茯苓95%乙醇提取物三萜类化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

陈兴龙; 张敏; 杨琪瑶; 罗永谋; 曹婷婷; 唐丽萍; 李勇

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20211101

茯苓95%乙醇提取物三萜类化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20211101

1.
云南中医药大学中药学院暨云南省南药可持续利用重点实验室，云南昆明　650504
2.
昆明医科大学附属甘美医院/昆明市第一人民医院眼科，云南昆明　650224
3.
昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明　650500

基金项目: 国家自然科学基金资助项目（31860087）；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目（2019FE001（-271））

详细信息

作者简介:
陈兴龙（1989～），男，云南曲靖人，理学博士，讲师，主要从事天然产物化学研究工作

通讯作者:
李勇，E-mail：1069237727@qq.com

中图分类号: R284.1
计量
- 文章访问数: 3570
- HTML全文浏览量: 2017
- PDF下载量: 151
- 被引次数: 0
出版历程
- 收稿日期: 2021-09-25
- 网络出版日期: 2021-11-15
- 刊出日期: 2021-11-30

Analysis of Triterpene Chemical Constituents in Poria cocos 95% Ethanol Extract via UPLC-IT-TOF/MS

1.
College of Traditional Chinese Medicine & Yunnan Key Laboratory of Southern Medicine Utilization，Yunnan University of Chinese Medicine，Kunming Yunnan 650504
2.
Dept. of Ophthalmology，The First Hospital of Kunming，Kunming Yunnan 650224
3.
School of Pharmaceutical Science and Yunnan Key Laboratory of Pharmacology of Natural Products，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500，China

摘要

摘要: 目的采用超高效液相色谱串联离子阱飞行时间质谱（UPLC-IT-TOF/MS）技术定性分析茯苓95%乙醇提取物的三萜类化学成分。方法采用UHPLC XB-C18色谱柱，甲酸/水(0.05/100，v/v)-乙腈作为流动相，梯度洗脱，流速为0.20 mL/min；紫外检测波长范围为190～400 nm。使用ESI离子源，三氟乙酸钠校正，电喷雾正负离子同时检测，Shimadzu Composition Formula Predictor软件定性分析茯苓三萜类化合物。结果通过多级质谱数据分析，结合氮规则和Scifinder数据库检索，从茯苓醇提取物中鉴定了22个三萜类成分，结构类型包括羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜和其他羊毛甾三萜类型。结论通过LC-MS快速分析了茯苓醇提取物中三萜类成分，为其药效物质基础和质量控制提供了依据。
- 茯苓 /
- 三萜 /
- UPLC-IT-TOF/MS
Abstract: Objective To evaluate the triterpene chemical constituents in Poria cocos 95% ethanol extract by ultra-performance liquid chromatography ion trap time-of-flight mass spectrometry （UPLC-IT-TOF/MS） method. Methods UPLC was performed with the UHPLC XB-C18 and methanoic acid/water （0.05/100, v/v）-acetonitrile solution （gradient elution） was employed with a flow rate of 0.2 mL·min^-1. The detection wavelength range was 190～400 nm. Triterpene chemical compositions in Poria cocos were qualitatively analyzed using ESI ion with electrospray positive and negative ions simultaneous detection, sodium trifluoroacetace correction and Shimadzu Composition Formula Predictor software. Results Through the analysis of the multistage tandem mass spectrometry, combined with the application of nitrogen rule and the Scifinder database search, 22 triterpenes with lanostan-8-en, lanostan-7, 9（11）-diene type and other lanostane triterpene were identified. Conclusion This study quickly analyzed the triterpenes in the Poria cocos ethanol extract via LC-MS, which provided the basis for the pharmacodyamic material basis and quality control.
- Poria cocos /
- Triterpene /
- UPLC-IT-TOF/MS

HTML全文

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos （Schw.） Wolf的干燥菌核，寄生于松科植物的根茎上，埋于土壤下繁衍而成。茯苓又名松苓、茯菟、茯灵，其野生资源稀少，栽培品种主要产于安徽、湖北、湖南、云南、贵州等地。茯苓味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经；具有利水渗湿，健脾，宁心功效；用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。茯苓始载于《神农本草经》，应用广泛，不仅是多种方剂和中成药的原料，有“十药九茯苓”之说，也添加在各种食品中，是沿用千年的药食两用的中药材^[1]。羊毛甾烷四环三萜类化合物是茯苓主要成分之一，其结构类型主要分为四种，分别为羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7，9（11）-二烯型三萜、3，4-开环-羊毛甾-8-烯型三萜、3，4-开环-羊毛甾-7，9（11）-二烯型三萜^[2]。现代药理学研究结果显示，茯苓三萜类化合物是茯苓传统药效和拓展功效的物质基础^[3-9]。本文采用超高效液相色谱串联离子阱飞行时间质谱（UPLC-IT-TOF/MS）技术定性分析云南大理产茯苓95%乙醇提取物的三萜类化学成分，并对其裂解规律进行总结，为该产地茯苓的药效物质基础解析和质量控制提供参考依据。

1. 材料与方法

1.1 仪器

LC-MS分析所用仪器为岛津公司（Shimaduz，Kyoto，Japan）生产的LCMS-IT-TOF仪。液相色谱仪控制器型号为CBM-20A，泵型号为LC-30AD，自动进样器型号为SIL-30AC，脱气装置型号为DGU-20A5，二极管阵列检测器为SPD-M20A，柱温箱型号为CTO-20AC。

1.2 试药和试剂

茯苓购自昆明市螺蛳湾中药材市场（产自云南大理），经昆明医科大学唐丽萍教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos （Schw.） Wolf的干燥菌核；色谱纯乙腈购自德国默克公司，色谱纯甲酸购自上海阿拉丁试剂公司，超纯水由默克MingCheTM-D24UV设备制备。

1.3 供试品溶液制备

干燥药材茯苓10 g，粉碎，用95%乙醇250 mL浸泡1 h，加热至微沸，加热1 h，过滤浓缩得浸膏1.8 g。取5 mg 浸膏，加入2 mL甲醇超声溶解，离心（10000 r/min×10 min）取上清液进样。

1.4 液相色谱条件

色谱柱为UHPLC XB-C18色谱柱（2.1×100 mm，1.8 µm），柱温30℃，紫外检测波长范围为190～400 nm。流动相A：甲酸/水（0.05/100，v/v），B：乙腈；流速为0.20 mL/min；梯度洗脱条件：起始梯度为5% B，0～50 min，5%～90 % B；50～55 min，90% B；55～56 min，90%～5% B；56～60 min，5% B。进样量为：2 µL。

