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LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB的影响

罗芳 赵瑞斌 李国军 付旭宪 范贤谋 苏少明 文云波 黄齐林 李斌

罗芳, 赵瑞斌, 李国军, 付旭宪, 范贤谋, 苏少明, 文云波, 黄齐林, 李斌. LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB的影响[J]. 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526
引用本文: 罗芳, 赵瑞斌, 李国军, 付旭宪, 范贤谋, 苏少明, 文云波, 黄齐林, 李斌. LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB的影响[J]. 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526
Fang LUO, Ruibin ZHAO, Guojun LI, Xuxian FU, Xianmou FAN, Shaoming SU, Yunbo WEN, Qilin HUANG, Bin LI. Researches on the Effect of Alcohol on Endogenous GHB in Human Blood by LC-MS/MS Method[J]. Journal of Kunming Medical University. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526
Citation: Fang LUO, Ruibin ZHAO, Guojun LI, Xuxian FU, Xianmou FAN, Shaoming SU, Yunbo WEN, Qilin HUANG, Bin LI. Researches on the Effect of Alcohol on Endogenous GHB in Human Blood by LC-MS/MS Method[J]. Journal of Kunming Medical University. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526

LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526
基金项目: 云南省刑事科学技术重点实验室创新研究基金资助项目(YNPL-S2021001)
详细信息
    作者简介:

    罗芳(1980~),女,重庆万州人,理学学士,高级工程师,主要从事法医毒物分析工作

    通讯作者:

    付旭宪, E-mail:184152817@qq.com

  • 中图分类号: DF795.4

Researches on the Effect of Alcohol on Endogenous GHB in Human Blood by LC-MS/MS Method

  • 摘要:   目的  运用LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB含量的影响。  方法  建立血液中γ-羟基丁酸(GHB)、γ-丁内酯(GBL)和1,4-丁二醇(1,4-BD)的LC-MS/MS法,以22名健康受试者为研究对象,模拟真实案例饮酒,测定研究对象饮酒前、饮酒7 h后血液中内源性GHB的含量,比较饮酒前后血液中内源性GHB的含量。  结果  GHB在0.1~50 µg/mL浓度范围、GBL和1,4-BD在0.15~50 µg/mL浓度范围内,线性关系良好(R2 > 0.999),GHB、GBL和1,4-BD的检出限分别为0.015 µg/mL,0.025 µg/mL和0.01 µg/mL,定量限分别为0.1µg/mL,0.15 µg/mL和0.15 µg/mL。3种目标物的基质效应在18.2%~20.1%之间,回收率为81.6 %~92.3%,日内和日间精密度RSD均小于10%,准确度为-5.8%~7.0%。饮酒7 h后血液中内源性GHB浓度范围为0.71~3.81 µg/mL,相比饮酒前GHB含量升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  饮酒7 h后人体血液中内源性GHB含量增高,但浓度低于4 µg/mL,为真实案例涉及的内外源性GHB的判定提供数据支持,丰富了GHB的法医毒物学数据。
  • 图  1  GHB、GHB-d6、1,4-BD和GBL 4种混标(1 µg/mL)的TIC色谱峰图

    Figure  1.  TIC chromatograms of GHB,GHB-d6,1,4-BD,and GBL mixed standards (1 µg/mL)

    图  2  GHB、GHB-d6、1,4-BD、GBL 4种混标(1 µg/mL)的d-MRM色谱图

    Figure  2.  D-MRM chromatograms of GHB,GHB-d6,1,4-BD,and GBL mixed standards (1 µg/mL)

    表  1  HPLC梯度洗脱条件

    Table  1.   HPLC gradient elution conditions

    时间/min流动相A(%)流动相B(%)
    0.009010
    0.59010
    2.51090
    3.01090
    3.19010
    6.09010
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    表  2  GHB、GHB-d6、1,4-BD、GBL的d-MRM离子、碎裂电压及碰撞能

    Table  2.   The acquisition parameters ,fragmentation voltage and collision energy of d-MRM ,GHB,GHB-d6,1,4-BD,GBL

