Application of Viral Load Testing in Diagnosing 102 Cases of Indeterminate HIV Antibody
-
摘要:
目的 探讨病毒载量检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值。 方法 选取2016年1月至2019年12月期间昆明市第三人民医院门诊及住院102例HIV抗体不确定病例,1周内进行COBAS TaqMan HIV-1 Test v2.0病毒载量检测和CD4细胞计数,2~4周后随访蛋白印迹实验(western blotting,WB)检测,综合比对分析两种方法的检测结果。 结果 102例HIV抗体不确定病例,病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳,2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,随访结果最终为阳性,病毒载量检测结果为TND的16例病例,随访结果为阴性。 结论 高精度病毒载量检测对HIV抗体不确定结果能快速准确鉴别,缩短随访复查的时间,提早对病情准确判断,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。 Abstract:Objective To explore the application value of viral load testing in diagnosing HIV antibody indeterminate cases. Methods The COBAS TaqMan HIV-1 Test v2.0 and CD4 cell count in 102 cases of indeterminate HIV antibody from The Third People's Hospital of Kunming from January 2016 to December 2019 were detected in one week. Patients were followed up to get the blood samples again two to four weeks later for the retest by Western blotting(WB). The results of the two methods were compared. Results A total 102 cases of blood samples showed unclear WB test result, with 86 cases proved to be HIV positive by follow-up WB test, VL test results of 19 samples more than 20 IU/ml and 2 samples below detection limit 20 IU/ml. 16 cases got confirmed diagnosis of negative HIV antibody by follow-up WB test, and their VL were all TND. Conclusions HIV antibody detection results can be identificated fastly and accurately by high precision detection of viral load. And the time for follow-up will be.shorten.The disease can be accurately judged early. The National Technical Specification for AIDS Testing(2015 Revision)also states that viral load testing as an effective auxiliary detection method for indeterminate samples of HIV antibody. High-precision detection of viral load is of great significance. -
Key words:
- HIV /
- Antibody indeterminate /
- Viral load test /
- Western blot
-
我国把艾滋病防治作为卫生工作的一个重点,目前,我国艾滋病主要是经性行为传播[1]。艾滋病已从高危人群向一般人群扩散,云南省所处的地理位置金三角,又是国际贩毒通道之一,人员结构复杂,人口流动性大,艾滋病病毒(human immunedeficiency virus,HIV)感染高发。艾滋病早期治疗可以促进CD4+T细胞计数的恢复,同时HIV病毒库数量得以减少[2]。WHO于2015年提出确诊HIV感染后,不管CD4+T细胞数量如何,都建议立即进行抗病毒治疗[3],因此,艾滋感染者的及时诊断至关重要。HIV确证最常用的方法是蛋白印迹法(western blotting,WB),假阳性率低,但是不确定结果也很多[4]。《全国艾滋病检测技术规范》(2015修订版)[5]指出,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。本文通过对102例首次WB带型结果不确定样本进行病毒载量VL试验及随访,探讨核酸检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值,为艾滋病患者精准临床诊疗提供一定的数据支持。