1.5 质谱条件

质谱条件：离子源为ESI源，三氟乙酸钠校正，电喷雾正负离子同时检测。分析条件如下：喷雾电压为4.50 kV或− 3.50 kV；检测电压为1.65 kV；旋转式真空泵压力为71.0 Pa；干燥气压力为110.0 kPa；喷雾气为氮气，流速为1.5 L/min；曲形裂解器（CDL）温度为200 ℃；加热模块温度为200 ℃；离子捕获时间为10 ms；母离子选择范围为m/z ±3.0 Da；裂解能量（CID）为50%；裂解气为氩气，扫描范围为m/z 100～1000。

1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法

Shimadzu Composition Formula Predictor软件用于预测分子式，并通过多级质谱数据分析，结合氮规则和Scifinder数据库检索推断化合物的基本结构信息。

2. 结果

茯苓的95%乙醇提取物在实验色谱、质谱条件下响应良好，经过分析发现其主要化合物为羊毛甾烷型四环三萜，保留时间集中在15～50 min之间，最大离子流图（BPC）如图1所示。共分析出24个羊毛甾烷型四环三萜类成分，鉴定了22个，化学结构如图2所示。

图 1 茯苓在LC-MS分析条件下的最大离子流图

Figure 1. Base peak chromatogram （BPC） of Poria cocos in both positive （1BPC） and negative ion mode （3BPC）

下载: 全尺寸图片幻灯片

图 2 茯苓羊毛甾烷型三萜的化学结构

Figure 2. The lanostane triterpenoids chemical structures of Poria cocos

下载: 全尺寸图片幻灯片

色谱峰的鉴定结果如表1所示，主要展示色谱峰保留时间、分子量、分子式、二级质谱碎片以及化合物名称等。根据化合物的结构不同，将识别到的色谱峰分为三类，包括羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7，9（11）-二烯型三萜和其他羊毛甾三萜类型，通过不同类型化合物的结构特征来说明其鉴别过程。

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（1）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （1）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI⁻ （误差，mDa）	化合物名称
1	17.51	C₃₀H₄₈O₅	488	[M+Na]⁺ 511.3328 (−6.6) MSⁿ: 511-493.3316 (C₃₀H₄₆O₄, +2.8), 453.3319 (C₃₀H₄₄O₃, −4.4)	[M−H]⁻487.3402 (−2.7)	Daedaleanic acid B^[10]
2	19.15	C₃₀H₄₆O₆	502	[M+Na]⁺ 525.3301 (+11.4)	[M−H]⁻501.3164 (−5.8)	Pinicolic acid F ^[9]
3	19.90	C₃₁H₄₈O₅	500	MSⁿ: 483.3468 (C₃₁H₄₆O₄, −0.1), 465.3319 (C₃₁H₄₄O₃, −4.4)	[M−H]⁻499.3427 (−0.2)	29α-羟基去氢土莫酸 29α-Hydroxydehy-dropachymic acid^[14]
4	19.90	C₃₀H₄₈O₆	504	[M+Na]⁺ 527.3331 (−1.2) MSⁿ: 527- 495.3077 (C₂₉H₄₄O₅, +6.3), 437.2886 (C₂₇H₄₂O₃, −14.0)	[M−H]⁻503.3373 (−0.5)	-
5	21.69	C₃₁H₄₈O₆	516	[M+Na]⁺539.3047 (+6.8) MSⁿ: 539- 521.2809 (C₃₁H₄₆O₅, −6.5), 507.2633 (C₃₀H₄₄O₅, −4.6)	[M−H]⁻515.3056 (+4.2)	5,8α-Dioxy-3β,16α-dihydroxylanosta-7, 24- dien-21-oic acid^[18]
6	21.97	C₃₁H₄₆O₆	514	[M+H]⁺515.3331 (−3.6) MSⁿ: 515- 497.3360 (C₃₁H₄₄O₅, +9.8), 443.2839 (C₃₁H₃₈O₂, −10.6), 433.3267 (C₃₀H₄₀O₂, +16.6), 425.2996 (C₂₈H₄₀O₃, −5.4), 415.2933 (C₃₀H₃₈O, −6.2), 385.2397 (C₂₄H₃₂O₄, +2.4), 377.2199 (C₂₅H₂₈O₃, +8.8), 335.2455 (C₂₄H₃₀O, +8.6), 253.1655 (C₁₈H₂₀O, +6.8), 247.1670 (C₁₆H₂₂O₂, −2.3), 229.1583 (C₁₆H₂₀O, −0.4), 201.1704 (C₁₅H₂₀, +6.6)	[M−H]⁻513.3151 (−7.1) MSⁿ: 513- 483.3167 (C₃₁H₄₆O₄, −5.6)	5α,8α-过氧化去氢土莫酸 5α,8α-Peroxydehydrotumulosic acid^[19]
7	22.54	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3287 (−13.1) MSⁿ: 481.3308 ( (C₃₁H₄₄O₄, −0.4), 463.3147 (C₃₁H₄₂O₃, −6.0)	[M−H]⁻497.3193 (−7.9) MSⁿ: 497- 403.2418 (C₂₄H₂₆O₅, −7.2), 389.2435 (C₂₇H₃₄O₂, −5.1), 371.2336(C₂₇H₃₂O, −4.4), 355.2131 (C₂₆H₂₈O, +6.4)	6α-羟基猪苓酸C 6α-Hydroxypolyporenic acid C^[11]
8	23.69	C₃₃H₄₈O₈	572	[M+H]⁺573.3312 (−11.1)	[M−H]⁻571.3213 (−6.3)	3-(2-羟基乙酰氧基)- 5α,8α-过氧化去氢土莫酸 3-(2-hydroxyacetoxy)- 5α, 8α-peroxydehydrotumulosic acid ^[20]
9	25.78	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3433 (+1.5) MSⁿ: 481.3408 ( (C₃₁H₄₄O₄, +9.6)- 451.3147 (C₃₀H₄₂O₃, −1.4), 435.2955 (C₂₉H₃₈O₃, +6.2), 325.2132 (C₂₂H₂₈O₂, −3.0), 299.2112 (C₂₀H₂₆O₂, +10.6)	[M−H]⁻497.3236 (−3.6)	-

