Effect of Norathyriol on the Epithelial-mesenchymal Transition of HK-2 Cells Induced by TGF-β1
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摘要:
目的 研究芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT的影响。 方法 MTT法检测各浓度芒果苷元对HK-2细胞活力的影响；用TGF-β1诱导HK-2细胞成EMT模型，并给以芒果苷元干预，在TGF-β1诱导24 h时显微镜下拍照记录细胞形态变化，划痕实验法检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测纤连蛋白（fibronectin，FN）和Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ，Col Ⅰ）蛋白表达水平。 结果 （1）芒果苷元（10-9～10-5 mol/L）浓度下HK-2细胞活力均无明显变化（P > 0.05）；（2）与正常组相比，模型组细胞形态变长变梭，迁移和侵袭能力显著增强（ P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著上调（ P < 0.05，0.01）；与模型组相比，芒果苷元组细胞能维持原来的鹅卵石形，迁移和侵袭能力显著下降（ P < 0.05，0.01），FN和ColⅠ蛋白表达水平显著下调（ P < 0.05）。 结论 芒果苷元能抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞迁移和侵袭，阻止细胞形态的改变，下调细胞外基质成分FN和ColⅠ的蛋白表达，从而抑制EMT的发展。 Abstract:Objective To study the effects of norathyriol on epithelial-mesenchymal transition of HK-2 cells induced by TGF-β1. Methods MTT assay was used to detect the effect of norathyriol on HK-2 cell viability. The HK-2 cells were divided into normal group, model group, norathyriol （10-8, 10-7, 10-6 mol·L-1） groups and positive control （benzbromarone, 10-7 mol/L） group. The norathyriol and benzbromarone were incubated for 4 h before HK-2 cells were treated by TGF-β1 （10 ng/mL） to induce EMT. Then, the HK-2 cells were cultured for another 24 h or 48 h. Scratch assay was used to detect the migration motility of HK-2 cells. Transwell invasion assay was used to detect invasion ability of HK-2 cells. The proteins expression of fibronectin （FN） and collagen type Ⅰ （ColⅠ） were detected by western blot. Results （1） The norathyriol （10-9-10-5 mol/L）has no effects on the HK-2 cell viability, compared with the normal group （P > 0.05）. （2） Compared with the normal group, the cells morphology of the model group changed from the original cobblestone shape to a long fusiform shape, the migration rate and the invasive ability of the model group was significantly increased （ P < 0.01）. The protein expression of Col and FN in the model group was significantly increased. Compared with the model group, the cells morphology of norathyriol （10 -8, 10-7, 10-6 mol/L） and benzbromarone （10-7 mol/L） groups