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醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用的实验研究

陈思宇 付帅 吴勇

陈思宇, 付帅, 吴勇. 醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用的实验研究[J]. 昆明医科大学学报, 2020, 41(11): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201101
引用本文: 陈思宇, 付帅, 吴勇. 醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用的实验研究[J]. 昆明医科大学学报, 2020, 41(11): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201101
Si-yu CHEN, Shuai FU, Yong WU. Effect of Gossypol Acetate Acid on Invasion of Human Tongue Squamous Cell Carcinoma Cal-27 Cells in vitro[J]. Journal of Kunming Medical University, 2020, 41(11): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201101
Citation: Si-yu CHEN, Shuai FU, Yong WU. Effect of Gossypol Acetate Acid on Invasion of Human Tongue Squamous Cell Carcinoma Cal-27 Cells in vitro[J]. Journal of Kunming Medical University, 2020, 41(11): 12-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201101

醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用的实验研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201101
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(81160326);云南省科技计划基金资助项目(2017EF467-088)
详细信息
    作者简介:

    陈思宇(1992~),女,云南昆明人,医学硕士,住院医师,主要从事口腔颌面部肿瘤研究工作

    通讯作者:

    吴勇,E-mail:625583665@qq.com

  • 中图分类号: R739.8

Effect of Gossypol Acetate Acid on Invasion of Human Tongue Squamous Cell Carcinoma Cal-27 Cells in vitro

  • 摘要:   目的  研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对体外培养的人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭影响及其作用机制。  方法  制备0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L的GAA作用于人舌鳞癌Cal-27 细胞,通过Transwell实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27 细胞侵袭能力的影响;通过qRT-PCR及Western blot实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27 细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA及蛋白的表达变化。  结果  Transwell实验显示:GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞细胞侵袭产生抑制作用,实验组和对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05);qRT-PCR实验及Western blot显示,实验组人舌鳞癌Cal-27细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  GAA能抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的侵袭性,并降低人舌鳞癌Cal-27细胞MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白表达水平,这可能是GAA抑制肿瘤侵袭作用的机制之一。
  • 图  1  各组细胞Transwell迁移实验(×100)

    Figure  1.  The light microscope photos of the migration of Cal-27 cell(×100)

    图  2  各组细胞迁移个数折线分析图

    Figure  2.  line chart analyze of the migration of Cal-27 cell

    图  3  各组细胞Transwell侵袭实验(×100)

    Figure  3.  The light microscope photos of the invasion of Cal-27 cell(×100)

    图  4  各组细胞侵袭个数折线分析图

    Figure  4.  Line chart analyze of the invasion of Cal-27 cell

    图  5  GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞MMP-2、MMP-9 蛋白表达水平的影响

    Figure  5.  The protein expression level of MMP-2,MMP-9 in Cal- 27 cells by GAA

    表  1  MMP-2、MMP-9、GAPDH的引物序列

    Table  1.   Primer sequences of MMP-2,MMP-9 and GAPDH

    基因引物序列大小(bp)
    MMP-2(F) 5′-GAACCAGATCACATACAGGATC-3′
    MMP-2(R) 5′-ATCCACTGTCTCTGGGTCCA-3′ 66 bp
    MMP-9(F) 5′-ACCTCAAGTGGCACCACCAC-3′
    MMP-9(R) 5′-GCGGCAAGTCTTCCGAGTAG-3′ 63 bp
    GAPDH(F) 5′-GCCATCAATGACCCCTTCAT-3′
    GAPDH(R) 5′-TTGGAACATGTAAACCATGT -3′ 51 bp
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    表  2  GAA对Cal-27细胞Transwell迁移个数对比(个)[($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 3)]

    Table  2.   Comparison of the migration of Cal-27 cell in different concentration of GAA(each)[($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 3)]

