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即时胃窦部超声在小儿急诊手术误吸风险评估中的应用

汪威廉 龚洁 肖锦亮 张畅 李圣平

刘演龙, 光雪峰, 尹小龙, 戴海龙. miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(9): 1-6. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220915
引用本文: 汪威廉, 龚洁, 肖锦亮, 张畅, 李圣平. 即时胃窦部超声在小儿急诊手术误吸风险评估中的应用[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(11): 145-151. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231122
Yanlong LIU, Xuefeng GUANG, Xiaolong YIN, Hailong DAI. Effects of miR-125a-3p on Atherosclerotic Plaque, M1/M2 Macrophages, MMP-9 and VEGF[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(9): 1-6. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220915
Citation: Weilian WANG, Jie GONG, Jinliang XIAO, Chang ZHANG, Shengping LI. Application of Gastric Antrum Ultrasound in Assessing the Aspiration Risk during Pediatric Emergency Surgery[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(11): 145-151. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231122

即时胃窦部超声在小儿急诊手术误吸风险评估中的应用

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20231122
基金项目: 荆州市科技局科研基金资助项目(2021HC12)
详细信息
    作者简介:

    汪威廉(1987~),男,湖北荆州人,医学硕士,主治医师,主要从事麻醉科临床工作

    通讯作者:

    李圣平,E-mail:jzlishengping@163.com

  • 中图分类号: R614.

Application of Gastric Antrum Ultrasound in Assessing the Aspiration Risk during Pediatric Emergency Surgery

  • 摘要:   目的  探讨即时胃窦部超声检查在小儿急诊手术误吸风险评估中的应用。  方法  选择湖北省荆州市中心医院2020年12月至2021年12月的急诊小儿手术120例,年龄1~12岁,ASA分级I~III级,拟行外科手术治疗,首先根据是否符合美国麻醉医师协会2017年发布的禁饮禁食指南,对患儿进行临床胃排空评估,将患儿分为临床空腹(CE组)和临床饱胃(CF组),然后利用迈瑞M7超声,对小儿胃窦部进行胃内容物的定性和定量评估,将患儿分为超声空腹(UE组)和超声饱胃(UF组),记录临床和超声2种评估方法的一致性。检测右侧卧位下小儿胃管吸引前和吸引后胃窦部横截面积(cross-sectional area,CSA),记录胃管吸引前后CSA的变化,术前小儿的进食种类和进食量,进食与超声检查之间的时间间隔。  结果  最终纳入108例小儿进行了统计分析,临床和超声判断胃排空结果一致性较差,超声和临床均判断为空腹92例(85.2%),超声判断空腹,临床判断饱胃4例(3.7%),超声判断饱胃,临床判断空腹9例(8.3%),超声和临床均判断为饱胃3例(2.8%),(kappa=0.255,P=0.006)。患儿胃管吸引前的进食量与胃窦部CSA存在较好相关性(r =0.840,P<0.05)。吸引前UF组患儿胃窦部CSA明显大于UE组(P<0.05),吸引后UF组患儿胃窦部CSA与UE组无明显差异(P=0.324)。UF组患儿进食以配方奶和高脂肪食物居多,且胃管吸引量,进食量多于UE组(P<0.05),UF组患儿超声检查间隔时间短于UE组(P<0.05)。2组患儿术后呕吐的发生率分别为8.3%和5.2%,差异无统计学意义(P=0.674)。  结论  急诊手术患儿术前行即时胃窦部超声检查结合患儿的进食种类和进食量,可以有效帮助麻醉医师在紧急情况下做出是否饱胃的判断,以便及时调整麻醉策略,选择合适的气道管理方式。
  • 动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症主导的疾病,其首要驱动因素是巨噬细胞表型失调[1]。激活的巨噬细胞主要被极化成两种表型,经典激活的M1和间接激活的M2巨噬细胞,启动并促进炎症是M1巨噬细胞的主要作用,而M2巨噬细胞的主要作用为抑制炎症[2]。在炎症的早期启动中,由于各种炎症因子的诱导,M1巨噬细胞被大量激活,能够有效清除病原体;随着炎症进展,激活了大量的M2巨噬细胞,炎症反应被抑制[2-3]。Schmitz等[4-5]发现,M2巨噬细胞主要存在于稳定性动脉粥样硬化斑块中,而M1巨噬细胞主要存在于不稳定性动脉粥样硬化斑块中,提示斑块的不稳定可能是由于M1和M2之间失衡。