maintain thecobblestone shape partly, the migration rate （10-8, 10-7, 10-6 mol/L） and the invasive ability （10-6 mol/L） of norathyriol were significantly decreased （P < 0.01）; The protein expression of Col and FN were significantly down-regulated in the norathyriol （10 -6 mol/L） group and the benzbromarone group （P < 0.05, 0.01）. Conclusion Norathyriol can inhibit the migration and invasion of HK-2 cells induced by TGF-β1 and down-regulate the protein expression of fibronectin （FN） and collagen type Ⅰ （ColⅠ）. -
Key words:
- Norathyriol /
- TGF-β1 /
- HK-2 cell /
- Migration /
- Invasion /
- Epithelial-mesenchymal transition （EMT）
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近年来，许多研究发现天然资源中许多活性物质具有防癌、抗癌作用，并且其中许多物质都具有靶向性强且毒副作用小等优点[1]，所以在研制抗癌药物的过程中，具有抗癌作用的天然物质尤为重要 [2]。
松萝胺为本课题组从松萝中提取的具有抗癌活性的化合物[3]。前期研究表明，松萝Usneae Filum提取物（antimutagen-He AMH）[4-9]中存在多种抗癌物质，具有抑制动物体内肿瘤生长和体外人癌细胞增殖作用[10-16]。其中松萝胺又名奥科呋喃[4]，其分子式为C18H17NO6，相对分子质量为343，是本课题组首次[17]从松萝中提取的具有明显抗癌作用的新物质[18-19]。经研究发现，松萝胺抗癌作用显著强于顺铂，并且优于紫杉醇[20-22]。然而对松萝胺的毒理学安全性评价至今没有文献报道，本文通过急性毒性试验、各项遗传毒性试验及30 d喂养试验对该化合物的毒理学安全性进行评价，为进一步评价该化合物的药用安全性，及其在临床上的应用提供理论参考。
1. 材料与方法
1.1 药物
松萝胺，由本课题组实验室合成，化学结构[3]见图1。通过高效液相色谱检测，纯度大于97%。
1.2 细胞
人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）（由昆明医科大学公共卫生学院实验室提供）
1.3 动物
SPF级昆明种小鼠，自由摄水，室温（24±2）℃，湿度 45%～65%，由昆明医科大学实验动物学部提供，合格证号SCXK（滇）K2020-0006。
1.4 仪器设备
希森美康-800生化分析仪；迪迈-D7～CRP五分类血液分析仪；旋转蒸发仪（上海科捷分析仪器有限公司）超净工作台（上海博迅实业有限公司）；二氧化碳培养箱、高速低温离心机（Thermo公司）；倒置显微镜（Olympas公司）；Spectrum 酶标仪（Thermo Fisher公司）；超高速流式细胞仪（德国Partec GmbH 公司）
1.5 方法
1.5.1 急性毒性试验
依据《药物单次给药毒性研究技术指导原则》将雌雄各半共20只小鼠分笼饲养。试验用15000 mg/kg作为最大耐受剂量。给药前禁食不禁水以0.3 mL/10 g灌胃，24 h内灌胃2次间隔6 h。连续观察14 d，观察并记录动物死亡或中毒的情况。
1.5.2 体内染色体畸变试验
取50只小鼠随机分成5组，雌雄各半分笼饲养。药物剂量依据《药物遗传毒性研究技术指导原则》剂量选择分别为2 000、4 000、8 000 mg/kg，0 mg/kg组用相同体积的0.5% CMC-Na灌胃给药，连续给药5 d，在第5天对阳性对照组进行40 mg/kg环磷酰胺（CP）腹腔注射。在最后一次给药后20 h，对50只小鼠进行秋水仙素处理（腹腔注射4 mg/kg）。4 h后处死动物，取双侧股骨，去除两端并用1 mL注射器吸取生理盐水冲洗骨髓腔至淡红色，离心后进行低渗、固定、冰片滴片、染色。每只动物计数50个中期分裂相细胞，并计算畸形率。
1.5.3 BEAS-2B细胞染色体畸变试验
在25 cm2的培养瓶中接种BEAS-2B细胞，加入完全培养液培养。当培养瓶内BEAS-2B细胞长至80%时，弃培养液，培养瓶中加入含不同浓度依据《药物遗传毒性研究技术指导原则》中最高浓度产生的细胞毒性应约为50%（0、25、50、100 μmol/L）的松萝胺培养液，阳性对照使用0.5 μg/mL的丝裂霉素C（MMC）干预6 h。处理结束后，吸走瓶中培养液，用PBS溶液冲洗3遍，加入培养液培养24 h收获细胞。在收获细胞前4 h给予1 μg/mL秋水仙素。收获细胞后进行低渗、固定、冰片滴片、染色，并计算畸形率。前期试验证明松萝胺会影响细胞的分裂，故每组只能以50个作为计数标准。
