Antagonistic Effect of Total Flavonoids of Panax notoginseng on Osteoporosis Induced by Glucocorticoid
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摘要:
目的 研究三七总黄酮拮抗糖皮质激素诱发骨质疏松的效应及可能的机制。 方法 将50只体重约170 g的SPF级雌性SD大鼠随机分为五组（10只/组），即正常对照组、模型组（激素组）和三七总黄酮高、中、低剂量治疗组（激素 + 用药组）。模型组和三七总黄酮治疗组采用地塞米松（2.5 mg/kg）肌肉注射，每周2次；同时三个治疗组分别给予三七总黄酮275 mg/（kg·d）、137.5 mg/（kg·d）、68.75 mg/（kg·d）灌胃治疗，每天1次。实验期9周。9周后测定各组大鼠股骨骨密度、反映骨生物力学性能的指标及血清生化指标。 结果 与正常组比较，模型组大鼠股骨骨密度（BMD）、骨生物力学性能、血清钙水平明显降低，血清磷水平及血清碱性磷酸酶活性明显升高（P < 0.05）；与模型组比较，三七总黄酮高、中剂量治疗组大鼠股骨BMD、骨生物力学性能、血清钙水平明显增高，血清磷水平及血清碱性磷酸酶活性明显降低（P < 0.05）。 结论 三七总黄酮可提高糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨密度，改善其骨生物力学性能，对糖皮质激素诱发的骨质疏松具有拮抗作用，作用机制与其抑制骨吸收及糖皮质激素诱导的钙磷代谢失衡有关。 Abstract:Objective To study the antagonistic effect of total flavonoids of Panax notoginseng on osteoporosis induced by glucocorticoid and its possible mechanism. Methods Fifty female SD rats（SPF-grade）weighing about 170 g were randomly divided into five groups（10 / group）: normal control group, model group（hormone group）and high, medium and low dose treatment group（hormone + drug group）of total flavonoids of Panax notoginseng. Dexamethasone（2.5 mg/kg）was injected intramuscularly twice a week in the model group and total flavonoids of Panax notoginseng treatment groups. At the same time, the three treatment groups were given total flavonoids of Panax notoginseng 275 mg/（kg·d）, 137.5 mg/（kg·d）and 68.75 mg/（kg·d）by intragastric administration once a day. The experimental period was 9 weeks. After 9 weeks, bone mineral density（BMD）and indexes reflecting biomechanical properties of femur, serum biochemical indexes were measured. Results Compared with the normal group, the bone mineral density of femur, bone biomechanical properties and the serum calcium level decreased significantly, the serum phosphorus level and the serum alkaline phosphatase activity increased significantly in the model group（P < 0.05）. Compared with the model group, the bone mineral density, bone biomechanical properties and the serum calcium level increased significantly, the serum phosphorus level and the serum alkaline phosphatase activity decreased significantly in the high and medium dose treatment group of total flavonoids of Panax notoginseng（P < 0.05）. Conclusions Total flavonoids of Panax notoginseng can increase the bone density and improve the biomechanical properties of bone in glucocorticoid-induced osteoporosis rats. It has an antagonistic effect on osteoporosis induced by glucocorticoid. The mechanism of action is related to the inhibition of bone absorption and the imbalance of calcium and phosphorus metabolism induced by glucocorticoid. -