    MicroRNA在单核细胞向巨噬细胞分化过程中起着重要的调控作用。最近研究显示,随着单核细胞分化为M1巨噬细胞,miR-125a-3p和miR-125a-5在此过程中也表达升高。M1巨噬细胞比例的升高,M1/M2巨噬细胞的分化失衡,导致不稳定斑块的形成[6-7]。研究发现MMP-9、VEGF在不稳定斑块中呈高表达[8-9],并且MMP导致巨噬细胞积累,VEGF将巨噬细胞诱导为M1巨噬细胞[10-11],表明MMP-9、VEGF在不稳定斑块中起重要作用。笔者的研究[12]显示miR-125a-3p在动脉粥样硬化斑块的不稳定及破裂中也起着重要的作用。本研究拟进一步在动物体内实验,观察miR-125a-3p抑制剂对动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞以及斑块组织中MMP-9和VEGF表达的影响,以探讨其在动脉粥样硬化斑块的稳定性中的作用,为不稳定斑块的防治提供新的药物靶点。

    15只成年雄性健康日本大耳兔,体重2~2.5 kg,由昆明医科大学实验动物学部提供。本研究经医院伦理委员会审批,实验动物的处理符合实验动物相关要求。

    牛血清白蛋白(Solarbio)、0.5%胆固醇,l0%蛋黄,5%猪油、miR-125a-3p干扰慢病毒载体(广州复能基因有限公司)、生理盐水、甲醛溶液、70%乙醇、4%中性福尔马林、油红O染液、0.01M的PBST、2%BSA、CD11c抗体(Affinity)、CD206抗体(Affinity)、VEGF抗体(Santa Cruz Biotechmology)、MMP-9抗体(Solarbio)。Axio Lab A1显微镜(蔡司)、Axio Observer A1荧光显微镜(蔡司)。

    1.3.1   兔动脉粥样硬化模型的建立及miR-125a-3p抑制剂干预

    15只成年雄性健康日本大耳兔,给予普通饲料和水适应性喂养7 d,再将其随机分为3组,对照组、动脉粥样硬化模型组(AS模型组)和miR-125a-3p抑制剂干预组(miR-125a-3p抑制剂组)。对照组给以普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组和miR-125a-3p干预组一次性静脉注射牛血清白蛋白(250 mg/kg),即日起给予(0.5%胆固醇,l0%蛋黄,5%猪油)150 g/d喂养2周,给予动脉粥样硬化模型组和miR-125a-3p干预组第2次注射牛血清白蛋白(250 mg/kg),并继续给予高胆固醇饲料喂养。期间,所有组提供充足干净水,定期打扫和清洗兔笼。分别于动脉粥样硬化建立4周和8周后, miR-125a-3p干预组注射以miR-125a-3p干扰慢病毒载体(5 mL/只),对照组和动脉粥样硬化模型组注射以等量生理盐水,12周时耳缘静脉注射空气处死兔子,立即剖开胸、腹腔,游离主动脉全长,剥离外膜脂肪组织,纵行剖开,行以下述处理。

    1.3.2   血管内膜油红“O”染色血管粥样斑块大体标本染色步骤

    (1)从甲醛溶液中取出标本,用流水洗15 min,剥去外膜,再用蒸馏水浸洗;(2)取储备液60 mL加入蒸溜水至100 mL,混匀放置10 min后染色,染色时间为2~4 min;(3)用70%乙醇浸泡标本至斑块呈红色,底色呈白色为止,最后用蒸馏水浸泡标本,浸入甲醛溶液中保存。油红O染液的配制:储备液:油红O 0.5 g,98%异丙醇 100 mL。临用前取上液6 mL,加蒸馏水4 mL,静置10 min,过滤即可。