下载: 导出CSV

| 显示表格

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（2）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （2）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI^- （误差，mDa）	化合物名称
10	28.42	C₃₂H₅₀O₆	530	[M+Na]⁺553.3443 (−5.7) MSⁿ: 553- 535.3422 (C₃₂H₄₈O₅, +2.8), 495.3437 (C₃₀H₄₈O₄, −0.8), 477.3274 (C₃₀H₄₆O₃, −6.5), 435.3364 (C₂₈H₄₄O₂,+13.0), 353.2548 (C₂₂H₃₄O₂, +9.7)	[M−H]⁻529.3461 (−7.4)	3-乙酰氧基-16α,26-二羟基-羊毛甾-8,24-二烯-21-酸 3- Acetoxy-16α,26-dihydroxy-lanosta-8,24-dien-21-oic acid^[10]
11	29.01	C₃₃H₅₀O₆	542	MSⁿ: 525.3513 (C₃₃H₄₈O₅, −6.2)- 507.3459 (C₃₃H₄₆O₄, −1.0), 465.3365 (C₃₁H₄₄O₃, +0.2), 447.3544 (C₃₂H₄₆O, −7.7)	[M−H]⁻541.3460 (−7.5)	6α-羟基去氢茯苓酸 6α-Hydroxy-dehydropachymic acid^[13]
12	31.15	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+Na]⁺485.3592 (−3.3) MSⁿ: 485- 467.3492 (C₃₁H₄₆O₃, −2.9), 449.3408 (C₃₁H₄₄O₂, −0.6), 311.2388 (C₂₂H₃₀O, +1.9), 293.2259 (C₂₂H₂₈, −0.5)	[M−H]⁻483.3413 (−6.7) MSⁿ: 483- 437.3393 (C₃₀H₄₆O₂, −3.2), 421.2978 (C₂₉H₄₂O₂, −13.4)	3β,15α-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸 3β,15α-dihydroxylanosta-7,9(11),24-trien-21-oic acid^[15]
13	30.27	C₃₁H₅₀O₄	486	[M+H]⁺ 487.3722 (−6.0) MSⁿ: 487- 469.3719 (C₃₁H₄₈O₃, +4.3), 451.3553 (C₃₁H₄₆O₂, −1.8), 343.2701 (C₂₃H₃₄O₂, +6.9), 313.2464 (C₂₂H₃₂O, −6.2), 295.2405 (C₂₂H₃₀, −1.5)	[M−H]⁻485.3570 (−6.6) MSⁿ: 483- 423.3371 (C₂₉H₄₄O₂,+10.2)	土莫酸 Tumulosic acid^[10-11]
14	31.74	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3368 (−5.0) MSⁿ: 499- 481.3292 (C₃₁H₄₄O₄, −2.0), 463.3291 (C₃₁H₄₂O₃, +8.4), 421.3024 (C₂₉H₄₀O₂, −7.7), 325.2198 (C₂₂H₂₈O₂, +3.8), 307.2102 (C₂₂H₂₆O, +4.6)	[M−H]⁻497.3199 (−7.3) MSⁿ: 497- 425.2942 (C₃₁H₃₈O, +9.2)	29-羟基猪苓酸 C 29-Hydroxypolyporenic acid C^[16]
15	33.26	C₃₃H₅₂O₆	544	[M+H]⁺ 545.3733 (−10.4) MSⁿ: 545- 527.3696 (C₃₃H₅₀O₅, −3.5), 451.3097 (C₃₁H₄₆O₂, +2.6), 433.3267 (C₃₁H₄₄O, −19.8), 295.2433 (C₂₂H₃₀,+2.3)	[M−H]⁻543.3623 (−6.8) MSⁿ: 543- 467.3227 (C₃₁H₄₈O₃, +9.6)	25-羟基茯苓酸 25-Hydroxypachimic acid^[11]
16	33.57	C₃₁H₄₆O₄	482	[M+H]⁺ 483.3420 (−4.9) MSⁿ: 483- 465.3327 (C₃₁H₄₄O₃, −3.6), 447.3246 (C₃₁H₄₂O₂, −1.2), 309.2214 (C₂₂H₂₈O, +0.1)	[M−H]⁻481.3266 (−5.7) MSⁿ: 481- 311.1817 (C₂₁H₂₈O₂, −14.0)	猪苓酸 C Polyporenic acid C^[11]
17	34.28	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+H]⁺ 485.33637 (+1.2) MSⁿ: 483- 467.3486 (C₃₁H₄₆O₃, −3.4), 449.3532 (C₃₁H₄₄O₂, +11.8), 311.2343 (C₂₂H₃₀O, −2.6), 293.2330 (C₂₂H₂₈,+6.6)	[M−H]⁻483.3378 (−10.2) MSⁿ:	3-表去氢土莫酸 3-epi-Dehydrotumulosic acid acid^[11]