    目标物 扫描模式 母离子(m/z) 子离子(m/z) 碎裂电压(v) 碰撞能(ev)
    GHB ESI- 103.0 103.0/85.1* 65 8
    103.0/57.1 12
    GHB-d6 ESI- 109.0 109.0/61.1* 60 8
    109.0/90.0 16
    1,4-BD ESI+ 91.1 91.1/73.0* 30 4
    91.1/55.0 12
    GBL ESI+ 87.0 87.0/45* 66 20
    87.0/43 24
      注:*为定量离子。
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    表  3  血液中GHB、1,4-BD、GBL的校准曲线、检出限和定量限

    Table  3.   Calibration curve ,detection limit and quantitation limit of GHB 1,4-BD GBL in blood

    化合物 线性范围(µg/mL) 线性回归方程 R2 检出限(µg/mL) 定量限(µg/mL)
    GHB 0.1~50 У=22.288925X-0.955609 0.9993 0.015 0.1
    1,4BD 0.15~50 У=151049.912950X+57464.367658 0.9992 0.01 0.15
    GBL 0.15~50 У=16316.378144X+105811.540171 0.9995 0.025 0.15
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    表  4  3种目标物的基质效应与提取回收率 (%)

    Table  4.   Matrix effects and extraction recovery rates of three target substances(%)

    化合物
    名称
    浓度
    (µg/mL)
    基质
    效应
    相对标准
    偏差RSD
    提取
    回收率
    相对标准
    偏差RSD
    GHB120.04.681.96.3
    520.13.886.24.2
    2519.86.192.34.8
    1,4-BD118.24.681.66.4
    518.43.987.44.5
    2519.02.389.36.7
    GBL119.26.283.74.4
    518.91.385.63.2
    2518.25.184.54.6
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    表  5  3种目标物的精密度及准确度

    Table  5.   Precision and accuracy of 3 target substances

    目标物 添加浓度(µg/mL) 日内精密度 日间精密度
    平均检测浓度
    (µg/mL)
    相对标准偏差
    RSD (%)
    偏倚值
    (%)
    平均检测浓度
    (µg/mL)
    相对标准偏差
    RSD (%)
    偏倚值
    (%)
    GHB 1 0.96 5.4 −4.0 1.02 4.8 −2.0
    5 5.04 6.4 0.8 4.93 9.5 1.4
    25 24.83 7.7 −0.68 24.92 3.8 −0.32
    1,4-BD 1 0.95 4.3 −5.0 0.98 7.4 −2.0
    5 4.71 2.2 −5.8 4.93 7.3 −1.4
    25 24.87 2.6 −0.52 24.96 7.3 −0.16
    GBL 1 1.07 8.8 7.0 0.98 9.8 −2.0
    5 5.01 4.6 0.2 5.03 5.6 0.6
    25 24.98 1.2 −0.08 25.02 1.4 −0.08
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    表  6  饮酒前和饮酒7 h后血液中GHB和酒精含量检测结果(µg/mL)

    Table  6.   GHB and alcohol content in blood before and 7 hours after drinking alcohol (µg/mL)

    志愿者 性别 实验分组 饮酒量(mL) 饮酒前 饮酒7 h后
    GHB GHB量
    1 低剂量组 1000 0.63 0.84
    2 0.66 0.81
    3 0.84 1.22
    4 0.34 0.71
    5 1.69 2.02
    6 0.86 0.99
    7 0.71 0.77
    8 中剂量组 2000 0.28 1.26
    9 0.76 1.58
    10 0.49 1.34
    11 1.29 1.71
    12 1.52 3.81
    13 1.14 3.14
    14 1.50 1.87
    15 0.96 2.86
    16 高剂量组 4000 0.71 0.86
    17 1.22 1.67
    18 0.62 0.87
    19 1.86 2.26
    20 1.68 1.88
    21 1.49 2.36
    22 1.11 2.80
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    表  7  饮酒前和饮酒7 h后血液中内源性GHB含量的情况[($ \bar x \pm s $),µg/mL]

    Table  7.   The content of endogenous GHB levels in the blood before and 7 hours after drinking [($ \bar x \pm s $),µg/mL]

    组别 n 饮酒前 饮酒7 h后 饮酒前后差值 t P
    实验组 22 1.02±0.47 1.71±0.87 0.69±0.40 −4.840 0.000*
      *P < 0.05。
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    表  8  案例血液样品中GHB(μg/mL)、酒精(mg/100 mL)的含量