    1.3.3   免疫组织化学方法检测斑块组织中MMP-9、VEGF

    主动脉经4%中性福尔马林固定后,石蜡切片进行MMP-9、VEGF表达测定(SP法,阴性对照一抗用0.01 mol/L PBS代替)。显微镜下拍照后用“Image Pro Plus 4.5”软件进行图像分析,测定阳性物质表达面积和积分光密度。

    1.3.4   免疫荧光法检测M1标志物CD11c、M2

    标志物CD206 石蜡切片经脱蜡、酒精脱水后,进行抗原修复,用0.01 M的PBST漂洗5 min,重复3次;以2% BSA于37 ℃湿盒内封闭30 min;标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体,放在湿盒中,37 ℃孵育30 min,0.01 mol/L PBS漂洗5 min,重复3次,不时震荡。缓存甘油封片,镜检。

    SPSS 11.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差表示,多组间均数比较应用方差分析,P < 0.05为差异有统计学意义。

    血管内膜油红“O”染色显示,动脉粥样硬化病变处被染成红色。血管内膜油红“O”染色统计结果显示动脉粥样硬化组病变区域远大于miR-125a-3p抑制剂干预组,各组间的差异具有显著性(P < 0.01)(图1图2)。结果表明:miR-125a-3p抑制剂能减少动脉粥样硬化斑块的形成。

    图  1  血管内膜油红“O”染色各组动脉粥样硬化病变区域
    与对照组比较,****P < 0.0001,****P < 0.0001;与AS模型组比较,***P < 0.001。
    Figure  1.  Vascular intima oil red "O" staining for atherosclerotic lesions in each group
    图  2  血管内膜油红“O”染色
    a:对照组;b:AS模型组;c:AS模型+miR-125a-3p抑制剂干预组;miR-125a-3p抑制剂干预后动脉粥样硬化组病变区域显著减小。
    Figure  2.  Vascular intima is stained with oil red "O" stain

    MMP-9免疫组化染色结果显示,与对照组比较,AS模型组的MMP-9水平显著升高(P < 0.001),与AS模型组比较,miR-125a-3p抑制剂干预后MMP-9水平显著下降(P < 0.01)(图3图4)。结果表明:miR-125a-3p抑制剂干预后,降低了斑块组织中MMP-9的表达。

    图  3  免疫组化检测各组MMP-9 表达水平
    与对照组比较,***P < 0.001,*P < 0.05;与AS模型组比较,**P < 0.01。
    Figure  3.  The expression level of MMP-9 was detected by immunohistochemistry
    图  4  MMP-9免疫组化染色(×200)
    a:对照组;b:AS模型组;c:miR-125a-3p抑制剂干预组;miR-125a-3p抑制剂干预后,MMP-9表达水平显著下降。
    Figure  4.  MMP-9 immunohistochemical staining (×200)

    VEGF免疫组化染色结果显示,与对照组对比,AS模型组的VEGF水平显著提高(P < 0.01);与AS模型组对比,miR-125a-3p抑制剂干预后VEGF水平下降,(P < 0.01)(图5图6)。结果表明:miR-125a-3p抑制剂干预后,降低了斑块组织中VEGF的表达。

    图  5  免疫组化检测各组VEGF表达水平
    与对照组比较,**P < 0.01,*P < 0.05;与AS模型组比较,**P < 0.01。
    Figure  5.  Immunohistochemistry was used to detect VEGF expression levels in each group
    图  6  VEGF免疫组化染色(×200)
    a:对照组;b:AS模型组;c:AS模型+miR-125a-3p抑制剂干预组;miR-125a-3p抑制剂干预后,VEGF表达水平下降。
    Figure  6.  VEGF immunohistochemical staining (×200)

