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7~12岁儿童屈光发育参数特点及对屈光状态的影响

茶健美 闫芳冰 张扬 喻璨

张黎, 王清岑, 周罗慧, 杨娟, 王红. 木犀草素通过调控内质网应激抑制平滑肌细胞的迁移[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(5): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220518
引用本文: 茶健美, 闫芳冰, 张扬, 喻璨. 7~12岁儿童屈光发育参数特点及对屈光状态的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2025, 46(1): 87-92. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20250111
Li ZHANG, Qingcen WANG, Luohui ZHOU, Juan YANG, Hong WANG. Luteolin Inhibits HASMCs Migration by Endoplasmic Reticulum Stress[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(5): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220518
Citation: Jianmei CHA, Fangbing YAN, Yang ZHANG, Can YU. Characteristics of Refractive Development Parameters and Their Effects on Refractive Status in Children Aged 7~12 Years[J]. Journal of Kunming Medical University, 2025, 46(1): 87-92. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20250111

7~12岁儿童屈光发育参数特点及对屈光状态的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20250111
基金项目: 云南省科技厅科技计划项目(202101AU070116)
详细信息
    作者简介:

    茶健美(1992~),女,云南大理人,医学硕士,住院医师,主要从事斜弱视及眼视光学、小儿眼病临床工作

    通讯作者:

    张扬,E-mail:adamzhangy@sina.cn

  • 中图分类号: R778

Characteristics of Refractive Development Parameters and Their Effects on Refractive Status in Children Aged 7~12 Years

  • 摘要:   目的  调查7~12岁小学生眼屈光发育参数情况,分析其与等效球镜度的关系并评价屈光参数在近视中的监测作用。  方法  选取云南省楚雄市北浦中学1463名7~12岁小学生,通过电脑验光仪获得球镜度数(DS)、柱镜度数(DC)、等效球镜度(SE),使用生物测量仪获得眼轴长度(AL)、角膜曲率(K1,K2)、中央前房深度(ACD)、中央角膜厚度(CCT)、晶状体厚度(LT)、玻璃体深度(VD),并计算角膜曲率半径(CR)、眼轴长度与角膜曲率半径比值(AL/CR)和晶状体度数(LP)。按年龄分为7~8岁组(n = 518)、9~10岁组(n = 547),11~12岁组(n = 398);按屈光状态分为近视组(n = 647)、正视组(n = 532)、远视组(n = 284),分析不同年龄段、不同屈光组之间屈光参数的特点和对屈光状态的影响。  结果  (1)SE、DS、LT、LP随年龄增长逐渐变小(P < 0.05);(2)AL、AL/CR、ACD、VD随年龄增长逐渐增大(P < 0.05);(3)K、CR、CCT随年龄增长无变化(P > 0.05);(4)在近视组和远视组中,AL均与SE呈负相关(rs = -0.617;rs = -0.318,P < 0.05),AL/CR均与SE呈负相关(rs = -0.737;rs = -0.406,P < 0.05),LP与SE均呈正相关(rs = 0.412;rs = 0.182,P < 0.05),CR与SE无相关性(P > 0.05)。  结论  7~12岁小学生的屈光发育参数AL、AL/CR、ACD、VD随年龄增长而增大,而SE、DS、LT、LP随年龄增长而变小,K、CR和CCT无显著变化。AL/CR和AL可以作为近视的监测指标,AL/CR较AL与SE的相关性更高。
  • 动脉粥样硬化(Atherosclerosis)为一种与炎症相关的动脉血管病理改变过程,是冠状动脉粥样硬化性心脏病、主动脉夹层、动脉瘤等严重心血管疾病的病变基础[1-2]。血管壁主要组成之一的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)在动脉粥样硬化的形成及发展起到重要的作用,血管内皮在受到炎症反应、机械性损伤、病毒感染等因素的刺激下,内皮表层组织受损,内皮下组织暴露在炎症等环境中,VSMCs应激性发生表型转变,由收缩表型向合成表型转化,致使处于稳定状态的VSMCs获得异常的增殖和迁移能力,迁移到血管内皮受损部位,参与动脉粥样硬化过程[3]。但影响VSMCs迁移、增殖的内在机制复杂,尚未完全清楚。因此,深入研究引起VSMCs迁移功能的影响因素及调控机制对防治动脉粥样硬化具有重要意义。

