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病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用

余婷婷 李晓非 王红英 张润武 丁彩梅 李丽华 白经 李冬玲 普冬

余婷婷, 李晓非, 王红英, 张润武, 丁彩梅, 李丽华, 白经, 李冬玲, 普冬. 病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用[J]. 昆明医科大学学报, 2020, 41(11): 130-133. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201126
引用本文: 余婷婷, 李晓非, 王红英, 张润武, 丁彩梅, 李丽华, 白经, 李冬玲, 普冬. 病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用[J]. 昆明医科大学学报, 2020, 41(11): 130-133. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201126
Ting-ting YU, Xiao-fei LI, Hong-ying WANG, Run-wu ZHANG, Cai-mei DING, Li-hua LI, Jing BAI, Dong-ling LI, Dong PU. Application of Viral Load Testing in Diagnosing 102 Cases of Indeterminate HIV Antibody[J]. Journal of Kunming Medical University, 2020, 41(11): 130-133. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201126
Citation: Ting-ting YU, Xiao-fei LI, Hong-ying WANG, Run-wu ZHANG, Cai-mei DING, Li-hua LI, Jing BAI, Dong-ling LI, Dong PU. Application of Viral Load Testing in Diagnosing 102 Cases of Indeterminate HIV Antibody[J]. Journal of Kunming Medical University, 2020, 41(11): 130-133. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201126

病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20201126
基金项目: 昆明市科技计划基金资助项目(2017-1-S-15573)
详细信息
    作者简介:

    余婷婷(1989~),女,云南曲靖人,医学硕士,主管检验技师,主要从事感染性疾病分子生物学研究工作

    通讯作者:

    普冬,E-mail:ludipu@sina.com

  • 中图分类号: R512.91

Application of Viral Load Testing in Diagnosing 102 Cases of Indeterminate HIV Antibody

  • 摘要:   目的  探讨病毒载量检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值。  方法  选取2016年1月至2019年12月期间昆明市第三人民医院门诊及住院102例HIV抗体不确定病例,1周内进行COBAS TaqMan HIV-1 Test v2.0病毒载量检测和CD4细胞计数,2~4周后随访蛋白印迹实验(western blotting,WB)检测,综合比对分析两种方法的检测结果。  结果  102例HIV抗体不确定病例,病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳,2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,随访结果最终为阳性,病毒载量检测结果为TND的16例病例,随访结果为阴性。  结论  高精度病毒载量检测对HIV抗体不确定结果能快速准确鉴别,缩短随访复查的时间,提早对病情准确判断,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。
  • 我国把艾滋病防治作为卫生工作的一个重点,目前,我国艾滋病主要是经性行为传播[1]。艾滋病已从高危人群向一般人群扩散,云南省所处的地理位置金三角,又是国际贩毒通道之一,人员结构复杂,人口流动性大,艾滋病病毒(human immunedeficiency virus,HIV)感染高发。艾滋病早期治疗可以促进CD4+T细胞计数的恢复,同时HIV病毒库数量得以减少[2]。WHO于2015年提出确诊HIV感染后,不管CD4+T细胞数量如何,都建议立即进行抗病毒治疗[3],因此,艾滋感染者的及时诊断至关重要。HIV确证最常用的方法是蛋白印迹法(western blotting,WB),假阳性率低,但是不确定结果也很多[4]。《全国艾滋病检测技术规范》(2015修订版)[5]指出,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。本文通过对102例首次WB带型结果不确定样本进行病毒载量VL试验及随访,探讨核酸检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值,为艾滋病患者精准临床诊疗提供一定的数据支持。

    2016年1月至2019年12月,昆明市第三人民医院艾滋病确证实验室WB检测的102例HIV抗体不确定病例,病例来源于普通门诊、自愿咨询检测(voluntary counseling and testing,VCT)的门诊及住院病例。

    免疫印迹法:采用TECAN PROFIBLOT48全自动蛋白印迹仪和新加坡MP生物医学亚太有限公司HIV l+2型抗体检测试剂盒,严格按照试剂盒说明书进行操作,根据《全国艾滋病检测技术规范》(2015年修订版)[5]和试剂盒说明书对检测结果进行判读。

    病毒载量检测:采用Roche公司的COBAS Ampli Prep /COBAS Taq Man全自动核酸扩增与检测系统。检测灵敏度20拷贝/mL。

    CD4细胞计数:检测使用美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪及相关的试剂。

    采集入组的102例HIV抗体不确定病例血液1周内进行CD4细胞计数及病毒载量VL试验,根据《全国艾滋病检测技术规范》(2015修订版)[5]的要求,对102例不确定样本于2~4周后进行随访,血浆采集进行WB检测,随访期间若带型没有进展或呈阴性反应,则报告阴性,若出现阳性反应,即报告阳性。