    免疫荧光检测M1标志物CD11c染色结果显示:与对照组比较,AS模型组的CD11c水平有明显升高(P < 0.0001);与AS模型组比较,miR-125a-3p抑制剂干预后CD11c水平显著下降(P < 0.0001)(图7图8)。结果表明:miR-125a-3p抑制剂减少了斑块组织中M1 巨噬细胞。

    图  7  免疫荧光检测各组M1标志物CD11c表达水平
    与对照组比较,****P < 0.0001,*P < 0.05;与AS模型组比较,****P < 0.0001。
    Figure  7.  The expression level of M1 marker CD11c was detected by immunofluorescence
    图  8  M1标志物CD11c免疫荧光染色(×200)
    a:对照组;b:AS模型组;c:AS模型+miR-125a-3p抑制剂干预组;miR-125a-3p抑制剂干预后,CD11c表达水平显著下降。
    Figure  8.  M1 marker CD11c immunofluorescence staining (×200)

    免疫荧光检测M2标志物CD206染色结果显示,与对照组对比,AS模型组的CD206水平显著下降(P < 0.0001),miR-125a-3p抑制剂干预后CD206水平明显升高(P < 0.0001)(图9图10)。结果表明:miR-125a-3p抑制剂增加了斑块组织中M2 巨噬细胞。

    图  9  免疫荧光检测各组M2 标志物CD206表达水平
    与对照组比较,****P < 0.0001,**P < 0.01;与AS模型组比较,****P < 0.0001。
    Figure  9.  The expression level of M2 marker CD206 was detected by immunofluorescence
    图  10  M2 标志物CD206免疫荧光染色(×200)
    a:对照组;b:AS模型组;c:AS模型+miR-125a-3p抑制剂干预组;miR-125a-3p抑制剂干预后,CD206表达水平明显升高。
    Figure  10.  M2 marker CD206 immunofluorescence staining (×200)

    AS是一种慢性炎症性疾病,严重威胁人体健康。研究表明,不稳定AS斑块容易导致不良心血管事件的发生[13-14]。巨噬细胞是AS病变中主要的免疫细胞,在AS整个病理生理过程中都发挥着重要作用[5]。在动脉粥样硬化中,当循环中的单核细胞进入内膜后,单核细胞会分化为巨噬细胞[15]。巨噬细胞和单细胞暴露在炎症细胞因子、氧化脂质、胆固醇晶体和其他因素中。所有这些刺激不仅诱导特定的转录反应,而且还广泛相互作用,导致动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞的转录[7]。基于不同的激活方式,巨噬细胞主要分为两种表型,即经典激活的M1和替代激活的M2巨噬细胞[2-3]。M1巨噬细胞能够开始并维持炎症反应,分泌促炎细胞因子,激活内皮细胞,并诱导其他免疫细胞募集到发炎组织中;另一方面,M2巨噬细胞促进炎症的消退,吞噬糖凋亡细胞,驱动胶原蛋白沉积,协调组织完整性,释放抗炎介质,主要参与组织修复,具有吞噬、促血管生成和促纤维化能力。M1巨噬细胞在促进斑块不稳定方面发挥了重要作用,而M2巨噬细胞则维持斑块的稳定,提示斑块的不稳定可能是M1和M2亚型之间失衡的结果[6, 16]

    miRNA是一种小型、进化保守的非编码RNA,长度为18~25个核苷酸,在基因调控中具有重要作用,转录后调控基因表达[17-18]。miRNA可以抑制数千个目标基因并协调正常过程,包括细胞增殖、分化和凋亡[19]。同时,miRNA对巨噬细胞的激活起到重要调节作用[7],例如Lin-Li Lv等的研究表明[20],外体miR-19b-3p调节的TEC和巨噬细胞之间的通路,导致M1巨噬细胞激活。由于M1巨噬细胞加剧斑块的不稳定,因此,笔者可以推测miRNA对不稳定斑块的发生起到了一定的作用。笔者的研究[12]也提示miR-125a-3p在动脉粥样硬化斑块的不稳定及破裂中起着重要的作用。