1.5.4 骨髓微核试验
雌雄各半共60只小鼠随机分成6组分笼饲养。为短期试验结果更全面，故做4组浓度，各组剂量分别为15000、8000、4000、2000 mg/kg。0 mg/kg组用同等体积的0.5% CMC-Na灌胃给药，以环磷酰胺（40 mg/kg）作为阳性对照组。30 h内灌胃2次，2次给药间隔24 h，染毒完成后6 h处死动物，分离出胸骨并取骨髓进行制片。每只小鼠观察1000个嗜多染红细胞（PCE），计算微核率。
1.5.5 精子畸形试验
取30只雄性小鼠随机分成6组，为短期试验结果更全面，故做4组浓度，各组剂量分别为15000、8000、4000、2000 mg/kg。0 mg/kg组用同等体积的0.5%CMC-Na灌胃给药，以环磷酰胺（40 mg/kg）作为阳性对照组。不间断染毒5 d，染毒结束后观察30 d处死动物，取两侧附睾过滤、固定、染色。每只观察1000个精子，并计算畸形率。
1.5.6 30 d喂养试验
依据《药物重复给药毒性试验技术指导原则》取雌雄各半共80只小鼠分笼饲养，随机分成4组，各组剂量分别为2000、4000、8000 mg/kg，0 mg/kg组用同等体积的0.5%CMC-Na灌胃给药，连续给药30 d，根据动物体重增加情况调整灌胃量。每天记录动物的一般行为表现、死亡或中毒情况。30 d后，记录处死前体重，采用股动脉取血，进行各项血液学指标检测并取各脏器进行病理学检查。
1.6 统计学处理
采用SPSS 22.0软件进行数据分析。数据均采用（
$\bar x \pm s$ ）表示，采用单因素和双因素方差分析对多组间进行比较。2. 结果
2.1 急性毒性试验
松萝胺急性毒性试验结果，见表1，在14 d内动物体重增长明显，未出现异常表现，也无死亡。该化合物按照急性毒性剂量分级，雌、雄性昆明小鼠MTD均大于15000 mg/kg，根据化合物经口急性毒性分级标准属实际无毒。
表 1 急性毒性试验小鼠平均体重变化表[（$\bar x \pm s$ ），n = 10]Table 1. Changes in the average body weight of mice in the acute toxicity test [（$\bar x \pm s$ ），n = 10]性别 动物数（只） 第一天体重（g） 第14天体重（g） 剂量（mg/kg） 死亡数（只） 雌性 10 19.93 ± 0.98 29.96 ± 1.63 15 000 0 雄性 10 19.75 ± 0.83 33.99 ± 2.33 15 000 0 2.2 体内染色体畸变试验
CP组与0 mg/kg组有显著差异（P < 0.05）；松萝胺各处理组畸形率与0 mg/kg组相比，均无统计学意义（P > 0.05），未见松萝胺对小鼠骨髓细胞染色体发生率产生影响，该结果表明松萝胺对小鼠骨髓细胞无致染色体畸变作用，见表2。
表 2 松萝胺对小鼠骨髓细胞染色体变化的影响[（$\bar x \pm s$ ），n = 5]Table 2. Effect of Usenamine on chromosomal changes of mouse bone marrow cells [（$\bar x \pm s$ ），n = 5]性别 剂量（mg/kg） 受检细胞数 畸形数 畸变率（%） 雌 0 50 1.60 ± 0.55 3.2 ± 1.10 2 000 50 2.20 ± 0.83 4.4 ± 1.67 4 000 50 2.00 ± 0.71 4.0 ± 1.41 8 000 50 1.40 ± 0.55 2.8 ± 1.09 环磷酰胺（CP） 50 5.60 ± 0.89* 11.2 ± 1.79* 雄 0 50 1.60 ± 0.55 3.2 ± 1.10 2 000 50 1.60 ± 0.89 3.2 ± 1.79 4 000 50 2.00 ± 0.55 4.0 ± 1.10 8 000 50 1.80 ± 0.71 3.6 ± 1.41 环磷酰胺（CP） 50 6.00 ± 1.58* 12.0 ± 3.16* 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05。 2.3 BEAS-2B细胞染色体畸变试验
MMC组与0 mg/kg组相比差异显著（P < 0.05）；松萝胺各处理组BEAS-2B细胞染色体畸形率与0 mg/kg组相比均无统计学差异（P > 0.05），见表3。
表 3 松萝胺对BEAS-2B细胞染色体变化的影响（$\bar x \pm s$ ）Table 3. Effect of Usenamine on chromosome changes of BEAS-2B cells （$\bar x \pm s$ ）剂量（μmol/L） 受检细胞数 畸形数 畸变率（%） 0 50 1.2 ± 0.45 2.4 ± 0.89 25 50 1.4 ± 1.14 2.8 ± 2.28 50 50 2.2 ± 0.84 4.4 ± 1.67 100 50 1.6 ± 0.89 3.2 ± 1.79 丝裂霉素C（MMC） 50 8.6 ± 1.67* 17.2 ± 3.35* 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05。 2.4 骨髓微核试验
