留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

王惠 曾文珺 张海萍 郭瑞威

王惠, 曾文珺, 张海萍, 郭瑞威. 钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
引用本文: 王惠, 曾文珺, 张海萍, 郭瑞威. 钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
Hui WANG, Wenjun ZENG, Haiping ZHANG, Ruiwei GUO. Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
Citation: Hui WANG, Wenjun ZENG, Haiping ZHANG, Ruiwei GUO. Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423

钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
基金项目: 云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项重点基金资助项目(202102AY070001-030);联勤保障部队中坚人才培养基金资助项目(20220105)
详细信息
    作者简介:

    王惠(1989~),女,四川南充人,医学硕士,主治医师,主要从事血管平滑肌细胞的增殖机制研究工作

    通讯作者:

    郭瑞威,E-mail:grw771210@163.com

  • 中图分类号: R54

Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation

  • 摘要:   目的  探讨钙库操纵型钙通道Orai3对冠状动脉血管平滑肌细胞(CASMC)增殖的影响。  方法  培养原代冠状动脉血管平滑肌细胞(coronary vascular smooth muscle cells,CASMC),对CASMC中Orai3分子实施干扰和过表达干预,QPCR实验和Western Blot检测Orai3表达量,CCK8实验和细胞计数检测CASMC增殖情况。  结果  CCK8实验和细胞计数实验显示无血清组较10%血清组CASMC增殖速率下降(P < 0.05),CASMC中Orai3表达量下降(P < 0.05)。干扰Orai3后与对照组相比CASMC增殖速率下降(P < 0.05),过表达Orai3后与对照组相比细胞增殖速率升高(P < 0.05)。  结论  钙库操纵型钙通道组成分子Orai3在CASMC增殖中发挥重要作用。
  • 图  1  无血清组及10%血清组CASMC细胞增殖情况

    A:CCK8实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC增殖情况;B:细胞计数实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较,**P < 0.01。

    Figure  1.  The coronary vessel smooth muscle cell proliferation difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

    图  2  无血清组及10%血清组Orai3表达量情况

    A:血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图;B:Western Blot实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC增殖情况;C:QPCR实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。

    Figure  2.  Orai3 expression difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

    图  3  干扰Orai3后CASMC细胞增殖情况

    A :干扰Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图。B:干扰Orai3后Western Blot实验检测干扰效率;C:干扰Orai3后QPCR实验检测干扰效率;D:干扰Orai3后CCK8实验检测CASMC增殖情况;E:干扰Orai3后细胞计数实验检测CASMC增殖情况;siOrai3-NC:Orai3干扰阴性对照组;siOrai3:Orai3干扰组。与FBS+比较,**P < 0.01。

    Figure  3.  Orai3 interfering and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation.

    图  4  过表达Orai3后CASMC细胞增殖情况

    A:过表达Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图;B:过表达Orai3后Western Blot实验检测干扰效率;C:过表达Orai3后QPCR实验检测干扰效率;D:过表达Orai3后CCK8实验检测CASMC细胞增殖情况;E:过表达Orai3后细胞计数实验检测CASMC细胞增殖情况;oe-NC:Orai3干扰阴性对照组即空白载体;oe-Orai3:Orai3干扰组。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。

    Figure  4.  Orai2 over-expression and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation

    表  1  CCK8检测CASMC增殖[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  1.   Growth curve of CASMC cells by CCK8 assay [($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)FBS+FBS−tP
    0 0.0634 ± 0.0291 0.0804 ± 0.0310 0.8947 0.3971
    24 0.3662 ± 0.1092 0.2629 ± 0.0645 1.8200 0.1062
    48 1.0450 ± 0.0942 0.4709 ± 0.0642 11.2700 < 0.0001**
    72 1.6350 ± 0.1015 0.5659 ± 0.0946 17.2300 < 0.0001**
    96 1.9710 ± 0.1611 0.5015 ± 0.0905 17.7800 < 0.0001**
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+组比较,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  2  CASMC细胞计数(1×104)[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  2.   Growth curve of CASMC cells by cell counting assay (1×104)[($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)FBS+FBS−tP
    0 1.3400 ± 0.3209 1.6000 ± 0.4183 1.1030 0.3022
    24 4.9000 ± 0.7416 3.3500 ± 0.4183 4.0700 0.0036**
    48 11.7000 ± 0.9747 4.4500 ± 0.9083 12.1700 < 0.0001**
    72 13.5500 ± 1.0950 4.7000 ± 0.8909 14.0100 < 0.0001**
    96 14.3500 ± 0.9618 3.5500 ± 1.0370 17.0800 < 0.0001 **
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。 与FBS+比较,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  3  CASMC的Orai3相对表达量[($\bar x \pm s $),n = 3]

    Table  3.   Orai3 expression of CASMC cells [($\bar x \pm s $),n = 3]