    VEGF是一种有效的内皮细胞生长因子和血管生成诱导因子,对血管的完整性和血管功能具有重要意义。研究发现,VEGF在不稳定斑块中发挥着重要作用,能在一定程度上加速动脉粥样硬化斑块的进展和不稳定性。其机制可能是VEGF增加血管通透性,引起红细胞外渗,进而导致斑块内出血,加速动脉粥样硬化[21]。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)属于MMP家族,并已被广泛研究。随着MMP-9活性的增加,MMP-9可导致纤维帽变薄,从而导致斑块的不稳定[22]

    本研究结果显示,抑制miR-125a-3p可使动脉粥样硬化斑块病变区域面积减少,斑块组织中M1 巨噬细胞、MMP-9,VEGF表达减少,M2 巨噬细胞增加。提示miR-125a-3p抑制可以减轻动脉粥样硬化斑块形成,平衡M1/M2巨噬细胞,减少MMP-9,VEGF表达,促进斑块稳定,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。

  • 图  1  UE组和UF组吸引前后超声影像图

    A:UE组胃管吸引前胃窦部超声影像图;B:UE组胃管吸引后胃窦部超声影像图;C:UF组胃管吸引前胃窦部超声影像图;D:UF组胃管吸引后胃窦部超声影像图。

    Figure  1.  Ultrasound images of group UE and group UF before and after aspiration

    图  2  所有患儿进食量与BCSA的相关性散点图

    Figure  2.  Scatter plot of the correlation between food intake and BCSA in all children

    图  3  UE组和UF组吸引前后CSA比较

    A:2组患者胃管吸引前胃窦部CSA的中位数比较;B:2组患者胃管吸引后胃窦部CSA的中位数比较。d表示2组患者吸引前CSA中位数的差值。

    Figure  3.  Comparison of CSA between UE and UF before and after suction

    表  1  2组患儿一般资料比较($ \bar{x}\pm s $

    Table  1.   Comparison of general data between two groups of patients($ \bar{x}\pm s $

    指标UE组
    n = 96)
    UF组
    n = 12)
    t/χ2P
    男/女(n 68/28 7/5 0.307 0.580
    年龄(岁) 7.39 ± 2.18 8.00 ± 1.86 −0.933 0.353
    BMI(kg/m2 16.55 ± 2.58 16.37 ± 1.95 0.376 0.708
    手术时间(min) 48.33 ± 9.37 45.00 ± 6.74 1.193 0.236
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    表  2  临床和超声判断胃容量结果一致性评价[n(%)]

    Table  2.   Consistency of gastric volume measured by clinical and ultrasound[n(%)]

    临床判断超声判断kappaP
    UE组UF组
    CE组92(85.2)9(8.3)0.2550.006*
    CF组4(3.7) 3(2.8)
      *P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  3  超声检查空腹和饱胃相关指标比较[MQ1,Q3)/n(%)]

    Table  3.   Comparison of related parameters between UE and UF[MQ1,Q3)/n(%)]

    指标UE组
    n = 96)
    UF组
    n = 12)
    Z/t/χ2P
    BCSA(cm2 2.10(1.80,2.80) 3.90(3.80,4.20) 15.088 <0.001*
    ACSA(cm2 1.80(1.70,1.90) 1.85(1.80,2.00) 0.973 0.324
    胃管吸引量(mL/kg) 0.3(0.2,0.6) 1.2(1.0,1.3) 23.160 <0.001*
    进食种类(1/2/3/4)(n (64/30/2/0) (1/3/8/0) 34.900 <0.001*
    进食至超声检查间隔(h) 5.92 ± 1.06 2.42 ± 0.52 11.208 <0.001*
    进食量(g) 120(100,150) 225(203,238) 16.255 <0.001*
    呕吐[n(%)] 5(5.2) 1(8.3) 0.177 0.674
      BCSA:胃管吸引前CSA,ACSA:胃管吸引后CSA,胃管吸引量和进食量均采用[MQ1,Q3)]表示;*P < 0.05。
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-08-19
  • 网络出版日期:  2023-11-09
  • 刊出日期:  2023-11-30

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