1. 资料与方法
1.1 样本来源
2016年1月至2019年12月,昆明市第三人民医院艾滋病确证实验室WB检测的102例HIV抗体不确定病例,病例来源于普通门诊、自愿咨询检测(voluntary counseling and testing,VCT)的门诊及住院病例。
1.2 主要仪器和试剂
免疫印迹法:采用TECAN PROFIBLOT48全自动蛋白印迹仪和新加坡MP生物医学亚太有限公司HIV l+2型抗体检测试剂盒,严格按照试剂盒说明书进行操作,根据《全国艾滋病检测技术规范》(2015年修订版)[5]和试剂盒说明书对检测结果进行判读。
病毒载量检测:采用Roche公司的COBAS Ampli Prep /COBAS Taq Man全自动核酸扩增与检测系统。检测灵敏度20拷贝/mL。
CD4细胞计数:检测使用美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪及相关的试剂。
1.3 方法
采集入组的102例HIV抗体不确定病例血液1周内进行CD4细胞计数及病毒载量VL试验,根据《全国艾滋病检测技术规范》(2015修订版)[5]的要求,对102例不确定样本于2~4周后进行随访,血浆采集进行WB检测,随访期间若带型没有进展或呈阴性反应,则报告阴性,若出现阳性反应,即报告阳性。
1.4 统计学处理
采用SPSS15.0统计软件进行分析,计数资料用[n(%)]表示。
2. 结果
2.1 HIV抗体不确定人群分布特征
102例HIV抗体不确定受检者男性占比(64.8%)高于女性,其中男男性行为者12例。不同年龄段中,以20~60岁受检者所占比例最高(67.6%),20岁以下及60岁以上人群都出现一定的占比。HIV抗体不确定受检者CD4+T淋巴细胞计数多大于400 /μL,见表1。
表 1 HIV抗体不确定人群分布特征[n(%)]Table 1. The distribution characteristics of indeterminate HIV antibody population [n(%)]特征 例数 性别 男 66(64.8) 女 36(35.1) 年龄段(岁) < 20 22(21.6) 20~60 69(67.6) > 60 11(10.8) CD4+T淋巴细胞计数(cells/μL) ≤ 200 8(4.9) 201~400 26(25.5) ≥ 400 68(69.6) 2.2 HIV抗体不确定样本首次检测WB带型分布情况
102例HIV抗体不确定样本共有12种WB带型模式,其中独立带型模式共计27例,以p24、gp160占比最高,分别为15.7%、7.8%。混合带型模式中,gp160 + P24、gp160 + gp120 + p24占比最高,分别为27.5%、18.6%,见表2。
表 2 HIV抗体不确定样本首次检测WB带型分布情况[n(%)]Table 2. First detection of WB band distribution in indeterminate HIV antibody specimens [n(%)]带型 例数 p66 1(1.0) p17 1(1.0) p24 16(15.7) gp41 1(1.0) gp160 8(7.8) gp160 + P24 28(27.5) gp120 + P24 4(3.9) gp160 + gp120 5(4.9) p24 + p66 5(4.9) gp160 + gp120 + gp41 8(7.8) gp160 + gp120 + p24 19(18.6) gp160 + p17 + p24 6(5.9) 2.3 HIV不确定样本实验室检测及随访结果
102例HIV抗体不确定受检者VL值大于5 000者占比最高(71/102)。病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳,2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,最终随访结果为阳性,16例病毒载量检测结果为TND,随访检测后诊断为“HIV抗体阴性”,排除感染,其中7名检测者为进行母婴阻断治疗小于18个月龄婴幼儿,5名检测者为梅毒感染的孕产妇,2名受检者为HBV感染者,另外2名受检者为TB感染者,见表3。
表 3 HIV不确定样本实验室检测及随访结果(n)Table 3. Laboratory tests and follow up results in indeterminate HIV antibody specimens(n)VL(IU/mL) (n) 随访结果 阳性 阴性 > 5000 71 71 0 20~5000 13 13 0 < 20 2 2 0 TND 16 0 16 3. 讨论
