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HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

杨璨瑜 孙孔春 王娟 普惠萍 沈报春

杨璨瑜, 孙孔春, 王娟, 普惠萍, 沈报春. HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(3): 15-21. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
引用本文: 杨璨瑜, 孙孔春, 王娟, 普惠萍, 沈报春. HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(3): 15-21. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
Canyu YANG, Kongchun SUN, Juan WANG, Huiping PU, Baochun SHEN. Metabolic Differences of Propranolol Enantiomers in Different Species of Liver Microsomes by HPLC-MS/MS[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(3): 15-21. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
Citation: Canyu YANG, Kongchun SUN, Juan WANG, Huiping PU, Baochun SHEN. Metabolic Differences of Propranolol Enantiomers in Different Species of Liver Microsomes by HPLC-MS/MS[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(3): 15-21. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321

HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
基金项目: 云南省科技厅科技计划项目(202101AS070048);云南省教育厅科学研究基金资助项目(2019J1190);昆明医科大学科技创新团队(CXTD202003)
详细信息
    作者简介:

    杨璨瑜 (1990~),云南施甸人,理学硕士,实验师,主要从事手性药物对映体分离分析工作

    通讯作者:

    沈报春,E-mail:shen_baochun@126.com

  • 中图分类号: R917

Metabolic Differences of Propranolol Enantiomers in Different Species of Liver Microsomes by HPLC-MS/MS

  • 摘要:   目的  采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)建立R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在肝微粒体孵育体系中的含量测定方法,并分别比较普萘洛尔不同对映体在大鼠、犬、猴以及人4种肝微粒体中的代谢特征。  方法  分别将R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔溶解在由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)启动孵育的不同种属的肝微粒体中,在孵育不同的时间后加入乙腈终止反应。使用电喷雾离子源(ESI),以卡维地洛为内标,在多反应监测模式(MRM)下进行正离子扫描,分别测定各孵育体系中R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔的浓度。以孵育0 min时不同构型的普萘洛尔的质量浓度为参照,分别计算R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在不同肝微粒体样品中的药物剩余百分比和体外代谢半衰期和固有清除率。  结果  普萘洛尔的线性范围为0.05~10.00 μg/mL,定量下限为0.05 μg/mL;日内、日间精密度的RSD%均小于13%。在4个种属的肝微粒体孵育体系中,R-(+)-普萘洛尔在大鼠肝微粒体中代谢快,在猴肝微粒体中次之,在犬和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠 < 猴 < 犬 < 人;而S-(-)-普萘洛尔则是在大鼠和犬肝微粒体中代谢快,在猴和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠 < 犬 < 猴 < 人。在大鼠、犬和猴肝微粒体中,R构型普萘洛尔的t1/2均大于S构型,CLint小于S构型,但在人肝微粒体中却刚好相反。采用单因素方差分析,R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在4种肝微粒体中的体外代谢半衰期t1/2和固有清除率CLint均具有显著性差异(P < 0.05)。  结论  建立的HPLC-MS/MS法具有简单、快速、准确的特点,可用于肝微粒体中普萘洛尔对映体质量浓度的测定。不同构型的普萘洛尔在大鼠、犬、猴和人4种肝微粒体中的代谢稳定性有显著差异。
  • 图  1  典型MRM图

    A. 空白孵育样品;B:普萘洛尔 + 内标样品;C:肝微粒体孵育样品。

    Figure  1.  Typical MRM chromatograms

    图  2  普萘洛尔不同对映体在不同种属肝微粒体中的孵育曲线

    A:大鼠肝微粒体;B:犬肝微粒体;C:猴肝微粒体;D:人肝微粒体。

    Figure  2.  Incubation curves of different enantiomers of propranolol in liver microsomes of different species

    表  1  精密度与准确度结果($\bar x \pm s $/%)

    Table  1.   Precision and accuracy results ($\bar x \pm s $/%)