下载: 导出CSV

| 显示表格

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（3）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （3）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI⁻ （误差，mDa）	化合物名称
18	34.89	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+H]⁺ 485.3589 (−3.6) MSⁿ: 483- 467.3526 (C₃₁H₄₆O₃, +0.6), 449.3377 (C₃₁H₄₄O₂, −3.7), 311.2408 (C₂₂H₃₀O, +3.9), 293.2265 (C₂₂H₂₈, 0.1)	[M−H]⁻483.3406 (−7.4) MSⁿ: 481- 337.2465 (C₂₄H₃₄O, −7.2)	去氢土莫酸 Dehydrotumulosic acid^[17]
19	38.63	C₃₃H₅₀O₅	526	[M+H]⁺ 527.3671(−6.0) MSⁿ: 527- 509.3564 (C₃₃H₄₈O₄, −6.1), 449.3398 (C₃₁H₄₄O₂, −1.6), 293.2240 (C₂₂H₂₈, −2.4)	[M−H]⁻525.3493 (−9.2) MSⁿ:	3-表去氢茯苓酸 3-epi-Dehydropachymic acid^[14]
20	39.64	C₃₂H₅₀O₅	514	[M+H]⁺ 515.3708(−2.3) MSⁿ: 515- 497.3555 (C₃₂H₄₆O₄, −7.0), 437.3398 (C₃₀H₄₄O₂, −1.6), 295.2422 (C₂₂H₃₀,+0.2)	[M−H]⁻513.3532 (−5.3)	3-O-乙酰基-16α-羟基松苓酸 3-O-Acetyl-16α-hydroxytrametenolic acid^[12]
21	40.64	C₃₃H₅₀O₅	526	[M+H]⁺ 527.3697 (−3.4) MSⁿ: 527- 509.3594 (C₃₃H₄₈O₄, −3.1), 449.3446 (C₃₁H₄₄O₂, +3.2), 353.2501 (C₂₄H₃₂O₂, +2.6), 293.2254 (C₂₂H₂₈, −1.0)	[M−H]⁻525.3511 (−7.4) MSⁿ: 525- 479.3471 (C₃₂H₄₈O₃, −6.0), 465.3351 (C₃₁H₄₆O₃, −2.3), 355.2295 (C₂₃H₃₂O₃, +1.6),	去氢茯苓酸dehydropachymic acid^[11]
22	41.87	C₃₃H₅₂O₅	528	[M+H]⁺ 529.3820 (−6.8) MSⁿ: 529- 511.3735 (C₃₃H₅₀O₄, −4.7), 451.3599 (C₃₁H₄₆O₂, −3.0), 295.2419 (C₂₂H₃₀, −0.1)	[M−H]⁻527.3666 (−7.6) MSⁿ: 527- 465.3330 (C₃₁H₄₆O₃, −4.4)	茯苓酸 Pachymic acid^[10-11]
23	45.90	C₃₀H₄₆O₃	454	[M+H]⁺ 455.3532 (+1.2) MSⁿ: 455- 437.3457 (C₃₀H₄₄O₂, +4.3), 311.2370 (C₂₂H₃₀O, +0.1), 295.2381 (C₂₂H₃₀, −3.9)	[M−H]⁻453.3342 (−3.2)	3-羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21酸 Dehydrotrametenolic acid^[12]
24	47.30	C₃₀H₄₈O₃	456	[M+H]⁺ 457.3663 (−1.3) MSⁿ: 457- 439.3502 (C₃₀H₄₆O₂, −6.9), 313.2445 (C₂₂H₃₂O, −8.1), 295.2463 (C₂₂H₃₀, +4.3)	[M−H]⁻455.3471 (−6.0)	3-氢化松苓酸 trametenolic acid^[13]

下载: 导出CSV

| 显示表格

A型羊毛甾-8-烯型三萜（1，10，13，15，20，22，24）主要结构特征核心结构四元环中的C-8和C-9位之间为双键，C-3位均有羟基或乙酰氧基取代；除了化合物24，C-16位均有α位羟基取代；化合物1中C-17侧链的C-24是羰基取代，其他化合物C-24位均为双键。对于A型化合物而言，较容易失去C-17位支链，且同时失去一个H₂O，形成含[M+H-C₉H₁₆O₂-H₂O]⁺的碎片离子。以色谱峰13为例，在正负离子模式下容易检测到其[M+H]⁺和 [M-H]^-离子，分别为m/z 487.3722和485.3570，预测其分子式为C₃₁H₅₀O₄，以m/z 487.3722为母离子进行轰击，检测到5个碎片，分别为m/z 469.3719 （C₃₁H₄₈O₃，+4.3），451.3553 （C₃₁H₄₆O₂，−1.8），343.2701 （C₂₃H₃₄O₂，+6.9），313.2464 （C₂₂H₃₂O，−6.2），295.2405 （C₂₂H₃₀，−1.5），推测其分别对应于[M+H-H₂O]⁺，[M+H-2H₂O]⁺，[M+H-CO₂-2H₂O-4CH₄]⁺，[M+H-C₉H₁₆O₂-H₂O]⁺，[M+H-C₉H₁₆O₂-2H₂O]⁺；通过查阅文献比对，茯苓中化合物土莫酸（Tumulosic acid）满足该裂解条件，因此将色谱峰13鉴定为土莫酸（Tumulosic acid）。色谱峰22的[M+H]⁺和[M-H]^-离子分别为m/z 529.3820和527.3666，预测其分子式为C₃₃H₅₂O₅，检测到丢失H₂O离子碎片m/z 511.3735 （C₃₃H₅₀O₄，−4.7），进一步裂解还形成了451.3599 （C₃₁H₄₆O₂，−3.0），295.2419 （C₂₂H₃₀，−0.1）等碎片离子，分别对应[M+H-CH₃COOH-H₂O]⁺，[M+H-CH₃COOH-H₂O-C₉H₁₆O₂]⁺，与茯苓酸（Pachymic acid）的裂解方式相符，因此将色谱峰22鉴定为茯苓酸（Pachymic acid）。图3展示了主要色谱峰的质谱图。

B型羊毛甾-7，9（11）-二烯型三萜（2，3，7，11～12，14，16～19，21，23）主要结构特征为核心结构四元环中的C-7、C-8位和C-9、C-11位之间形成异环双键，C-3位均有羟基、乙酰氧基或氧代取代，与A型相似，较容易失去C-17位支链，且同时失去一分子H₂O，形成含[M+H-C₉H₁₆O₂-H₂O]⁺的碎片离子。色谱峰14检测到其[M+H]⁺峰为m/z 499.3368，因此预测其分子式为C₃₁H₄₆O₅，m/z 481.3292 （C₃₁H₄₄O₄，−2.0），463.3291 （C₃₁H₄₂O₃，+8.4）是连续失去二个H₂O产生的碎片，m/z 421.3024 （C₂₉H₄₀O₂，−7.7）对应的是[M+H-H₂O-CO₂-CH₄]⁺碎片离子，m/z 325.2198 （C₂₂H₂₈O₂，+3.8）为失去C-17侧链和一个H₂O生成的[M+H-C₉H₁₆O₂-H₂O]⁺的碎片离子，m/z 307.2102 （C₂₂H₂₆O，+4.6）为失去C-17侧链和二个H₂O生成的[M+H-C₉H₁₆O₂-2H₂O]⁺的碎片离子，这些裂解行为与29-羟基猪苓酸 C （29-Hydroxypolyporenic acid C）相符，因此色谱峰14被鉴定为29-羟基猪苓酸 C （29-Hydroxypolyporenic acid C）。图3展示了主要色谱峰的质谱图。

C型其他羊毛甾三萜类型（5，6，8）的主要结构特征为C-5位和C-8位通过过氧键链接，因此该类型化合物的主要质谱裂解特征行为是C-5位和C-8位过氧基的丢失，色谱峰5和6分别检测到失去过氧基的碎片离子m/z 507.2633 （C₃₀H₄₄O₅，−4.6）和385.2397 （C₂₄H₃₂O₄，+2.4）、229.1583 （C₁₆H₂₀O，−0.4）；以及侧链羧基先裂解，再进一步裂解C-17侧链，形成丰富的离子碎片，并结合数据库搜索，可将其结构初步鉴定。