    组别0 h6 h12 h18 h24 h
    对照组 14.00 ± 3.61 15.00 ± 3.00 43.00 ± 2.65▽△ 75.33 ± 3.51▽△☆ 100.33 ± 4.93▽△☆◇
    2.5 μmol/L组 5.00 ± 1.00 13.00 ± 2.65▲▽ 26.33 ± 3.51▲▽△ 43.00 ± 2.00▲▽△☆ 64.00 ± 3.00▲▽△☆◇
    5 μmol/L组 4.33 ± 2.08▲★ 10.33 ± 2.52▲★▽ 24.67 ± 1.53▲★▽△ 38.67 ± 2.52▲★▽△☆ 54.67 ± 3.51▲★▽△☆◇
    10 μmol/L组 2.33 ± 1.15▲★■ 7.00 ± 2.00▲★■▽ 8.67 ± 2.08▲★■▽△ 12.67 ± 2.08▲★■▽△☆ 21.33 ± 3.51▲★■▽△☆◇
      相同作用时间与对照组比较,P < 0.05;相同作用时间与2.5 μmol/L比较,P < 0.05;相同作用时间与5 μmol/L比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与0 h比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与6 h比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与12 h比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与18 h比较,P < 0.05。
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    表  3  GAA对Cal-27细胞Transwell侵袭个数对比(个)[($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$),n = 3]

    Table  3.   Comparison of the invasion of Cal-27 cell in different concentration of GAA(each) [($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$),n = 3]

    组别0 h6 h12 h18 h24 h
    对照组 12.00 ± 2.65 13.33 ± 3.06 39.00 ± 1.00▽△ 75.67 ± 5.69▽△☆ 100.67 ± 7.77▽△☆◇
    2.5 μmol/L组 6.00 ± 2.00 12.33 ± 3.51▲▽ 28.33 ± 4.51▲▽△ 40.33 ± 1.53▲▽△☆ 62.67 ± 5.69▲▽△☆◇
    5 μmol/L组 5.33 ± 3.51▲★ 9.33 ± 4.73▲★▽ 24.33 ± 3.51▲★▽△ 32.33 ± 3.51▲★▽△☆ 52.33 ± 6.51▲★▽△☆◇
    10 μmol/L组 3.33 ± 1.53▲★■ 8.67 ± 3.06▲★■▽ 9.00 ± 1.00▲★■▽△ 10.67 ± 2.08▲★■▽△☆ 19.67 ± 1.53▲★■▽△☆◇
      相同作用时间与对照组比较,P < 0.05;相同作用时间与2.5 μmol/L比较,P < 0.05;相同作用时间与5 μmol/L比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与0 h比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与6 h比较,P < 0.05;相同GAA浓度作用与12 h比较,p < 0.05;相同GAA浓度作用与18 h比较,P < 0.05。
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    表  4  GAA对Cal-27细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA表达的影响($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 9)

    Table  4.   The mRNA expression level of MMP-2,MMP-9 in Cal- 27 cells by GAA($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 9)

    组别MMP-2MMP-9
    对照组 1.02 ± 0.24 1.01 ± 0.15
    2.5 μmol/L组 0.25 ± 0.04 0.83 ± 0.10
    5 μmol/L组 0.16 ± 0.06 0.69 ± 0.03▲★
    10 μmol/L组 0.10 ± 0.03▲★ 0.46 ± 0.18▲★■
      与对照组比较,P < 0.05;与2.5 μmol/L比较,P < 0.05;与5 μmol/L比较,P < 0.05。
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    表  5  不同浓度GAA作用于人舌鳞癌Cal-27细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达相对值(MMP-2、MMP-9/GAPDH)($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 3)

    Table  5.   The protein expression level of MMP-2、MMP-9 in cal- 27 cells by GAA(MMP-2、MMP-9/GAPDH) ($\bar{{{x}}}\pm {{s}}$,n = 3)

    组别MMP2/GAPDHMMP9/GAPDH
    对照组 1.20 ± 0.02 1.20 ± 0.01
    2.5 μmol/L组 0.98 ± 0.00 0.91 ± 0.01
    5 μmol/L组 0.76 ± 0.00▲★ 0.75 ± 0.00▲★
    10 μmol/L组 0.61 ± 0.01▲★■ 0.53 ± 0.00▲★■
      与对照组比较,P < 0.05;与2.5 μmol/L比较,P < 0.05;与5 μmol/L比较,P < 0.05。
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-08-08
  • 网络出版日期:  2020-12-03
  • 刊出日期:  2020-11-25

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