    木犀草素(luteolin,LUT)是一种天然存在于紫薇叶、蕃石榴叶等多种植物中的3,4,5,7-四羟基黄酮类化合物[4]。此前研究显示,在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤细胞中,木犀草素可抑制肿瘤细胞的增殖、诱导细胞凋亡,实现抗肿瘤特性[5-6]。但木犀草素是否参与调控人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muacle cells,HASMCs)的迁移功能,目前鲜有研究。

    内质网是一种具有合成加工蛋白质、调节钙平衡、合成运输类固醇和脂类等多种生物功能的重要细胞器[7-8]。内质网生物功能得以正常发挥的前提条件是内环境处于稳态。在应激损伤、炎症等情况下,内质网生物合成和信号转导等功能发生改变[9-10],大量未折叠或错误折叠的蛋白质在内质网堆积,称内质网应激(Endoplasmic reticulum stress)。是否木犀草素通过内质网应激途径影响VSMCs的迁移,目前尚无相关报道。本实验以HASMCs为研究对象,探讨木犀草素对HASMCs迁移的影响,及通过调控内质网应激水平抑制HASMCs迁移的内在机制。为木犀草素在防治动脉粥样硬化相关疾病方面提供新的重要基础理论依据。

    人主动脉平滑肌细胞(普诺赛生命科技有限公司);胰蛋白酶(北京索莱宝公司);胎牛血清(塞维尔生物科技有限公司);高糖培养基(Hyclone公司);木犀草素(北京索莱宝公司);4-苯基丁酸钠(4-PBA,北京索莱宝公司);二甲基亚砜(北京索莱宝公司);BIP抗体(塞维尔生物科技有限公司);CHOP抗体(武汉三鹰生物技术有限公司);RNA提取液(塞维尔生物科技有限公司);逆转录试剂盒(Thermo公司);引物(塞维尔生物科技有限公司);EvaGreen 2X q-PCR Master Mix试剂盒(abm公司)

    1.2.1   细胞培养

    用10%胎牛血清+1%青链霉素的高糖培养基在37 ℃、含5%CO2的培养箱中培养HASMCs,根据HASMCs的生长情况进行传代。

    1.2.2   细胞划痕实验检测HASMCs迁移情况

    Marker标记笔在六孔板背后均匀划横线(0.5~1 cm一条,横穿过孔,至少3条),取对数期生长良好的细胞按5×105个/孔接种于六孔板内,待细胞铺满孔底,用枪头垂直于六孔板背后的横线划痕,PBS清洗3次去除划下的细胞,加入无血清培养基,并加入不同浓度的木犀草素(0、6.25、12.5、25、50 μmol/L),同时设置BC和NC,每组3个复孔,放入37 ℃、含5% CO2的培养箱中培养。按12 h时间点取样拍照,观察细胞迁移情况,实验重复3次。

    1.2.3   Western blot检测BIP和CHOP蛋白的表达

    培养皿接种、培养HASMCs,并按照分组情况进行不同处理。12 h后收集各组细胞,PBS清洗3次,加入RIRA(150 µL)和PMSF(1 µL)预混液冰上裂解30 min,4 ℃、12000 r/min离心20 min,测上清液BCA法蛋白质浓度。取样品蛋白进行SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜上,封闭液封闭PVDF膜1.5 h,然后加入适量BIP和CHOP一抗4 ℃孵育过夜。第2天TBST液洗膜3次,每次10 min。然后加入相应二抗孵育1.5 h,TBST液洗膜后加入ECL显色液,暗室曝光收集图像,用Image J软件对条带进行灰度分析,重复3次。

    1.2.4   RT-qPCR检测BIP和CHOP基因的表达

    Trizol法提取各组HASMCs的总RNA并检测其浓度,根据试剂盒说明书依次进行逆转录合成cDNA,最后进行RT-PCR分析,反应参数为:95 ℃预变性 15min,95 ℃变性 30 s,60 ℃退火 1 min,40次循环,60 ℃延伸1 min。引物序列见表1。反应结束后基因的相对表达量用2-△△Ct计算,重复3次。