图 3 茯苓中主要色谱峰的质谱图

Figure 3. The mass spectrum of main chromatogram peaks in Poria cocos

下载: 全尺寸图片幻灯片

3. 讨论

我国茯苓人工栽培历史悠久，且有广泛的茯苓资源，但是茯苓的不同品种和不同地域是导致其有效成分差异的主要原因。UPLC-IT-TOF/MS结合了液相的快速分离能力和飞行时间质谱的准确结构鉴定功能的优点，具有高效分离能力、高分辨和高灵敏度的特性，故本文利用UPLC-IT-TOF/MS技术分析鉴定云南大理的茯苓95%乙醇提取物的化学成分，发现其主要化合物为羊毛甾烷四环三萜，结构类型包括A型羊毛甾-8-烯型三萜（1，10，13，15，20，22，24）^[9-13]、B型羊毛甾-7，9（11）-二烯型三萜（2，3，7，11～12，14，16～19，21，23）^[11-17]和C型其他羊毛甾三萜类型。该类化合物在ESI源正离子模式响应较好，较易检测到[M+H]⁺和[M+Na]⁺离子，其二级质谱碎片较为丰富。通过以[M+H]⁺或[M+Na]⁺离子作为母离子进行轰击，其主要裂解途径为失去核心结构四元环的羟基或者乙酰基，形成碎片同时C-17位侧链也容易失去，C-17位侧链含有羧基的化合物较容易脱羧再裂解C-17位侧链，形成含有22个碳原子的离子碎片，并通过将化合物的结构进行简单分离，总结其质谱裂解规律。

三萜类化合物是茯苓的主要化学成分之一，其已被报道具有免疫调节、抗炎及抗肿瘤等多种生物功效。研究结果显示，产自云南大理的茯苓95%乙醇提取物的主要成分是羊毛甾烷四环三萜类化合物，化合物结构特征是其他羊毛甾三萜类型（5，6，8）的C-5位和C-8位均通过过氧键链接，为进一步研究该种茯苓的化学成分和生物活性提供了科学依据。

图 1 茯苓在LC-MS分析条件下的最大离子流图

Figure 1. Base peak chromatogram （BPC） of Poria cocos in both positive （1BPC） and negative ion mode （3BPC）

下载: 全尺寸图片幻灯片

图 2 茯苓羊毛甾烷型三萜的化学结构

Figure 2. The lanostane triterpenoids chemical structures of Poria cocos

下载: 全尺寸图片幻灯片

图 3 茯苓中主要色谱峰的质谱图

Figure 3. The mass spectrum of main chromatogram peaks in Poria cocos

下载: 全尺寸图片幻灯片

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（1）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （1）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI⁻ （误差，mDa）	化合物名称
1	17.51	C₃₀H₄₈O₅	488	[M+Na]⁺ 511.3328 (−6.6) MSⁿ: 511-493.3316 (C₃₀H₄₆O₄, +2.8), 453.3319 (C₃₀H₄₄O₃, −4.4)	[M−H]⁻487.3402 (−2.7)	Daedaleanic acid B^[10]
2	19.15	C₃₀H₄₆O₆	502	[M+Na]⁺ 525.3301 (+11.4)	[M−H]⁻501.3164 (−5.8)	Pinicolic acid F ^[9]
3	19.90	C₃₁H₄₈O₅	500	MSⁿ: 483.3468 (C₃₁H₄₆O₄, −0.1), 465.3319 (C₃₁H₄₄O₃, −4.4)	[M−H]⁻499.3427 (−0.2)	29α-羟基去氢土莫酸 29α-Hydroxydehy-dropachymic acid^[14]
4	19.90	C₃₀H₄₈O₆	504	[M+Na]⁺ 527.3331 (−1.2) MSⁿ: 527- 495.3077 (C₂₉H₄₄O₅, +6.3), 437.2886 (C₂₇H₄₂O₃, −14.0)	[M−H]⁻503.3373 (−0.5)	-
5	21.69	C₃₁H₄₈O₆	516	[M+Na]⁺539.3047 (+6.8) MSⁿ: 539- 521.2809 (C₃₁H₄₆O₅, −6.5), 507.2633 (C₃₀H₄₄O₅, −4.6)	[M−H]⁻515.3056 (+4.2)	5,8α-Dioxy-3β,16α-dihydroxylanosta-7, 24- dien-21-oic acid^[18]
6	21.97	C₃₁H₄₆O₆	514	[M+H]⁺515.3331 (−3.6) MSⁿ: 515- 497.3360 (C₃₁H₄₄O₅, +9.8), 443.2839 (C₃₁H₃₈O₂, −10.6), 433.3267 (C₃₀H₄₀O₂, +16.6), 425.2996 (C₂₈H₄₀O₃, −5.4), 415.2933 (C₃₀H₃₈O, −6.2), 385.2397 (C₂₄H₃₂O₄, +2.4), 377.2199 (C₂₅H₂₈O₃, +8.8), 335.2455 (C₂₄H₃₀O, +8.6), 253.1655 (C₁₈H₂₀O, +6.8), 247.1670 (C₁₆H₂₂O₂, −2.3), 229.1583 (C₁₆H₂₀O, −0.4), 201.1704 (C₁₅H₂₀, +6.6)	[M−H]⁻513.3151 (−7.1) MSⁿ: 513- 483.3167 (C₃₁H₄₆O₄, −5.6)	5α,8α-过氧化去氢土莫酸 5α,8α-Peroxydehydrotumulosic acid^[19]
7	22.54	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3287 (−13.1) MSⁿ: 481.3308 ( (C₃₁H₄₄O₄, −0.4), 463.3147 (C₃₁H₄₂O₃, −6.0)	[M−H]⁻497.3193 (−7.9) MSⁿ: 497- 403.2418 (C₂₄H₂₆O₅, −7.2), 389.2435 (C₂₇H₃₄O₂, −5.1), 371.2336(C₂₇H₃₂O, −4.4), 355.2131 (C₂₆H₂₈O, +6.4)	6α-羟基猪苓酸C 6α-Hydroxypolyporenic acid C^[11]
8	23.69	C₃₃H₄₈O₈	572	[M+H]⁺573.3312 (−11.1)	[M−H]⁻571.3213 (−6.3)	3-(2-羟基乙酰氧基)- 5α,8α-过氧化去氢土莫酸 3-(2-hydroxyacetoxy)- 5α, 8α-peroxydehydrotumulosic acid ^[20]
9	25.78	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3433 (+1.5) MSⁿ: 481.3408 ( (C₃₁H₄₄O₄, +9.6)- 451.3147 (C₃₀H₄₂O₃, −1.4), 435.2955 (C₂₉H₃₈O₃, +6.2), 325.2132 (C₂₂H₂₈O₂, −3.0), 299.2112 (C₂₀H₂₆O₂, +10.6)	[M−H]⁻497.3236 (−3.6)	-