    Table  8.   Contents of GHB (μg/mL)and alcohol (mg/100 mL)in case blood samples

    样品名称目标物检测结果
    锁骨下静脉血GHB10
    锁骨下静脉血酒精96
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  • [1] 董慧茜,沈屹东,郝伟. 新型毒品γ-羟基丁酸中毒、戒断的研究[J]. 中国药物依赖性杂志,2013,22(6):401-407,411.
    [2] 段炼,蓝晓嫦,杨欣湖. 使用“G水”所致精神和行为障碍一例[J]. 中国药物滥用防治杂志,2021,27(3):381-383,387.
    [3] Mannucci C,Pichini S,Spagnolo E V,et al. Sodium oxybate therapy for alcohol withdrawal syndrome and keeping of alcohol abstinence[J]. Current Drug Metabolism,2018,19(13):1056-1064. doi: 10.2174/1389200219666171207122227
    [4] Moriya F,Nishimura H,Furumiya J,et al. Effects of drinking and smoking on endogenous levels of urinary γ-hydroxybutyric acid,a preliminary study[J]. Legal Medicine,2006,8(4):231-234. doi: 10.1016/j.legalmed.2006.05.001
    [5] Poldrugo,F,Barker,S,Basa,M,et al. Ethanol potentiates the toxic effects of 1,4-butanediol[J]. Alcohol Clin Exp Res,1985,9(6):493-497. doi: 10.1111/j.1530-0277.1985.tb05589.x
    [6] Jung,S,Kim,M,Kim,S,et al. Interaction between γ-Hydroxybutyric acid and ethanol: A review from toxicokinetic and toxicodynamic perspectives[J]. Metabolites,2023,13(2):180. doi: 10.3390/metabo13020180
    [7] Küting T,Madea B,Hess C,et al. Comparative study: Postmortem long-term stability of endogenous GHB in cardiac blood,femoral blood,vitreous humor,cerebrospinal fluid and urine with and without sodium fluoride stabilization[J]. Journal of Analytical Toxicology,2022,46(5):519-527. doi: 10.1093/jat/bkab042
    [8] Korb A S,Cooper G. Endogenous concentrations of GHB in postmortem blood from deaths unrelated to GHB use[J]. Journal of Analytical Toxicology,2014,38(8):582-588. doi: 10.1093/jat/bku088
    [9] 李润康,何洪源,李佳宜,等. 生物样品中γ-羟基丁酸的检验方法与阈值研究[J]. 分析测试学报,2021,40(4):488-494. doi: 10.3969/j.issn.1004-4957.2021.04.008
    [10] Elian A A. Determination of endogenous gamma-hydroxybutyric acid (GHB) levels in antemortem urine and blood[J]. Forensic Science International,2002,128(3):120-122. doi: 10.1016/S0379-0738(02)00183-4
    [11] 中华人民共和国国家卫生健康委员会. 静脉血液标本采集指南[J]. 中国实用乡村医生杂志,2020,27(5):7-11.