    理论浓度(μg/mL)目标物日内精密度(n = 5)日间精密度(n = 15)准确度(n = 5)
    实测浓度RSD实测浓度RSD
    0.05 R-(+)-普萘洛尔 0.055 ± 0.003 5.88 0.055 ± 0.003 5.90 108.85 ± 6.41
    S-(-)-普萘洛尔 0.043 ± 0.002 3.80 0.047 ± 0.006 12.09 86.59 ± 2.95
    0.1 R-(+)-普萘洛尔 0.106 ± 0.005 4.87 0.099 ± 0.009 8.72 106.20 ± 5.21
    S-(-)-普萘洛尔 0.095 ± 0.005 5.80 0.097 ± 0.008 7.76 94.94 ± 0.12
    2 R-(+)-普萘洛尔 1.987 ± 0.140 7.06 1.833 ± 0.140 7.75 99.34 ± 7.02
    S-(-)-普萘洛尔 1.842 ± 0.060 3.10 1.889 ± 0.130 6.72 92.08 ± 2.87
    8 R-(+)-普萘洛尔 7.600 ± 0.310 4.14 7.179 ± 0.360 5.07 94.99 ± 3.93
    S-(-)-普萘洛尔 7.913 ± 0.270 3.36 7.700 ± 0.270 3.53 98.91 ± 3.33
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    表  2  提取回收率与基质效应结果(%)

    Table  2.   Extraction recovery and matrix effect results(%)

    理论浓度(μg/mL)目标物提取回收率 (n = 5)基质效应 (n = 5)
    $ (\overline{x}\pm s) $RSD$ (\overline{x}\pm s) $RSD
    0.1 R-(+)-普萘洛尔 104.45 ± 7.01 6.71 102.66 ± 3.70 3.60
    S-(-)-普萘洛尔 105.60 ± 4.45 4.22 106.02 ± 3.75 3.54
    2 R-(+)-普萘洛尔 100.91 ± 5.62 5.57 107.92 ± 3.86 3.57
    S-(-)-普萘洛尔 98.31 ± 4.79 4.87 106.52 ± 4.12 3.87
    8 R-(+)-普萘洛尔 92.18 ± 5.32 5.77 112.51 ± 1.74 1.54
    S-(-)-普萘洛尔 102.92 ± 2.14 2.08 100.30 ± 2.50 2.49
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    表  3  稳定性试验结果($\bar x \pm s $/%)

    Table  3.   Stability test results ($ \bar x \pm s $/%)

    理论浓度(μg/mL)目标物进样器放置24 h室温放置12 h
    实测质量浓度(n = 5)RSD实测质量浓度 (n = 5)RSD
    0.1 R-(+)-普萘洛尔 0.110 ± 0.003 3.18 0.111 ± 0.003 3.08
    S-(-)-普萘洛尔 0.111 ± 0.002 1.63 0.113 ± 0.002 1.72
    2 R-(+)-普萘洛尔 2.071 ± 0.160 7.76 1.890 ± 0.150 8.04
    S-(-)-普萘洛尔 2.271 ± 0.010 0.58 2.250 ± 0.037 1.63
    8 R-(+)-普萘洛尔 7.882 ± 0.200 2.49 7.436 ± 0.282 3.80
    S-(-)-普萘洛尔 8.846 ± 0.120 1.31 8.907 ± 0.210 2.33
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    表  4  R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在不同肝微粒体中的回归方程、t1/2和CLint

    Table  4.   Regression equation,t1/2 and CLint of R-(+)- propranolol and S-(-)- propranolol in different liver microsomes

    肝微粒体目标物回归方程R2t1/2/minCLint/mL·min−1·mg−1
    大鼠 R-(+)-普萘洛尔 y = −0.0117x−0.08 0.9777 59.23* 0.023*
    S-(-)-普萘洛尔 y = −0.0153x−0.0006 0.9359 45.00# 0.031#
    R-(+)-普萘洛尔 y = −0.0063x−0.141 0.8946 111.77* 0.012*
    S-(-)-普萘洛尔 y = −0.014x +0.0021 0.9885 49.50# 0.028#
    R-(+)-普萘洛尔 y = −0.0086x−0.0537 0.9559 80.58* 0.017*
    S-(-)-普萘洛尔 y = −0.0089x + 0.0066 0.9648 77.87# 0.018#
    R-(+)-普萘洛尔 y = −0.0037x−0.076 0.9117 187.30 0.007
    S-(-)-普萘洛尔 y = −0.0026x−0.0677 0.9072 266.54 0.005
      注:R-(+)-普萘洛尔:与人肝微粒体比较,*P < 0.05;S-(-)-普萘洛尔:与人肝微粒体比较,#P < 0.05。
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-07-01
  • 网络出版日期:  2023-03-01
  • 刊出日期:  2023-03-25

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