下载: 导出CSV

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（2）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （2）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI^- （误差，mDa）	化合物名称
10	28.42	C₃₂H₅₀O₆	530	[M+Na]⁺553.3443 (−5.7) MSⁿ: 553- 535.3422 (C₃₂H₄₈O₅, +2.8), 495.3437 (C₃₀H₄₈O₄, −0.8), 477.3274 (C₃₀H₄₆O₃, −6.5), 435.3364 (C₂₈H₄₄O₂,+13.0), 353.2548 (C₂₂H₃₄O₂, +9.7)	[M−H]⁻529.3461 (−7.4)	3-乙酰氧基-16α,26-二羟基-羊毛甾-8,24-二烯-21-酸 3- Acetoxy-16α,26-dihydroxy-lanosta-8,24-dien-21-oic acid^[10]
11	29.01	C₃₃H₅₀O₆	542	MSⁿ: 525.3513 (C₃₃H₄₈O₅, −6.2)- 507.3459 (C₃₃H₄₆O₄, −1.0), 465.3365 (C₃₁H₄₄O₃, +0.2), 447.3544 (C₃₂H₄₆O, −7.7)	[M−H]⁻541.3460 (−7.5)	6α-羟基去氢茯苓酸 6α-Hydroxy-dehydropachymic acid^[13]
12	31.15	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+Na]⁺485.3592 (−3.3) MSⁿ: 485- 467.3492 (C₃₁H₄₆O₃, −2.9), 449.3408 (C₃₁H₄₄O₂, −0.6), 311.2388 (C₂₂H₃₀O, +1.9), 293.2259 (C₂₂H₂₈, −0.5)	[M−H]⁻483.3413 (−6.7) MSⁿ: 483- 437.3393 (C₃₀H₄₆O₂, −3.2), 421.2978 (C₂₉H₄₂O₂, −13.4)	3β,15α-二羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸 3β,15α-dihydroxylanosta-7,9(11),24-trien-21-oic acid^[15]
13	30.27	C₃₁H₅₀O₄	486	[M+H]⁺ 487.3722 (−6.0) MSⁿ: 487- 469.3719 (C₃₁H₄₈O₃, +4.3), 451.3553 (C₃₁H₄₆O₂, −1.8), 343.2701 (C₂₃H₃₄O₂, +6.9), 313.2464 (C₂₂H₃₂O, −6.2), 295.2405 (C₂₂H₃₀, −1.5)	[M−H]⁻485.3570 (−6.6) MSⁿ: 483- 423.3371 (C₂₉H₄₄O₂,+10.2)	土莫酸 Tumulosic acid^[10-11]
14	31.74	C₃₁H₄₆O₅	498	[M+H]⁺ 499.3368 (−5.0) MSⁿ: 499- 481.3292 (C₃₁H₄₄O₄, −2.0), 463.3291 (C₃₁H₄₂O₃, +8.4), 421.3024 (C₂₉H₄₀O₂, −7.7), 325.2198 (C₂₂H₂₈O₂, +3.8), 307.2102 (C₂₂H₂₆O, +4.6)	[M−H]⁻497.3199 (−7.3) MSⁿ: 497- 425.2942 (C₃₁H₃₈O, +9.2)	29-羟基猪苓酸 C 29-Hydroxypolyporenic acid C^[16]
15	33.26	C₃₃H₅₂O₆	544	[M+H]⁺ 545.3733 (−10.4) MSⁿ: 545- 527.3696 (C₃₃H₅₀O₅, −3.5), 451.3097 (C₃₁H₄₆O₂, +2.6), 433.3267 (C₃₁H₄₄O, −19.8), 295.2433 (C₂₂H₃₀,+2.3)	[M−H]⁻543.3623 (−6.8) MSⁿ: 543- 467.3227 (C₃₁H₄₈O₃, +9.6)	25-羟基茯苓酸 25-Hydroxypachimic acid^[11]
16	33.57	C₃₁H₄₆O₄	482	[M+H]⁺ 483.3420 (−4.9) MSⁿ: 483- 465.3327 (C₃₁H₄₄O₃, −3.6), 447.3246 (C₃₁H₄₂O₂, −1.2), 309.2214 (C₂₂H₂₈O, +0.1)	[M−H]⁻481.3266 (−5.7) MSⁿ: 481- 311.1817 (C₂₁H₂₈O₂, −14.0)	猪苓酸 C Polyporenic acid C^[11]
17	34.28	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+H]⁺ 485.33637 (+1.2) MSⁿ: 483- 467.3486 (C₃₁H₄₆O₃, −3.4), 449.3532 (C₃₁H₄₄O₂, +11.8), 311.2343 (C₂₂H₃₀O, −2.6), 293.2330 (C₂₂H₂₈,+6.6)	[M−H]⁻483.3378 (−10.2) MSⁿ:	3-表去氢土莫酸 3-epi-Dehydrotumulosic acid acid^[11]

下载: 导出CSV

表 1 茯苓中色谱峰的LC/ESI–MSⁿ鉴定结果（3）

Table 1. Characterization of the peaks in LC/ESI–MSⁿ chromatogram of Poria cocos （3）