    采用SPSS15.0统计软件进行分析,计数资料用[n(%)]表示。

    102例HIV抗体不确定受检者男性占比(64.8%)高于女性,其中男男性行为者12例。不同年龄段中,以20~60岁受检者所占比例最高(67.6%),20岁以下及60岁以上人群都出现一定的占比。HIV抗体不确定受检者CD4+T淋巴细胞计数多大于400 /μL,见表1

    表  1  HIV抗体不确定人群分布特征[n(%)]
    Table  1.  The distribution characteristics of indeterminate HIV antibody population [n(%)]
    特征例数
    性别
     男 66(64.8)
     女 36(35.1)
    年龄段(岁)
     < 20 22(21.6)
     20~60 69(67.6)
     > 60 11(10.8)
    CD4+T淋巴细胞计数(cells/μL)
     ≤ 200 8(4.9)
     201~400 26(25.5)
     ≥ 400 68(69.6)
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    102例HIV抗体不确定样本共有12种WB带型模式,其中独立带型模式共计27例,以p24、gp160占比最高,分别为15.7%、7.8%。混合带型模式中,gp160 + P24、gp160 + gp120 + p24占比最高,分别为27.5%、18.6%,见表2

    表  2  HIV抗体不确定样本首次检测WB带型分布情况[n(%)]
    Table  2.  First detection of WB band distribution in indeterminate HIV antibody specimens [n(%)]
    带型例数
    p66 1(1.0)
    p17 1(1.0)
    p24 16(15.7)
    gp41 1(1.0)
    gp160 8(7.8)
    gp160 + P24 28(27.5)
    gp120 + P24 4(3.9)
    gp160 + gp120 5(4.9)
    p24 + p66 5(4.9)
    gp160 + gp120 + gp41 8(7.8)
    gp160 + gp120 + p24 19(18.6)
    gp160 + p17 + p24 6(5.9)
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    102例HIV抗体不确定受检者VL值大于5 000者占比最高(71/102)。病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳,2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,最终随访结果为阳性,16例病毒载量检测结果为TND,随访检测后诊断为“HIV抗体阴性”,排除感染,其中7名检测者为进行母婴阻断治疗小于18个月龄婴幼儿,5名检测者为梅毒感染的孕产妇,2名受检者为HBV感染者,另外2名受检者为TB感染者,见表3

    表  3  HIV不确定样本实验室检测及随访结果(n)
    Table  3.  Laboratory tests and follow up results in indeterminate HIV antibody specimens(n)
    VL(IU/mL)n随访结果
    阳性阴性
    > 5000 71 71 0
    20~5000 13 13 0
    < 20 2 2 0
    TND 16 0 16
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    国内关于HIV不确定带型与临床转归的研究较多。彭瑾瑜等[6]对106例“HIV抗体不确定”病例研究后发现20种WB带型模式,以gp160 +P24,p24,gp160 + p51 + p24 + p66三种带型模式为主。冯霞等[7]的研究发现了HIV不确定带型模式10种,p24、gp160、gp160 + P24三种带型模式占比最多,单一带型p24、p17、gp160阳转率最低(p24带型阳转率尤为低下),3条带带型gp160 + gp120 + gp41、gp160 + p17 + p24阳转率均为100%。黄丹梅等[8]对71例“HIV抗体不确定”病例研究后发现HIV不确定带型模式10种,主要集中于p24、gp160、gp160 + P24三种带型模式,gp160 + p66 + p51 + p24、gp160 + p66 + p24、gp160 + gp120p + p24 + p17、gp160 + gp120 + gp41、gp160 + p24 + gp41五种带型模式阳转率均为100%。HIV不确定样本的WB带型分布非常复杂,各种带型临床转归的研究结果也不尽相同。本研究中发现HIV不确定带型模式12种,不确定结果条带构成主要为p24、gp160、gp160 + P24、gp160 + gp120 + p24,与尤佳女等[9]的研究结果相一致。但是不管WB带型如何分布,最终都能通过病毒载量的检测,提早对HIV抗体不确定受检者病情进行了准确判断,提示核酸检测可以作为HIV抗体不确定样本免疫检测的有效补充。