国内关于HIV不确定带型与临床转归的研究较多。彭瑾瑜等[6]对106例“HIV抗体不确定”病例研究后发现20种WB带型模式,以gp160 +P24,p24,gp160 + p51 + p24 + p66三种带型模式为主。冯霞等[7]的研究发现了HIV不确定带型模式10种,p24、gp160、gp160 + P24三种带型模式占比最多,单一带型p24、p17、gp160阳转率最低(p24带型阳转率尤为低下),3条带带型gp160 + gp120 + gp41、gp160 + p17 + p24阳转率均为100%。黄丹梅等[8]对71例“HIV抗体不确定”病例研究后发现HIV不确定带型模式10种,主要集中于p24、gp160、gp160 + P24三种带型模式,gp160 + p66 + p51 + p24、gp160 + p66 + p24、gp160 + gp120p + p24 + p17、gp160 + gp120 + gp41、gp160 + p24 + gp41五种带型模式阳转率均为100%。HIV不确定样本的WB带型分布非常复杂,各种带型临床转归的研究结果也不尽相同。本研究中发现HIV不确定带型模式12种,不确定结果条带构成主要为p24、gp160、gp160 + P24、gp160 + gp120 + p24,与尤佳女等[9]的研究结果相一致。但是不管WB带型如何分布,最终都能通过病毒载量的检测,提早对HIV抗体不确定受检者病情进行了准确判断,提示核酸检测可以作为HIV抗体不确定样本免疫检测的有效补充。
HIV抗体不确定结果主要见于HIV早期、晚期或终末期艾滋病、其他逆转录病毒感染及受检者病理生理性改变(自身免疫性疾病、怀孕等)引起生物学因素变化而导致的非特异性反应[10],给实验室检查和艾滋病防治工作带来诸多问题,受检者工作、生活及学习也会受到严重影响。从随访复检的结果中发现,本研究共收集WB不确定样本102例,核酸检测阳性的86例样本随访均转阳,核酸检测结果与WB结果一致。79例通过流行病学方面的调查,CD4+T淋巴细胞和核酸检测,以及随访复检等,最终被证实为HIV感染早期患者,HIV病毒载量检测均大于5 000 IU/mL。HIV感染早期,体内抗体产生较少,漏检风险较大,仅1~2条WB带型,但早期感染的HIV患者体内病毒量大,检测病毒载量时高阳性结果易出现[11],病毒载量检测可用于窗口期感染者的鉴别诊断。5例检测者CD4+T淋巴细胞计数结果分别为21 cells/μL、45 cells/μL、51 cells/μL、68 cells/μL和72 cells/μL,根据其流行病学史调查和临床症状推断为晚期感染的HIV患者,HIV病毒载量检测结果分别为2.69×106 IU/mL、4.54×105 IU/mL、5.74×103 IU/mL、4.26×104 IU/mL和8.70×105 IU/mL。艾滋病晚期患者,体内CD4+T淋巴细胞被HIV病毒破坏,免疫功能降低导致抗体产生功能受损,大量复制的病毒使血液中原有的抗体被中和[12],抗体检测是诊断的一个盲区,致使WB检测时不确定结果的出现,而核酸实验正好弥补了这个缺陷。核酸检测可以确定其感染状况并尽快提供抗病毒治疗,以免病情延误。2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,最终随访结果为阳性,提示只要有核酸检出,都应谨慎对待,HIV-RNA载量的高精度检测对病情的准确判断具有重要意义。
16例随访结果为阴性的受检者,病毒载量检测结果为TND,随访检测后诊断为“HIV抗体阴性”,说明核酸检测结果与WB结果一致。其中5例梅毒感染的孕产妇,2例HBV感染者和2例TB感染者,可能因为这部分感染者血液中的某些成分或病原体与WB试验标记的HIV抗原中共同抗原的存在,使交叉免疫反应发生,造成WB试验出现条带,干扰HIV感染的诊断。此外,7例随访结果为阴性的受检者为进行母婴阻断治疗大于18个月龄婴幼儿。阻止婴儿由血液途径感染HIV可以通过有效的母婴阻断措施实现,但母亲HIV抗体阳性,所生婴幼儿会从母亲处通过胎盘或哺乳获得HIV抗体,使WB试验出现条带,不过抗体持续存在时间最长不超过18个月[13]。病毒载量检测有助于提前明确诊断非感染者。
综上所述,病毒载量高精度检测意义重大,能快速准确鉴别不确定结果,缩短随访复查的时间,作为HIV抗体不确定样本的有效辅助检测手段,提早对病情准确判断,同时对18个月以内HIV抗体阳性的婴幼儿、处于HIV抗体窗口期、晚期或终末期艾滋病以及其他逆转录病毒感染等特殊免疫性的个体,在其鉴别诊断中发挥着重要作用。《全国艾滋病检测技术规范》(2015年修订版)[5]也指出,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。因此,对WB不确定样本应尽早进行核酸检测,积极应用HIV核酸检测技术实现艾滋病及早诊断治疗,为实现世卫组织提出的“2030全球消除艾滋病计划”提供技术支撑。
-
表 1 HIV抗体不确定人群分布特征[n(%)]
Table 1. The distribution characteristics of indeterminate HIV antibody population [n(%)]
特征 例数 性别 男 66(64.8) 女 36(35.1) 年龄段(岁) < 20 22(21.6) 20~60 69(67.6) > 60 11(10.8) CD4+T淋巴细胞计数(cells/μL) ≤ 200 8(4.9) 201~400 26(25.5) ≥ 400 68(69.6) 表 2 HIV抗体不确定样本首次检测WB带型分布情况[n(%)]
Table 2. First detection of WB band distribution in indeterminate HIV antibody specimens [n(%)]
带型 例数 p66 1(1.0) p17 1(1.0) p24 16(15.7) gp41 1(1.0) gp160 8(7.8) gp160 + P24 28(27.5) gp120 + P24 4(3.9) gp160 + gp120 5(4.9) p24 + p66 5(4.9) gp160 + gp120 + gp41 8(7.8) gp160 + gp120 + p24 19(18.6) gp160 + p17 + p24 6(5.9) 表 3 HIV不确定样本实验室检测及随访结果(n)