色谱峰	保留时间	分子式	分子量	ESI⁺ （误差，mDa）	ESI⁻ （误差，mDa）	化合物名称
18	34.89	C₃₁H₄₈O₄	484	[M+H]⁺ 485.3589 (−3.6) MSⁿ: 483- 467.3526 (C₃₁H₄₆O₃, +0.6), 449.3377 (C₃₁H₄₄O₂, −3.7), 311.2408 (C₂₂H₃₀O, +3.9), 293.2265 (C₂₂H₂₈, 0.1)	[M−H]⁻483.3406 (−7.4) MSⁿ: 481- 337.2465 (C₂₄H₃₄O, −7.2)	去氢土莫酸 Dehydrotumulosic acid^[17]
19	38.63	C₃₃H₅₀O₅	526	[M+H]⁺ 527.3671(−6.0) MSⁿ: 527- 509.3564 (C₃₃H₄₈O₄, −6.1), 449.3398 (C₃₁H₄₄O₂, −1.6), 293.2240 (C₂₂H₂₈, −2.4)	[M−H]⁻525.3493 (−9.2) MSⁿ:	3-表去氢茯苓酸 3-epi-Dehydropachymic acid^[14]
20	39.64	C₃₂H₅₀O₅	514	[M+H]⁺ 515.3708(−2.3) MSⁿ: 515- 497.3555 (C₃₂H₄₆O₄, −7.0), 437.3398 (C₃₀H₄₄O₂, −1.6), 295.2422 (C₂₂H₃₀,+0.2)	[M−H]⁻513.3532 (−5.3)	3-O-乙酰基-16α-羟基松苓酸 3-O-Acetyl-16α-hydroxytrametenolic acid^[12]
21	40.64	C₃₃H₅₀O₅	526	[M+H]⁺ 527.3697 (−3.4) MSⁿ: 527- 509.3594 (C₃₃H₄₈O₄, −3.1), 449.3446 (C₃₁H₄₄O₂, +3.2), 353.2501 (C₂₄H₃₂O₂, +2.6), 293.2254 (C₂₂H₂₈, −1.0)	[M−H]⁻525.3511 (−7.4) MSⁿ: 525- 479.3471 (C₃₂H₄₈O₃, −6.0), 465.3351 (C₃₁H₄₆O₃, −2.3), 355.2295 (C₂₃H₃₂O₃, +1.6),	去氢茯苓酸dehydropachymic acid^[11]
22	41.87	C₃₃H₅₂O₅	528	[M+H]⁺ 529.3820 (−6.8) MSⁿ: 529- 511.3735 (C₃₃H₅₀O₄, −4.7), 451.3599 (C₃₁H₄₆O₂, −3.0), 295.2419 (C₂₂H₃₀, −0.1)	[M−H]⁻527.3666 (−7.6) MSⁿ: 527- 465.3330 (C₃₁H₄₆O₃, −4.4)	茯苓酸 Pachymic acid^[10-11]
23	45.90	C₃₀H₄₆O₃	454	[M+H]⁺ 455.3532 (+1.2) MSⁿ: 455- 437.3457 (C₃₀H₄₄O₂, +4.3), 311.2370 (C₂₂H₃₀O, +0.1), 295.2381 (C₂₂H₃₀, −3.9)	[M−H]⁻453.3342 (−3.2)	3-羟基-羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21酸 Dehydrotrametenolic acid^[12]
24	47.30	C₃₀H₄₈O₃	456	[M+H]⁺ 457.3663 (−1.3) MSⁿ: 457- 439.3502 (C₃₀H₄₆O₂, −6.9), 313.2445 (C₂₂H₃₂O, −8.1), 295.2463 (C₂₂H₃₀, +4.3)	[M−H]⁻455.3471 (−6.0)	3-氢化松苓酸 trametenolic acid^[13]

下载: 导出CSV

参考文献(20)

[1]	王萌,张毅,李金田. 从《神农本草经》论茯苓在经方中的应用[J]. 中国中医基础医学杂志,2017,23(8):1149-1151.
[2]	邓桃妹,彭代银,俞年军,等. 茯苓化学成分和药理作用研究进展及质量标志物的预测分析[J]. 中草药,2020,51(10):2703-2717. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2020.10.013
[3]	田婷,陈华,殷璐,等. 茯苓和茯苓皮水和乙醇提取物的利尿作用及其活性成分的分离鉴定[J]. 中国药理学和毒理学杂志,2014,28(1):57-62.
[4]	Xu H,Wang Y C,Jurutka P W,et al. 16α-Hydroxytrametenolic acid from Poria cocos improves intestinal barrier function through the glucocorticoid receptor-mediated PI3K/Akt/NF-kappaB pathway[J]. J Agric Food Chem,2019,67(39):10871-10879. doi: 10.1021/acs.jafc.9b04613
[5]	Gao Y Q,Yan H,Jin R R,et al. Antiepileptic activity of total triterpenes isolated from Poria cocos is mediated suppression of aspartic and glutamic acids in the brain[J]. Pharm Biol,2016,54(11):2528-2535. doi: 10.3109/13880209.2016.1168853
[6]	董建设,赵俊峰,张林超,等. 茯苓酸通过Wnt信号通路对肾癌细胞生物学特性的影响[J]. 中国老年学杂志,2019,39(9):2241-2244. doi: 10.3969/j.issn.1005-9202.2019.09.061
[7]	樊燕青,孙兰池,李大鹏. 茯苓酸对舌鳞状细胞癌细胞CAL-27 增殖、凋亡及细胞周期的影响[J]. 中成药,2021,43(7):1909-1914. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2021.07.043
[8]	Lee S R,Lee S,Moon E,et al. Bioactivity-guided isolation of anti-inflammatory triterpenoids from the sclerotia of Poria cocos using LPS-stimulated Raw264.7 cells[J]. Bioorg Chem,2017,70:94-99. doi: 10.1016/j.bioorg.2016.11.012
[9]	Chen B S,Zhang J J,Han J J,et al. Lanostane triterpenoids with glucose-uptake-stimulatory activity from peels of the cultivated edible mushroom Wolfiporia cocos[J]. J Agric Food Chem,2019,67(26):7348-7364. doi: 10.1021/acs.jafc.9b02606
[10]	邹叶挺. 茯苓化学组分表征及其抗顺铂肠损伤作用初步研究[D]. 南京: 南京中医药大学硕士论文. 2019: 10–45.
[11]	郑艳,杨秀伟. 中药材规范化种植茯苓化学成分研究[J]. 中国现代中药,2017,19(1):44-50.
[12]	李慧,黄帅,单连海,等. 茯苓皮中三萜酸类成分的研究[J]. 华西药学杂志,2016,31(1):6-10.
[13]	Nukaya H, Yamashiro H, Fukazawa H, et al, Isolation of inhibitors of TPA-induced mouse ear edema from Hoelen, Poria cocos[J]. Chem Pharm Bull, 1996, 44（4）: 847–849.
[14]	王坤凤. 茯苓化学成分及质量控制方法研究[D]. 北京: 北京中医药大学硕士论文. 2014: 62–85.
[15]	Zhang H F,Feng B,Liu K,et al. Isolation and purification of two triterpenoids from the Chinese medicinal plant Fomes officinalis ames[J]. Asian J Chem,2013,25(11):6130-6132. doi: 10.14233/ajchem.2013.14285
[16]	Zheng Y,Yang X W. Two new lanostane triterpenoids from Poria cocos[J]. J Asian Nat Prod Res,2008,10(4):289-292. doi: 10.1080/10286020701782742
[17]	邹叶挺,徐金娣,龙芳,等. 整合UPLC-QTOF-MS/MS全扫描和模拟MRM方法综合评价茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物三萜酸类组分化学一致性[J]. 药学学报,2019,54(1):130-137.
[18]	Lin H C, Chang T C, Chang W L, et al. Pharmaceutical composition and extract of Poria for enhancing uptake of nutrients: The United States of America, US 9757392 B2 [P]. 2017.09. 12.
[19]	Akihisa T,Nakamura Y,Tokuda H,et al. Triterpene acids from Poria cocos and their anti-tumor-promoting effects[J]. J Nat Prod,2007,70(6):948-953. doi: 10.1021/np0780001
[20]	Li S,Wang Z,Gu R,et al. A new epidioxy-tetracyclic triterpenoid from Poria cocos Wolf[J]. Nat Prod Res,2016,30(15):1712-1717. doi: 10.1080/14786419.2015.1136909