    HIV抗体不确定结果主要见于HIV早期、晚期或终末期艾滋病、其他逆转录病毒感染及受检者病理生理性改变(自身免疫性疾病、怀孕等)引起生物学因素变化而导致的非特异性反应[10],给实验室检查和艾滋病防治工作带来诸多问题,受检者工作、生活及学习也会受到严重影响。从随访复检的结果中发现,本研究共收集WB不确定样本102例,核酸检测阳性的86例样本随访均转阳,核酸检测结果与WB结果一致。79例通过流行病学方面的调查,CD4+T淋巴细胞和核酸检测,以及随访复检等,最终被证实为HIV感染早期患者,HIV病毒载量检测均大于5 000 IU/mL。HIV感染早期,体内抗体产生较少,漏检风险较大,仅1~2条WB带型,但早期感染的HIV患者体内病毒量大,检测病毒载量时高阳性结果易出现[11],病毒载量检测可用于窗口期感染者的鉴别诊断。5例检测者CD4+T淋巴细胞计数结果分别为21 cells/μL、45 cells/μL、51 cells/μL、68 cells/μL和72 cells/μL,根据其流行病学史调查和临床症状推断为晚期感染的HIV患者,HIV病毒载量检测结果分别为2.69×106 IU/mL、4.54×105 IU/mL、5.74×103 IU/mL、4.26×104 IU/mL和8.70×105 IU/mL。艾滋病晚期患者,体内CD4+T淋巴细胞被HIV病毒破坏,免疫功能降低导致抗体产生功能受损,大量复制的病毒使血液中原有的抗体被中和[12],抗体检测是诊断的一个盲区,致使WB检测时不确定结果的出现,而核酸实验正好弥补了这个缺陷。核酸检测可以确定其感染状况并尽快提供抗病毒治疗,以免病情延误。2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL,最终随访结果为阳性,提示只要有核酸检出,都应谨慎对待,HIV-RNA载量的高精度检测对病情的准确判断具有重要意义。

    16例随访结果为阴性的受检者,病毒载量检测结果为TND,随访检测后诊断为“HIV抗体阴性”,说明核酸检测结果与WB结果一致。其中5例梅毒感染的孕产妇,2例HBV感染者和2例TB感染者,可能因为这部分感染者血液中的某些成分或病原体与WB试验标记的HIV抗原中共同抗原的存在,使交叉免疫反应发生,造成WB试验出现条带,干扰HIV感染的诊断。此外,7例随访结果为阴性的受检者为进行母婴阻断治疗大于18个月龄婴幼儿。阻止婴儿由血液途径感染HIV可以通过有效的母婴阻断措施实现,但母亲HIV抗体阳性,所生婴幼儿会从母亲处通过胎盘或哺乳获得HIV抗体,使WB试验出现条带,不过抗体持续存在时间最长不超过18个月[13]。病毒载量检测有助于提前明确诊断非感染者。

    综上所述,病毒载量高精度检测意义重大,能快速准确鉴别不确定结果,缩短随访复查的时间,作为HIV抗体不确定样本的有效辅助检测手段,提早对病情准确判断,同时对18个月以内HIV抗体阳性的婴幼儿、处于HIV抗体窗口期、晚期或终末期艾滋病以及其他逆转录病毒感染等特殊免疫性的个体,在其鉴别诊断中发挥着重要作用。《全国艾滋病检测技术规范》(2015年修订版)[5]也指出,核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。因此,对WB不确定样本应尽早进行核酸检测,积极应用HIV核酸检测技术实现艾滋病及早诊断治疗,为实现世卫组织提出的“2030全球消除艾滋病计划”提供技术支撑。

  • 表  1  HIV抗体不确定人群分布特征[n(%)]

    Table  1.   The distribution characteristics of indeterminate HIV antibody population [n(%)]

    特征例数
    性别
     男 66(64.8)
     女 36(35.1)
    年龄段(岁)
     < 20 22(21.6)
     20~60 69(67.6)
     > 60 11(10.8)
    CD4+T淋巴细胞计数(cells/μL)
     ≤ 200 8(4.9)
     201~400 26(25.5)
     ≥ 400 68(69.6)
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    表  2  HIV抗体不确定样本首次检测WB带型分布情况[n(%)]

    Table  2.   First detection of WB band distribution in indeterminate HIV antibody specimens [n(%)]

    带型例数
    p66 1(1.0)
    p17 1(1.0)
    p24 16(15.7)
    gp41 1(1.0)
    gp160 8(7.8)
    gp160 + P24 28(27.5)
    gp120 + P24 4(3.9)
    gp160 + gp120 5(4.9)
    p24 + p66 5(4.9)
    gp160 + gp120 + gp41 8(7.8)
    gp160 + gp120 + p24 19(18.6)
    gp160 + p17 + p24 6(5.9)
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    表  3  HIV不确定样本实验室检测及随访结果(n)

    Table  3.   Laboratory tests and follow up results in indeterminate HIV antibody specimens(n)

    VL(IU/mL)n随访结果
    阳性阴性
    > 5000 71 71 0
    20~5000 13 13 0
    < 20 2 2 0
    TND 16 0 16
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-10-12
  • 网络出版日期:  2020-12-03
  • 刊出日期:  2020-11-25

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