E-83 AREG −2.393896705 1.88E-06 2.43E-05 CXCL2 −1.789799638 1.19E-37 2.27E-35 THBS4 −3.280684277 0.000147676 0.001142492 ADAMTS4 −1.020844602 9.62E-09 1.97E-07 CCL8 −1.300951991 4.26E-26 4.32E-24 CTSL −2.367477476 5.27E-05 0.000470351 FLRT1 3.028606366 0.001234795 0.007069199 OTOG 1.419656249 0.001549784 0.008528336 CCL2 −1.003309962 1.86E-06 2.40E-05 NDP 1.297577098 0.001027728 0.006056795 APOB −1.67037521 0.000425658 0.002851356 XDH 4.945718658 2.01E-70 1.11E-67 COL22A1 −3.012702444 0.001677249 0.009126374 BMP8A −1.131393016 1.58E-09 3.74E-08 DKK1 −1.3841467 2.94E-10 7.75E-09 IL1A −1.242147858 2.09E-21 1.64E-19 IL6 −1.828458638 6.10E-07 8.74E-06 SFRP2 −2.214720482 0.012270295 0.046204564 TG 2.389166701 0.000128918 0.001023048 CILP −1.030855274 2.52E-12 8.58E-11 IL1B −1.733900902 8.48E-19 5.37E-17 IFNE −1.147986534 0.002583079 0.013078573 UPTI 1.310012634 0.00120919 0.006944936 DPEP1 −1.726138591 0.002018831 0.01068401 LOC100521998 −4.045174213 0.006775299 0.028877436 ACPP 1.016963504 0.00127865 0.007273515 UMODL1 1.277593564 0.006711926 0.028675953 CXCL8 −1.561364145 2.25E-38 4.50E-36
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表 6 THBS1基因相对表达量（$\bar x \pm s$）
Table 6. Relative gene expression levels of THBS1 （$\bar x \pm s$）
基因 对照组 模型组 治疗组 F P THBS1 1.04±0.07 0.53±0.06*** 2.08±0.07### 755.75 P < 0.001※※※ 与对照组比较，***P < 0.001；与模型组比较，###P < 0.001；※※※P < 0.001。
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表 7 THBS1蛋白相对表达量（$\bar x \pm s$ ）
Table 7. Relative protein expression levels of THBS1 （$\bar x \pm s$）
归一值 对照组 模型组 治疗组 F P THBS1 1.00±0.08 0.62±0.08** 0.77±0.10# 15.02 0.005※※ 与对照组比较，**P < 0.01；与模型组比较，#P < 0.05；※※P < 0.01。
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表 8 TGF-β蛋白相对表达量（$\bar x \pm s$）
Table 8. Relative protein expression levels of TGF-β （$\bar x \pm s$）
归一值 对照组 模型组 治疗组 F P TGFβ归一值 1.00±0.24 0.55±0.14* 0.91±0.05# 6.07 0.036※ 与对照组比较，*P < 0.05；与模型组比较，#P < 0.05；※P < 0.05。
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