计量

文章访问数: 3570
HTML全文浏览量: 2017
PDF下载量: 151
被引次数: 0

1. 材料与方法
1.1 仪器
1.2 试药和试剂
1.3 供试品溶液制备
1.4 液相色谱条件
1.5 质谱条件
1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法
2. 结果
3. 讨论

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

留言板

茯苓95%乙醇提取物三萜类化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20211101

作者简介:
陈兴龙（1989～），男，云南曲靖人，理学博士，讲师，主要从事天然产物化学研究工作

通讯作者:
李勇，E-mail：1069237727@qq.com

计量

Analysis of Triterpene Chemical Constituents in Poria cocos 95% Ethanol Extract via UPLC-IT-TOF/MS

1. 材料与方法

1.1 仪器

1.2 试药和试剂

1.3 供试品溶液制备

1.4 液相色谱条件

1.5 质谱条件

1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法

2. 结果

3. 讨论

计量

目录

1. 材料与方法

1.1 仪器

1.2 试药和试剂

1.3 供试品溶液制备

1.4 液相色谱条件

1.5 质谱条件

1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法

2. 结果

3. 讨论

[1]	罗芳, 赵瑞斌, 李国军, 付旭宪, 范贤谋, 苏少明, 文云波, 黄齐林, 李斌. LC-MS/MS法研究酒精对人体血液中内源性GHB的影响, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20240526
[2]	杨璨瑜, 孙孔春, 王娟, 普惠萍, 沈报春. HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230321
[3]	刘悦鑫, 田方东, 李昕怡, 熊根, 江祥宇, 李贤, 李燕妮. LC-MS/MS法检测血液和尿液中东莨菪碱和阿托品, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220916
[4]	秦杰琛, 左笑菲, 邹澄, 庹呈杰, 张科涛, 张晓梅, 赵庆. 结构改造制备抗菌和抗肿瘤的姜科二萜衍生物, 昆明医科大学学报. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210501
[5]	张培培, 崔佳丽, 周艺佳, 刘红斌, 柯瑾. UPLC/Q Exactive MS快速测定食蟹猴体内黄藤素的血药浓度, 昆明医科大学学报.
[6]	卢发焕, 李继印, 李树华, 赵文嵩, 王蕊, 解润芳, 杨凯润. UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布, 昆明医科大学学报.
[7]	张睿, 郑永江, 蔡斌, 王振, 李玉华, 曹珍珍, 张桓, 张荣平, 于建云. 迷迭香干预三重脑震荡大鼠焦虑行为变化, 昆明医科大学学报.
[8]	解润芳, 佟钧, 诸晨, 徐天勇, 解继明. 水浸GC-MS法检测生物检材中的百草枯, 昆明医科大学学报.
[9]	海青山, 马晓霞, 杨榆青, 杨竹雅. 滇西乌头中三种二萜生物碱相关药效和毒性的对比, 昆明医科大学学报.
[10]	张雯. 三种方案治疗细菌性阴道病300例临床分析, 昆明医科大学学报.
[11]	韦雅妮. 左上颌第三磨牙与两多生牙结合1例报道, 昆明医科大学学报.
[12]	秦怀周. 三维模拟技术在髁状突矢状骨折中的应用, 昆明医科大学学报.
[13]	秦亚辉. 三级医院优质护理服务病区(房)检查验收情况的分析, 昆明医科大学学报.
[14]	赵兴元. 经阴道三维超声检查诊断纵隔子宫的临床价值, 昆明医科大学学报.
[15]	李绍龙. CARTO系统指导下三点法导管消融典型房扑, 昆明医科大学学报.
[16]	陈熙. 三种永久虫卵封片标本制作方法的比较, 昆明医科大学学报.
[17]	郭伟琳. UPLC法同时测定旋覆花属植物中2种倍半萜内酯成分的含量, 昆明医科大学学报.
[18]	徐阳. 伽玛刀治疗原发性三叉神经痛46例分析, 昆明医科大学学报.
[19]	. 三七原人参三醇型总皂苷和人参三醇的4个衍生物的合成研究, 昆明医科大学学报.
[20]	张光学. 三硝基甲苯致白内障发病情况调查, 昆明医科大学学报.

留言板

茯苓95%乙醇提取物三萜类化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20211101

作者简介: 陈兴龙（1989～），男，云南曲靖人，理学博士，讲师，主要从事天然产物化学研究工作

通讯作者: 李勇，E-mail：1069237727@qq.com

计量

出版历程

Analysis of Triterpene Chemical Constituents in Poria cocos 95% Ethanol Extract via UPLC-IT-TOF/MS

1. 材料与方法

1.1 仪器

1.2 试药和试剂

1.3 供试品溶液制备

1.4 液相色谱条件

1.5 质谱条件

1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法

2. 结果

3. 讨论

计量

出版历程

目录

1. 材料与方法

1.1 仪器

1.2 试药和试剂

1.3 供试品溶液制备

1.4 液相色谱条件

1.5 质谱条件

1.6 茯苓的三萜类化学成分分析方法

2. 结果

3. 讨论

作者简介:
陈兴龙（1989～），男，云南曲靖人，理学博士，讲师，主要从事天然产物化学研究工作

通讯作者:
李勇，E-mail：1069237727@qq.com