    表  1  BIP、CHOP、GAPDH引物序列
    Table  1.  BIP、CHOP、GAPDH primer sequence
    名称正向引物序列反向引物序列
    BIP -TCTACTATGAAGCCCGTCCAGA - -GCTTCATCTGGGTTTATGCCAC -
    CHOP -ATCTTCACCACTCTTGACCCTG- -ACTCTGTTTCCGTTTCCTGGTT-
    GAPDH -GAAGGTCGGAGTCAACGGATTT- -GCCATGGGTGGAATCATATTGG-
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    1.2.5   统计学处理

    SPSS17.0软件分析结果,计量资料以$ \bar x \pm s $表示,多组间比较采用单因素方差分析进行统计,2组间的比较采用t检验,P < 0.05表示差异具有统计学意义。

    用不同浓度的木犀草素(0、6.25、12.5、25、50 μmol/L)处理HASMCs,分别于12 h观察HASMCs划痕愈合情况(即细胞迁移情况)并进行拍照。图1结果表明:木犀草素抑制HASMCs的迁移,在实验浓度梯度范围内,随着木犀草素浓度的增加,各组HASMCs迁移的水平逐渐减弱(P < 0.05)。结果提示:木犀草素呈浓度依赖式抑制HASMCs的迁移。

    图  1  木犀草素对HASMCs迁移率的影响
    与0 μM组比较,*P < 0.05。
    Figure  1.  Effects of luteolin on migration rate of HASMCs

    蛋白BIP及CHOP与真核生物细胞内内质网应激水平密切相关,该两种蛋白的表达水平可反映细胞内内质网应激水平。为了探讨木犀草素是否对HASMCs细胞内内质网应激具有调控作用,使用内质网应激抑制剂4-PBA预处理HASMCs选择性抑制内质网应激信号通路,分别设置空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、25 μmol/L木犀草素组和木犀草素(25 μmol/L)+4-PBA(1 mmol/L)共处理组,处理12 h,提取细胞总蛋白,Western Blot检测内质网应激相关蛋白BIP和CHOP的表达水平。结果显示:与BC组和NC组相比较,木犀草素组可明显促进HASMCs内质网应激相关蛋白BIP和CHOP的表达(P < 0.05);RT-qPCR法检测BIP和CHOP的RNA表达水平,与免疫印迹检测结果一致,即木犀草素组BIP和CHOP的RNA表达增加(P < 0.01);同时与木犀草素组处理组比较,4-PBA预处理组明显减弱了BIP和CHOP蛋白和RNA的表达,表明4-PBA预处理HASMCs后木犀草诱导的内质网应激水平受到抑制。结果提示木犀草素促进了HASMCs细胞内内质网应激的发生,见图2

    图  2  木犀草素对HASMCs内质网应激的影响
    A:空白对照组、阴性对照组、木犀草素组和木犀草素+4-PBA共处理组处理12 h进行Western Blot实验后BIP、CHOP、β-actin蛋白显影情况;B:Western Blot检测木犀草素组内质网应激相关蛋白BIP表达水平;C:Western Blot检测木犀草素组内质网应激相关蛋白CHOP表达水平;D: RT-qPCR检测木犀草素组内质网应激相关基因BIP表达水平;E:RT-qPCR检测木犀草素组内质网应激相关基因CHOP表达水平 与空白对照组及阴性对照组比较,**P < 0.01;与木犀草+4-PBA处理组比较,*P < 0.05。
    Figure  2.  Effects of luteolin on endoplasmic reticulum stress in HASMCs

    为进一步探讨木犀草素是否通过细胞内质网应激抑制HASMCs的迁移,分别设置BC组、NC组、木犀草素组(25 μmol/L)、木犀草素(25 μmol/L)+4-PBA(1 mmol/L)共处理组,处理12 h后,细胞划痕实验结果显示(图3):(1)BC组和NC组HASMCs迁移无明显差异;(2)与BC组和NC组相比,木犀草素组HASMCs迁移能力下降(P < 0.01);(3)与木犀草素组相比,木犀草素+4-PBA共处理组HASMCs迁移能力增强(P < 0.05),表明4-PBA预处理后,木犀草素对HASMCs迁移的抑制作用减弱。结果提示,木犀草素对HASMCs迁移的抑制作用能被内质网应激抑制剂4-PBA减弱。综合上述实验结果,可以得出结论:木犀草素对HASMCs迁移的抑制作用是通过细胞内质网应激实现的。