Table 3. Laboratory tests and follow up results in indeterminate HIV antibody specimens(n)
VL(IU/mL) (n) 随访结果 阳性 阴性 > 5000 71 71 0 20~5000 13 13 0 < 20 2 2 0 TND 16 0 16 -
[1] 李怡,廖斌,李婕,等. 2010~2015年昆明市嫖客人群艾滋病监测哨点的结果[J].昆明医科大学学报,2019,40(2):139-144. doi: 10.3969/j.issn.1003-4706.2019.02.028 [2] 王立林,赵锦,许晓绚,等. 一例早期治疗HIV窗口期献血者核酸筛查及血清学特性追踪分析[J].中国输血杂志,2018,31(12):1345-1348. [3] 中华医学会感染病学分会艾滋病学组,Diseases SoI,Association C M. 艾滋病诊疗指南第三版(2015版)[J].中华临床感染病杂志,2015,8(5):385-401. doi: 10.3760/cma.j.issn.1674-2397.2015.05.001 [4] Schwartlander B,Stover J,Hallett T,et al. Towards an improved investment approach for an effective response to HIV/AIDS[J]. Lancet,2011,377(9782):1-11. [5] 中国疾病预防控制中心. 全国艾滋病检测技术规范(2015修订版)[J]. 中国病毒病杂志, 2016, (6): 401-427. [6] 彭瑾瑜,贺健梅,江洋,等. 病毒载量试验对“HIV-1抗体不确定”病例诊断的效果评价[J].中国艾滋病性病,2018,24(9):866-869. [7] 冯霞,娄金丽,刘翠娥,等. HIV抗体不确定带型与临床转归的研究[J].北京医学,2019,41(6):448-450. [8] 黄丹梅. 71例HIV抗体不确定检测结果及随访分析[J].中国医师杂志,2019,21(2):272-274. doi: 10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2019.02.031 [9] 尤佳女,陈兵,许珂. HIV抗体确证实验不确定样本的筛查及随访[J].国际流行病学传染病学杂志,2019,46(1):34-38. doi: 10.3760/cma.j.issn.1673-4149.2019.01.008 [10] 马仲慧,陈兵,常浩,等. 非HIV感染者蛋白印迹试验不确定及假阳性结果的原因[J].中国艾滋病性病,2017,23(6):571-574. [11] 黑发欣,张启云,孙伟东,等. 病毒载量检测鉴别诊断HIV早期感染[J].中华微生物学和免疫学杂志,2008,28(6):557-559. doi: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.06.021 [12] Zhao J,Bai J,Shen K L,et al. Self-reported prevalence of childhood allergic diseases in three cities of China:A multicenter study[J]. BMC Public Health,2010,10:551-558. doi: 10.1186/1471-2458-10-551 [13] BrownE,Chi B H,Read J S,et a1. Determining an optimal testing strategy for infants at risk for mother-to-child transmission of HIV-1 during the late postnatal period[J]. AIDS,2008,22(17):2341-2346. doi: 10.1097/QAD.0b013e328317cc15 期刊类型引用(7)
1. 张之,卢静,徐晓琴,周莹,胡海洋,傅更锋. HIV-1抗体不确定和阴性者WB条带及病毒载量分析. 医学研究生学报. 2022(02): 131-135 . 百度学术
2. 熊德琴,陈绛青,李美琦,谭佳俊,杨婷. HIV抗体检测结果不确定病例的核酸定量检测分析. 实用临床医学. 2022(02): 9-11 . 百度学术
3. 蒋春云,刘秀芳,诸葛银,王传宝,尹德清. HIV抗体蛋白印迹试验不确定19例患者的随访检测及分析. 中国皮肤性病学杂志. 2022(07): 802-806 . 百度学术
4. 陈会超,董莉娟,陈敏. 从质量控制角度分析HIV抗体不确定结果的产生和处理. 中国艾滋病性病. 2022(09): 1097-1101 . 百度学术
5. 蔡雅. HIV快速检测技术法与ELISA法在艾滋筛查中应用价值. 口岸卫生控制. 2022(03): 52-54 . 百度学术
6. 杨令芝,黄茂,王烤,邓卓娜,王焱,尹桃,孟立军. 都江堰地区73例WB确证阴性和不确定样本的HIV核酸结果及追踪情况. 中华检验医学杂志. 2022(11): 1150-1154 . 百度学术
7. 叶瑞国,庞贤武,梁淑家,庞晓泸,沈平. HIV抗体不确定样本的影响因素研究进展. 预防医学论坛. 2021(08): 640-642 . 百度学术
其他类型引用(0)
-