    Orai3FBS+FBS-tP
    蛋白表达量1.0270 ± 0.29250.2036 ± 0.14347.0090 0.0060**
    RNA表达量1.0150 ± 0.20650.1498 ± 0.01677.54500.0171*
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  4  CCK8检测siOrai3干扰后CASMC增殖情况[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  4.   Growth curve of siOrai3 CASMC cells by CCK8 assay[ ($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)siOrai3-NCsiOrai3tP
    24 0.0801 ± 0.0288 0.0985 ± 0.0418 0.8098 0.4415
    48 0.4464 ± 0.0603 0.1966 ± 0.0130 9.0590 < 0.0001**
    72 0.8322 ± 0.1142 0.6127 ± 0.0842 3.4590 0.0086**
    96 1.4200 ± 0.0547 0.6499 ± 0.1201 13.0400 0.0034**
      siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组,siOrai3为转染siOrai3实验组。与siOrai3-NC比较,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  5  siOrai3干扰后CASMC细胞计数(1×104)($\bar x \pm s $n = 3)

    Table  5.   Growth curve of siOrai3 CASMC cells by cell counting assay (1×104)($\bar x \pm s $n = 3)

    时间(h)siOrai3-NCsiOrai3tP
    24 2.0830 ± 1.0100 1.2500 ± 0.2500 1.3870 0.2378
    48 8.1670 ± 1.2580 4.4170 ± 0.6292 4.6170 0.0099 **
    72 12.0000 ± 1.0000 7.0000 ± 0.5000 7.7460 0.0015**
    96 14.0000 ± 1.0000 7.8330 ± 0.7638 8.4880 0.0011**
      siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组,siOrai3为转染siOrai3实验组。与NC组比较,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  6  CCK8检测oe-Orai3转染后CASMC增殖情况[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  6.   Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by CCK8 assay [($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)oe-NCoe-Orai3tP
    24 0.0621 ± 0.0143 0.0640 ± 0.0062 0.2802 0.7865
    48 0.4469 ± 0.0564 1.1080 ± 0.0712 16.2700 < 0.0001**
    72 0.8993 ± 0.0979 1.8710 ± 0.1437 12.4900 < 0.0001 **
    96 1.4570 ± 0.0842 2.0770 ± 0.0820 11.7800 < 0.0001**
      oe-NC为转染阴性对照组,Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体;oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组,oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV

    表  7  oe-Orai3转染后CASMC细胞计数(1×104)[($\bar x \pm s $),n = 3]

    Table  7.   Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by cell counting assay[ ($\bar x \pm s $),n = 3]