    图  3  细胞划痕实验检测HASMCs迁移水平
    与对照组比较,**P < 0.01;与木犀草素组比较,*P < 0.05。
    Figure  3.  HASMCs migration was detected by cell scratch assay

    木犀草素是一种具有抗动脉粥样硬化生物活性的天然黄酮类化合物,广泛存在于多种植物中。Hsuan、Zhang等[11-12]研究发现木犀草素可以通过抑制NF-κB信号通路和NLRP3炎性体的激活来减轻炎症反应而发挥抗动脉粥样硬化作用。此外,木犀草素还可以通过维持细胞内氧化还原稳态、减少胆固醇吸收等减缓动脉粥样硬化的发生发展[13-14]。本实验首次以HASMCs为研究对象,探讨木犀草素对HASMCs迁移的影响及可能的机制。笔者选取不同浓度的木犀草素处理HASMCs,细胞划痕法观察它们对HASMCs迁移的影响。实验结果显示:木犀草素处理后的HASMCs的迁移率均降低,该结果提示木犀草素对HASMCs的迁移具有抑制作用。

    已有的研究表明,调控内质网应激水平,可影响结肠癌细胞、小细胞肺癌细胞等肿瘤细胞的增殖、迁移等功能[15-17]。中成药成分五味子素能够通过激活内质网应激移植胃癌细胞的增殖、迁移[18]。研究发现,木犀草素能上调内质网应激水平,引起NCI-H460肺癌细胞凋亡和非经典自噬,从而实现抑制肿瘤细胞的生长[19]。本研究通过实验探讨木犀草素是否通过内质网应激途径对HASMCs的迁移产生影响。通过实验证实,木犀草素处理HASMCs能促进内质网应激相关蛋白BIP、CHOP的蛋白及RNA表达,上调内质网应激水平,并抑制HASMCs迁移,而内质网应激抑制剂4-PBA预处理后不仅下调了内质网应激相关蛋白BIP、CHOP的蛋白及RNA表达,下调内质网应激水平,同时还降低了木犀草素对HASMCs迁移的抑制作用。因此,根据实验结果可以推测木犀草素抑制HASMCs的迁移可能是通过促进内质网应激反应产生的。

    综上所述,本研究显示木犀草素对HASMCs迁移有抑制作用,其内在机制与内质网应激相关。中成药是我国宝贵的医学知识宝库,云南省植物物种丰富,中成药数量储量巨大,质量优越,部分中成药富含的特有分子及蛋白,对细胞增殖、凋亡、自噬、迁移等生物学功能有明显调控作用,进而对肿瘤、感染性疾病、代谢异常疾病等发挥积极治疗作用,其中内在机制已被广泛关注和研究。笔者应该利用好中成药资源,充分发掘和应用中成药在动脉粥样硬化中的积极作用,阐明中成药成分对动脉粥样硬化影响的作用机制,为研发更多抗动脉粥样硬化药物提供有力的科学理论支持,进而为传统医学,特别是中成药治疗心血管疾病进行科学证明,为未来心血管疾病药物治疗突破提供新思路和新策略。笔者的研究结论,可为进一步研究和开发木犀草素相关防治动脉粥样硬化新药物的研发提供理论依据。但木犀草素是通过内质网应激的哪一条具体信号通路抑制HASMCs的迁移尚不清楚,在今后的研究工作中将继续深入及完善。

  • 表  1  各年龄段近视的患病率比较 [n(%)]

    Table  1.   Comparison of myopia prevalence by age group [n(%)]

    年龄段(岁) 总人数 近视人数 患病率(%) $ {\chi }^{2} $ P
    7~8 518 139 26.8 114.13 < 0.001*
    9~10 547 268 49.0
    11~12 398 243 61.1
      *P < 0.05。
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    表  2  不同年龄组屈光度和眼屈光参数的分布[P50P25P75)]

    Table  2.   Distribution of diopter and ocular biological parameters by age group at different ages[P50P25P75)]