MMC组与0 mg/kg组相比差异显著（P < 0.05）；松萝胺各处理组微核发生率与0 mg/kg组差别无统计学意义（P > 0.05），该结果显示松萝胺对小鼠的骨髓嗜多染红细胞没有致微核作用，见表4，图2。
表 4 小鼠骨髓细胞微核率[（$\bar x \pm s$ ），n = 5]Table 4. Mouse bone marrow cell micronucleus rate [（$\bar x \pm s$ ），n = 5]性别 剂量（mg/kg） 动物数（只） 受检PCE数 微核数 微核率（‰） 雌性 0 5 5 000 7.00 ± 3.24 1.40 ± 0.65 2 000 5 5 000 6.20 ± 3.42 1.24 ± 0.68 4 000 5 5 000 8.40 ± 2.41 1.68 ± 0.48 8 000 5 5 000 5.80 ± 4.44 1.16 ± 0.88 1 5000 5 5 000 5.80 ± 2.17 1.16 ± 0.43 环磷酰胺（CP） 5 5 000 95.00 ± 16.24* 19.00 ± 3.24* 雄性 0 5 5 000 9.60 ± 4.16 1.92 ± 0.83 2 000 5 5 000 15.20 ± 2.17 3.04 ± 0.43 4 000 5 5 000 10.00 ± 4.64 2.00 ± 0.92 8 000 5 5 000 12.60 ± 3.44 2.52 ± 0.69 15 000 5 5 000 10.60 ± 4.39 2.12 ± 0.88 环磷酰胺（CP） 5 5 000 89.60 ± 14.89* 17.92 ± 2.98* 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05。 
图 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果（Giemsa×1 000）Figure 2. Micronucleus test results of mouse bone marrow polychromatic erythrocytes （Giemsa ×1 000）2.5 精子畸形试验
表 5 松萝胺对小鼠精子畸形的影响[（$\bar x \pm s$ ），n = 5）]Table 5. Effect of Usenamine on Sperm Deformity in Mice [（$\bar x \pm s$ ），n = 5]剂量（mg/kg） 受检精子数 总畸形数 畸形率（%） 0 5 000 115 1.6 ± 0.22 2 000 5 000 88 1.72 ± 0.30 4 000 5 000 91 1.82 ± 0.47 8 000 5 000 86 1.76 ± 0.50 15 000 5 000 80 2.30 ± 0.36 环磷酰胺（CP） 5 000 301 6.02 ± 1.18* 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05；CP组与阴性对照0 mg/kg组相比有显著差异（P < 0.05）；松萝胺各处理组精子畸形率与0 mg/kg组相比均无统计学意义（P > 0.05），未见松萝胺对精子畸形发生率产生影响，该结果表明松萝胺对雄性小鼠无致精子畸形作用。 2.6 30 d喂养试验
2.6.1 松萝胺对小鼠的一般影响
30 d内各组动物行为表现正常，无死亡和中毒症状。各处理组的进食饮水量和体重与0 mg/kg组无统计学差异（P > 0.05）。
2.6.2 松萝胺对小鼠血液指标的影响
各组小鼠经喂养30 d后取血进行血液学指标测定。雌性小鼠8 000 mg/kg组和4 000 mg/kg组红细胞计数均低于0 mg/kg组（P < 0.05）。雄性小鼠4 000 mg/kg组红细胞计数、血红蛋白浓度均低于0 mg/kg组 （P < 0.05），见表6。
表 6 松萝胺对小鼠血液学指标的影响[（$\bar x \pm s$ ），n = 10]Table 6. Effect of Usenamine on the Hematological Indexes of Mice [（$\bar x \pm s$ ），n = 10]性别 剂量（mg/kg） 白细胞计数
（×109/L）红细胞计数