    中华人民共和国国家卫生健康委员会. 静脉血液标本采集指南[J]. 中国实用乡村医生杂志, 2020, 27(5): 7-11.
    [12] Darke S,Peacock A,Duflou J,et al. Characteristics and circumstances of death related to gamma hydroxybutyrate (GHB)[J]. Clinical Toxicology,2020,58(11):1028-1033. doi: 10.1080/15563650.2020.1726378
    [13] Ha H H,Mata D C,Vargas J R. Endogenous gamma-hydroxybutyrate in postmortem samples[J]. J Anal Toxicol,2020,44(3):263-267. doi: 10.1093/jat/bkz094
    [14] Kietzerow J,Otto B,Wilke N,et al. The challenge of post-mortem GHB analysis: storage conditions and specimen types are both important[J]. International Journal of Legal Medicine,2020,134(1):205-215. doi: 10.1007/s00414-019-02150-w
    [15] Paolo F B ,Wayne A J . Interpreting γ-hydroxybutyrate concentrations for clinical and forensic purposes. [J]. Clinical Toxicology (Philadelphia,Pa. ),2019,57(3): 149-163.
    [16] Kugelberg F C,Holmgren A,Eklund A,et al. Forensic toxicology findings in deaths involving gamma-hydroxybutyrate[J]. International Journal of Legal Medicine,2010,122(1):1-6.
    [17] Caputo F,Vignoli T,Tarli C,et al. A brief up-date of the use of sodium oxybate for the treatment of alcohol use disorder[J]. Int J Environ Res Public Health,2016,13(3):290-290. doi: 10.3390/ijerph13030290
  • [1] 杨璨瑜, 孙孔春, 王娟, 普惠萍, 沈报春.  HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异, 昆明医科大学学报. 2023, 44(3): 15-21. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
    [2] 游旭, 刘建平, 薛保双, 殷会云, 张丽芬, 邬晓琴.  男性首发酒精所致精神障碍患者的流行病学特征, 昆明医科大学学报. 2023, 44(5): 38-42. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230525
    [3] 刘悦鑫, 田方东, 李昕怡, 熊根, 江祥宇, 李贤, 李燕妮.  LC-MS/MS法检测血液和尿液中东莨菪碱和阿托品, 昆明医科大学学报. 2022, 43(9): 147-154. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220916
    [4] 安丽媛, 李兵, 苏纲.  不同剂量的乌司他丁对老年患者术后认知功能及高迁移族蛋白B1的影响, 昆明医科大学学报. 2021, 42(7): 121-125. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210720
    [5] 王礴, 夏咸松, 李进涛, 段小花.  细胞色素P450 2E1在甘草甜素治疗非酒精性脂肪肝病中的作用, 昆明医科大学学报. 2020, 41(04): 11-17.
    [6] 陈希, 许智星, 刘旭杰, 田锦涛, 牛小群, 蒲军.  洛哌丁胺体外对胶质瘤干细胞的杀伤作用, 昆明医科大学学报. 2020, 41(09): 21-25.
    [7] 杨娟, 赵晓晖, 李锦师, 刘慧琴, 王玲玲, 任海兵, 王思思, 颜静, 隋海晶.  丁苯酞注射液治疗不同严重程度的大脑中动脉脑梗死患者的疗效, 昆明医科大学学报. 2019, 40(04): 101-106.
    [8] 卢发焕, 李继印, 李树华, 赵文嵩, 王蕊, 解润芳, 杨凯润.  UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布, 昆明医科大学学报. 2018, 39(05): 16-20.
    [9] 解润芳, 佟钧, 诸晨, 徐天勇, 解继明.  水浸GC-MS法检测生物检材中的百草枯, 昆明医科大学学报. 2017, 38(07): 27-32.
    [10] 李进涛, 马怡, 张钰雯, 唐莹, 王琼仙, 郑红.  酒精对滇西亚种树血液学指标的影响, 昆明医科大学学报. 2017, 38(07): 33-36.
    [11] 刘荣.  二甲双胍治疗2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝疗效, 昆明医科大学学报. 2015, 36(06): -1.
    [12] 王子睿.  4-乙氧基-2-羟基-6-甲基苯甲酸体外抗肿瘤作用及与顺铂联合作用研究, 昆明医科大学学报. 2014, 35(09): -1.
    [13] 李鹏翔.  丁苯酞注射液治疗急性脑梗死临床研究, 昆明医科大学学报. 2014, 35(08): -1.
    [14] 沈丽新.  非酒精脂肪肝病患者ApoB/ApoA1比值与胰岛素抵抗的相关性研究, 昆明医科大学学报. 2013, 34(09): -.
    [15] 柳波.  羟基磷灰石-聚乙烯醇复合剂处理含氟废水的研究, 昆明医科大学学报. 2013, 34(01): -.
    [16] 于萍.  沙丁胺醇在3,4 -二氯苯基异氰酸酯万古霉素手性柱上的对映体分离, 昆明医科大学学报. 2013, 34(10): -.
    [17] 郭伟琳.  UPLC法同时测定旋覆花属植物中2种倍半萜内酯成分的含量, 昆明医科大学学报. 2012, 33(12): 1-2.
    [18] 乌司他丁联合血必净治疗急性胰腺炎肺损伤的临床研究, 昆明医科大学学报. 2011, 32(03): -.
    [19] 前列地尔联合银杏达莫、盐酸丁咯地尔治疗突发性耳聋58例分析, 昆明医科大学学报. 2011, 32(03): -.
    [20] 乌司他丁对急性下肢动脉缺血术后再灌注损伤的治疗体会, 昆明医科大学学报. 2011, 32(04): -.
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  • 收稿日期:  2024-01-12
  • 网络出版日期:  2024-04-29

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