    参数 7~8岁(n = 518) 9~10岁(n = 547) 11~12岁(n = 398) H P
    DS(D) 0.25(−0.25,0.50) −0.25(−1.25,0.25) −0.75(−2.00,0.25) 148.82 < 0.001*
    DC(D) 0(−0.50,0) 0(−0.50,0) 0(−0.50,0) 6.874 0.032*
    SE(D) 0(−0.50,0.50) −0.375(−1.375,0.25) −1.00(−2.25,0.00) 143.105 < 0.001*
    K(D) 43.25(42.25,44.26) 43.23(42.37,44.23) 43.28(42.28,44.27) 0.163 0.922
    AL(mm) 23.01(22.45,23.52) 23.43(22.87,24.05) 23.75(23.08,24.60) 169.651 < 0.001*
    CR(mm) 7.80(7.63,7.99) 7.81(7.63,7.97) 7.80(7.62,7.98) 0.163 0.922
    AL/CR 2.94(2.90,2.99) 3.00(2.94,3.07) 3.04(2.97,3.14) 252.016 < 0.001*
    LT(mm) 3.60(3.47,3.77) 3.48(3.36,3.62) 3.44(3.32,3.56) 143.49 < 0.001*
    ACD(mm) 2.87(2.70,3.05) 3.02(2.83,3.18) 3.08(2.89,3.24) 121.416 < 0.001*
    VD(mm) 15.95(15.44,16.52) 16.43(15.87,16.96) 16.78(16.08,17.51) 174.915 < 0.001*
    CCT(mm) 537.00(517,560.3) 542(522,562) 543(520,564) 3.186 0.203
    LP(D) 25.89(24.61,27.14) 24.51(23.47,25.87) 24.00(22.86,25.13) 208.466 < 0.001*
      *P < 0.05。
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    表  3  不同屈光状态组眼屈光参数的比较[P50P25P75)]

    Table  3.   Comparison of ocular biological parameters in different refractive state groups[P50P25P75)]

    指标 近视(n = 647) 正视(n = 532) 远视(n = 284) H P
    SE(D) −1.50(−2.50,−0.75) 0.00(−0.25,0.25) 0.63(0.50,0.75) 1260.078 < 0.001*
    K(D) 43.31(42.34,44.35) 43.25(42.33,44.18) 43.12(42.13,44.05) 3.214 0.200
    AL(mm) 23.88(23.20,24.61) 23.12(22.60,23.60) 22.98(22.45,23.40) 298.07 < 0.001*
    CR(mm)
    AL/CR
    LT(mm)
    ACD(mm)
    VD(mm)
    CCT(mm)
    LP(D)
    7.79(7.61,7.97)
    3.06(2.98,3.14)
    3.44(3.31,3.61)
    3.09(2.89,3.25)
    16.83(16.17,17.51)
    541(519,563)
    24.37(23.14,26.09)
    7.80(7.64,7.97)
    2.96(2.92,3.01)
    3.54(3.43,3.71)
    2.92(2.76,3.09)
    16.05(15.59,16.56)
    539(521,560)
    25.29(24.09,26.64)
    7.83(7.66,8.01)
    2.93(2.89,2.98)
    3.57(3.43.3.72)
    2.87(2.71,3.02)
    15.98(15.42,16.43)
    541(514,565)
    24.83(23.87,26.04)
    3.214
    444.08
    99.428
    149.686
    269.512
    0.383
    54.492
    0.200
    < 0.001*
    < 0.001*
    < 0.001*
    < 0.001*
    0.826
    < 0.001*
      *P < 0.05。
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    表  4  不同屈光发育参数与SE的相关性分析

    Table  4.   Correlation analysis between different refractive parameters and SE

    组别AL vs SEAL/CR vs SECR vs SELP vs SE
    rsPrsPrsPrsP
    近视组−0.617 < 0.001*−0.737 < 0.001*0.0440.2590.412 < 0.001*
    正视组−0.0560.198−0.1340.002*0.0210.624−0.0690.112
    远视组−0.318 < 0.001*−0.406 < 0.001*0.0080.8880.1820.002*
      *P < 0.05。
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2024-08-05
  • 网络出版日期:  2024-12-25
  • 刊出日期:  2025-01-17

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