（×1012/L）血红蛋白（g/L） 淋巴细胞（%） 雌 0 6.17±2.15 10.52±0.48 168.7±4.30 84.35±8.45 2 000 5.78±1.12 9.95±0.49 167.1±7.03 88.39±8.41 4 000 4.62±1.17 9.63±0.51* 167.7±3.86 84.24±7.81 8 000 4.28±1.20 9.63±0.48* 168.3±6.91 84.60±8.34 雄 0 4.60±1.17 9.94±0.41 167.3±7.61* 80.18±3.72 2 000 4.31±1.15 9.76±0.48 163.5±3.24* 77.10±7.53 4 000 4.68±1.25 9.52±0.11* 161.8±5.25* 79.68±3.55 8 000 4.05±0.68 9.06±0.27 168.3±6.91* 80.86±8.31 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05。 2.6.3 松萝胺对小鼠血液生化指标的影响
由表7可见，雄性小鼠8 000 mg/kg组肝功能检查项目中谷草转氨酶低于0 mg/kg组（P < 0.05）肌酐、尿素、甘油三酯、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白高于0 mg/kg组（P < 0.05），4 000 mg/kg组的谷草转氨酶低于0 mg/kg组（P < 0.05）；雌性小鼠8 000 mg/kg组葡萄糖水平低于0 mg/kg组（P < 0.05），其他检测项目未发现显著差异。故可知松萝胺对雌性小鼠影响较少，而对雄性小鼠的肝功、肾功与血脂均有影响，但差异均未见到成倍的差别，不构成病理性变化，可看做是亚健康状态均在本实验室历史对照范围内。
表 7 松萝胺对小鼠血液生化指标的影响[（$\bar x \pm s$ ），n = 10]（1）Table 7. Effect of Usenamine on Blood Biochemical Indexes in Mice [（$\bar x \pm s$ ），n = 10]（1）性别 剂量
（mg/kg）谷丙转氨酶
ALT（U/L）谷草转氨酶
AST（U/L）谷氨酰转肽酶
GGT（U/L）尿素UREA
（mmol/L）肌酐CREA
（μmol/L）雌 0 59.37 ± 3.5 240.91 ± 20.8 1.73 ± 0.8 6.58 ± 0.9 42.75 ± 2.4 2 000 59.12 ± 7.1 176.89 ± 17.1 1.44 ± 0.5 6.73 ± 0.6 40.82 ± 3.2 4 000 74.61 ± 9.1 230.00 ± 21.3 1.20 ± 0.6 7.30 ± 0.9 43.36 ± 9.9 8 000 65.00 ± 7.4 185.30 ± 17.1 1.70 ± 0.8 7.20 ± 1.3 47.87 ± 6.9 雄 0 50.73 ± 2.8 149.18 ± 10. 1.36 ± 0.2 9.30 ± 1.3 42.53 ± 5.3 2 000 59.78 ± 4.1 133.11 ± 12.5 1.11 ± 0.1 9.44 ± 1.2 46.68 ± 4.1 4 000 47.50 ± 2.3 86.70 ± 4.1* 1.40 ± 0.2 9.72 ± 1.2 51.14 ± 4.1 8 000 51.80 ± 4.8 104.90 ± 6.7* 2.70 ± 0.5 11.71 ± 1.2* 60.72 ± 13.0* 表 7 松萝胺对小鼠血液生化指标的影响[（$\bar x \pm s$ ），n = 10]（2）Table 7. Effect of Usenamine on Blood Biochemical Indexes in Mice [（$\bar x \pm s$ ），n = 10]（2）性别 剂量
（mg/kg）血糖GLU
（mmol/L）总胆固醇CHO
（mmol/L）甘油三酯TG
（mmol/L）高密度脂蛋白HDL
（mmol/L）低密度脂蛋白LDL
（mmol/L）极低密度脂蛋白VLDL
（mmol/L）雌 0 9.42 ± 1.2 2.281.9 1.90 ± 0.4 1.10 ± 0.3 0.24 ± 0.2 0.87 ± 0.2 2 000 9.07 ± 0.8 1.91 ± 0.2 1.74 ± 0.5 1.23 ± 0.2 0.15 ± 0.1 0.79 ± 0.2 4 000 8.22 ± 0.8 1.73 ± 0.2 2.25 ± 0.5 1.05 ± 0.2 0.09 ± 0.1 1.02 ± 0.2 8 000 7.62 ± 1.3* 1.90 ± 0.4 1.96 ± 0.6 1.22 ± 0.3 0.14 ± 0.1 0.89 ± 0.3 雄 0 8.20 ± 1.3 2.30 ± 0.4 2.09 ± 0.6 1.59 ± 0.3 0.14 ± 0.2 0.95 ± 0.3 2 000 8.00 ± 0.8 2.22 ± 0.5 2.40 ± 0.6 1.58 ± 0.3 0.03 ± 0 1.09 ± 0.3 4 000 8.39 ± 1.3 2.45 ± 0.6 2.49 ± 0.6 1.58 ± 0.5 0.25 ± 0.3 1.15 ± 0.3 8 000 6.47 ± 2.7 2.54 ± 0.7 3.76 ± 1.0* 1.50 ± 0.4 0.51 ± 0.3* 1.73 ± 0.4* 与阴性对照组（0 mg/kg组）相比，*P < 0.05。 2.6.4 组织病理学检查