    时间(h)oe-NCoe-Orai3tP
    24 2.5000 ± 0.8660 5.9170 ± 2.0050 2.7090 0.0536
    48 10.0800 ± 1.8430 24.1700 ± 2.0210 8.9190 0.0009 **
    72 17.0800 ± 1.7740 26.6700 ± 2.0820 6.0690 0.0037**
    96 19.7500 ± 3.4370 30.1700 ± 3.2150 3.8340 0.0186*
      oe-NC为转染阴性对照组,Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体;oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组,oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
    下载: 导出CSV
  • [1] Bennett M R,Sinha S,Owens G K. Vascular smooth muscle cells in atherosclerosis[J]. Circ Res,2016,118(4):692-702. doi: 10.1161/CIRCRESAHA.115.306361
    [2] Guo R W,Wang H,Gao P,et al. An essential role for stromal interaction molecule 1 in neointima formation following arterial injury[J]. Cardiovasc Res,2009,81(4):660-668. doi: 10.1093/cvr/cvn338
    [3] Mammadova-Bach E,Nagy M,Heemskerk J W M,et al. Store-operated calcium entry in thrombosis and thrombo-inflammation[J]. Cell Calcium,2019,77:39-48. doi: 10.1016/j.ceca.2018.11.005
    [4] Fahrner M, Schindl R, Romanin C. Studies of structure-function and subunit composition of Orai/STIM channel[M]. Calcium Entry Channels in Non-Excitable Cells. Boca Raton (FL): CRC Press/Taylor & Francis, 2018: 25-50.
    [5] Tanwar J,Motiani R K. Role of SOCE architects STIM and Orai proteins in cell death[J]. Cell Calcium,2018,69:19-27. doi: 10.1016/j.ceca.2017.06.002
    [6] Sanchez-Collado J,Jardin I,López J J,et al. Role of Orai3 in the pathophysiology of cancer[J]. Int J Mol Sci,2021,22(21):11426. doi: 10.3390/ijms222111426
    [7] Zimmermann O,Zwaka T P,Marx N,et al. Serum starvation and growth factor receptor expression in vascular smooth muscle cells[J]. J Vasc Res,2006,43(2):157-165. doi: 10.1159/000090945
    [8] Codeluppi S,Gregory E N,Kjell J,et al. Influence of rat substrain and growth conditions on the characteristics of primary cultures of adult rat spinal cord astrocytes[J]. J Neurosci Methods,2011,197(1):118-127. doi: 10.1016/j.jneumeth.2011.02.011
    [9] Pinto M C,Kihara A H,Goulart V A,et al. Calcium signaling and cell proliferation[J]. Cellular signalling,2015,27(11):2139-2149. doi: 10.1016/j.cellsig.2015.08.006
    [10] Shawer H,Norman K,Cheng C W,et al. ORAI1 Ca2+ channel as a therapeutic target in pathological vascular remodelling[J]. Front Cell Dev Biol,2021,9:653812. doi: 10.3389/fcell.2021.653812
    [11] Sanchez-Collado J,Lopez J J,Cantonero C,et al. Orai2 modulates Store-Operated Ca2+ entry and cell cycle progression in breast cancer cells[J]. Cancers,2021,14(1):114. doi: 10.3390/cancers14010114
    [12] Borowiec A S,Bidaux G,Tacine R,et al. Are Orail and Orai3 channels more important than calcium influx for cell proliferation?[J]. Biochim Biophys Acta,2014,1843(2):464-472. doi: 10.1016/j.bbamcr.2013.11.023
    [13] Dubois C,Vanden Abeele F,Lehen'kyi V,et al. Remodeling of channel-forming ORAI proteins determines an oncogenic switch in prostate cance[J]. Cancer Cell,2014,26(1):19-32. doi: 10.1016/j.ccr.2014.04.025
    [14] Dubois C,Kondratska K,Kondratskyi A,et al. ORAI3 silencing alters cell proliferation and promotes mitotic catastrophe and apoptosis in pancreatic adenocarcinoma[J]. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res,2021,1868(7):119023. doi: 10.1016/j.bbamcr.2021.119023
  • [1] 邓勇军, 陈倩, 邹建彬, 宫政, 刘焕鹏.  ZIC1基因过表达激活P53信号通路抑制胸膜间皮瘤细胞增殖, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240405
    [2] 张莉, 赵熙, 赵华祥, 熊宝, 徐洁, 汤广平, 喻卓, 陈鹏.  卫茅碱对人血管内皮细胞及血管平滑肌细胞增殖、迁移及细胞周期的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230723
    [3] 李婷, 郭维华.  糖酵解重编程在口腔鳞状细胞癌中的研究进展, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230611
    [4] 梁彩红, 孟明耀, 李欣欣, 熊晶晶, 李檬, 刘梅, 侯宗柳, 黄永坤.  肠道菌群代谢物脱氧胆酸对人脐带间充质干细胞hUC-MSCs增殖及细胞周期的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230402
    [5] 马振桓, 李震, 周香林, 李国剑, 杨国凯, 万嘉, 杜玲娟, 杨镛.  碘-125粒子调控微小RNA-193b-5p抑制胃癌的增殖和侵袭, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220120
    [6] 王晓寒, 牟善茂, 郝翠芳, 任琳琳, 王敏, 赵彤.  富血小板血浆促进人子宫内膜间充质干细胞(EnMSCs)增殖的机制, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220126
    [7] 袁伟, 孟明耀, 李欣欣, 熊晶晶, 李檬, 曹佳, 刘梅, 侯宗柳, 黄永坤.  内毒素的量效和时效对人脐带间充质干细胞增殖的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220928
    [8] 钱石兵, 孟明耀, 于鸿滨, 段开文, 李昌全, 夏志刚.  三七总皂苷对人根尖牙乳头干细胞增殖的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221018
    [9] 全宇航, 王忠慧, 李珊珊, 刘光顺.  七氟烷抑制宣威肺癌XWLC-05细胞生物学行为, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20211202
    [10] 殷顺会, 周建忠, 李自良.  Tiger17促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210823
    [11] 罗丹, 杨承纲.  沉默Bin1基因对膀胱尿路上皮癌T24细胞生物学功能的影响, 昆明医科大学学报.
    [12] 冯毅, 蔡冰, 王峰, 王茂德.  MSH5抑制对恶性胶质瘤细胞表型的影响, 昆明医科大学学报.
    [13] 李珊珊, 全宇航, 龚玲俐, 杨会, 浦劲宏, 王忠慧.  七氟烷对人骨肉瘤Saos2细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响, 昆明医科大学学报.
    [14] 谢环, 田洁, 黄娅芬.  shRNA Twist基因对人绒毛膜癌细胞JEG-3增殖、侵袭和凋亡的影响, 昆明医科大学学报.
    [15] 高红强, 刘静, 李志强, 王海雷, 陈刚, 李立.  MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用, 昆明医科大学学报.
    [16] 胡正雄.  TGF-β2和geneX对BrdU标记骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的作用, 昆明医科大学学报.
    [17] 袁勇.  适度低氧微环境对体外培养脑胶质瘤干细胞生长的影响, 昆明医科大学学报.
    [18] 张健.  盐霉素对人骨肉瘤MG-63细胞体外增殖和凋亡的影响, 昆明医科大学学报.
    [19] 赵瑜敏.  牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响, 昆明医科大学学报.
    [20] TRB3在同型半胱氨酸抑制内皮细胞增殖中的作用研究, 昆明医科大学学报.
  • 加载中
图(4) / 表(7)
计量
  • 文章访问数:  3400
  • HTML全文浏览量:  1947
  • PDF下载量:  11
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2023-01-30
  • 网络出版日期:  2023-04-18
  • 刊出日期:  2023-04-25

目录

    /

    返回文章
    返回