对8000 mg/kg组雌性小鼠与雄性小鼠共取10例，0 mg/kg组雌性小鼠与雄性小鼠共取10例进行组织病理学检查，结果所取脏器均表现正常，无病理改变，见图4。
图 4 30 d喂养试验组织病理学检查（HE × 200）Figure 4. Histopathological examination of 30-day feeding test （HE × 200）综上所述，松萝胺在不同剂量处理30 d后，小鼠一般情况良好；各项血液及生化指标均在正常范围内；8 000 mg/kg组各脏器组织病理学检查均未见病理改变。
3. 讨论
松萝胺[C18H17NO6，6-乙酰基-2-（1-氨基-亚乙基）-7，9-二羟基-8，9b-二甲基-9bH-二苯呋喃-1，3-二酮]是一种天然活性化合物，有较强的抗癌并抑制肿瘤细胞生长作用，经课题组大量研究可知松萝胺抑制肿瘤细胞增殖，并在裸鼠体内有抑制肿瘤生长作用，说明松萝胺在治疗癌症方面有较好的前景[16]。为更好更安全的推进新药的开发和应用，本实验选取多种试验对松萝胺进行毒理学安全性评价。
经急性毒性试验可知松萝胺经口急性毒性无毒；在本研究中未见明显遗传毒性；短期重复给药试验中，松萝胺能影响小鼠肝肾功能和血糖血脂代谢，并且存在性别差异。肝、肾、睾丸未见明显病理学改变。通过急性毒性试验、遗传毒性试验及30 d喂养试验了解松萝胺的毒作用强度和毒作用性质，初步评价该化合物的安全性，为该化合物的临床前研究和应用开发提供前期研究基础。
综上所述，天然活性化合物松萝胺为安全，无明显毒副作用，无致染色体畸变及生殖细胞遗传毒性。本研究首次评价了松萝胺的安全性，为其在临床上的使用安全性提供理论性参考。
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图 1 芒果苷元对HK-2细胞活力的影响（ $\bar x \pm s$，n = 3）
注：NOR：正常组；NL：芒果苷元；Ben：苯溴马隆。
Figure 1. Effect of norathyriol on HK-2 cell viability
图 2 芒果苷元对TGF-β1 诱导24 h后的HK-2细胞形态变化的影响（40×）
注：NOR：正常组；MOD：模型组；NL：芒果苷元；Ben：苯溴马隆。
Figure 2. Effect of norathyriol on the morphological changes of HK-2 cells induced by TGF - β 1 for 24 h （40×）
图 3 芒果苷元对TGF-β1诱导后HK-2细胞迁移率的影响（40×）
Figure 3. Effect of norathyriol on the migration of HK-2 cells induced by TGF - β 1 （40×）
图 4 芒果苷元对TGF-β1诱导后的HK-2细胞的迁移率的影响（ $\bar x \pm s$，n = 3）
注：NOR：正常组；MOD：模型组；NL：芒果苷元；Ben：苯溴马隆。与模型组相比，*P < 0.05；**P < 0.01；与正常组相比，##P < 0.01。
Figure 4. Effect of norathyriol on the migration of HK-2 cells induced by TGF – β1 （ $\bar x \pm s$，n = 3）
图 5 芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞侵袭能力的影响（100×）
Figure 5. Effect of norathyriol on invasion of HK-2 cells induced by TGF - β 1（100 ×）
图 6 芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞侵袭能力的影响（ $\bar x \pm s$，n = 3）
注：NOR：正常组；MOD：模型组；NL：芒果苷元；Ben：苯溴马隆。与模型组相比，*P < 0.05；与正常组相比，##P < 0.01，one-way ANOVA。
Figure 6. Effect of norathyriol on invasion of HK-2 cells induced by TGF - β 1 （ $\bar x \pm s$，n = 3）
图 7 芒果苷元对TGF-β1诱导的HK-2细胞ColⅠ蛋白表达水平的影响（ $\bar x \pm s$，n = 3）
注：NOR：正常组；MOD：模型组；NL：芒果苷元；Ben：苯溴马隆。与正常组相比，#P < 0.05；与模型组比，*P < 0.05，**P < 0.01，one-way ANOVA。
Figure 7. Effect of norathyriol on expression of colⅠprotein in HK-2 cells induced by TGF-β1 （ $\bar x \pm s$，n = 3）
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