呼吸道感染好发于小儿人群中，80.0%患者由于病毒感染引起，亦可由细菌、非典型病原体及真菌引起[1-2]。相关研究表明[3-4]：呼吸道感染多发生在冬春季节，多为散发，能在气候突变时引起小规模流行。主要是由于患儿免疫力及抵抗力相对较差引起，且学龄前儿童每年呼吸道感染次数为4～8次，严重影响我国患儿健康与成长[5]。司序研究表明[6]：每年由于呼吸道感染致死的儿童占死亡儿童的20.0%左右，且常见的呼吸道感染病毒包括：鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）、甲型流感、乙型流感等，且不同地区、年龄及季节存在明显的差异性。李雅清等[7]研究表明：非典型病原体是呼吸道感染病原谱中重要组成部分，且最新研究显示，肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）在呼吸道感染患儿中阳性检出率呈增高趋势，部分患儿伴有细菌感染，是呼吸道感染病情加重、病程迁延的独立危险因素。由于不同病原呼吸道感染患儿临床表现缺乏特异性，根据医院病原学数据，了解不同病原体的流行特点，能为临床制定相应的防治措施提供参考依据[8-9]。本研究以安宁地区住院患儿为研究对象，探讨安宁地区住院患儿呼吸道感染病毒病毒病原体阳性检测结果分析，报道如下。
1. 资料与方法
1.1 临床资料
选择2019年9月至2022年2月安宁地区住院患儿1766例为对象，根据年龄分为 < 6月龄组、6月龄～4岁组、4～14岁组；根据新冠疫情防控，2019年9月至2020年2月前为公众防护前，2020年2月后公众防护后；诊断标准[10-11]：（1）急性感染症状之一，发热或体温降低，白细胞计数升高或降低；（2）呼吸道感染症状之一，咽痛、咳嗽、喘息、气短。纳入标准：（1）符合呼吸道感染疾病诊断标准[12-13]；（2）均积极配合完成呼吸道病毒病原学检测；（3）患儿以发热、咳嗽、喘息、咽痛等呼吸道感染症状入院。排除标准：（1）既往有器质性基础性疾病；（2）因其他原因住院或未能完成治疗、检测者。根据年龄分为 < 6月龄组、6月龄～4岁组、4～14岁组；2019年9年至2020年2月患儿370例，其中，男189例，女181例，年龄（0～14）岁，平均（2.98±1.31）岁；病程（2～6）d，平均（3.15±0.73）d；2020年9月至2021年2月患儿389例，其中，男231例，女158例，年龄（0～13.6）岁，平均（3.05±1.35）岁；病程（2～7）d，平均（3.21±0.76）d；2021年9月至2022年2月患儿1007例，其中，男508例，女499例，年龄（0～14）岁，平均（3.09±1.41）岁；病程（2～8）d，平均（3.25±0.79）d。不同时间段患儿临床资料比较差异无统计意义（P > 0.05），具有可比性。本实验经安宁市第一人民医院伦理委员会批准下执行。
1.2 研究方法
1.2.1 标本采集及处理
所有患儿均采用鼻咽拭子采集鼻咽部脱落细胞，并将采集标本的棉签放置试管中，灌入2～3 mL生理盐水，立即送检备用，如不能立即送检，放入4°冰箱冷藏并在24 h内检测[14-15]。
1.2.2 检测方法
采用直接免疫荧光法，将荧光素标记在7种呼吸道病毒抗体上，直接与相应的病毒抗原进行特异性反应，在荧光显微镜下观察[16-17]。统计分析患儿的一般情况。
1.3 统计学处理
采用SPSS24.0软件处理，计数资料行χ2检验，采用n（%）表示，计量资料行t检验，采用（
$\bar x \pm s $ ）表示，P < 0.05为差异有统计学意义。2. 结果
2.1 安宁地区住院患儿不同时间段呼吸道病原体检出阳性率比较
安宁地区住院患儿1 766例，均完成鼻咽拭子标本采集，并完成呼吸道病毒病原学检测，结果表明：入组患儿阳性584例，检出阳性率为33.07%。呼吸道病毒病原体中检出主要以呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒Ⅲ型为主，分别为316例、90例、82例，检出阳性率分别为17.89%、5.10%、4.64%，见表1。
表 1 安宁地区住院患儿不同时间段呼吸道病原体检出阳性率比较[n（%）]Table 1. Comparison of positive rate of respiratory pathogens detected in hospitalized children at different time periods in Anning Area [n（%）]时间 样本数
（n）阳性数 甲型流感
病毒抗原乙型流感
病毒抗原呼吸道合胞
病毒抗原腺病毒
抗原副流感病毒
Ⅰ型抗原副流感病毒
Ⅱ型抗原副流感病毒
Ⅲ型抗原2019.9～2020.2 370 95（25.68） 22（5.95） 5（1.35） 52（14.05） 9（2.43） 2（0.54） 0（0.00） 5（1.35） 2020.9～2021.2 389 112（28.79） 0（0.00） 0（0.00） 84（21.59） 4（1.03） 4（1.03） 2（0.51） 18（4.63） 2021.9～2022.2 1007 377（37.44） 4（0.40） 48（4.77） 180（17.87） 77（7.65） 8（0.79） 1（0.10） 59（5.86） 2.2 防护前不同年龄段患儿呼吸道病原体七联检阳性率比较
安宁地区住院患儿呼吸道病毒病原体阳性率主要集中在 < 6月龄组，6月龄～4岁组，分别占总阳性率111（34.69%）和327（34.31%），不同年龄段呼吸道病毒病原体检出阳性率具有统计意义（χ2 = 8.392，P = 0.031），见表2。
表 2 防护前不同年龄段患儿呼吸道病原体检出阳性率比较[n（%）]Table 2. Comparison of positive rates of respiratory pathogens detected in children of different ages before protection [n（%）]年龄段 样本数
（n）阳性数 甲型流感
病毒抗原乙型流感
病毒抗原呼吸道合胞
病毒抗原腺病毒
抗原副流感病毒
Ⅰ型抗原副流感病毒
Ⅱ型抗原副流感病毒
Ⅲ型抗原< 6月龄组 320 111（34.69） 4（3.60） 4（3.60） 86（77..48） 4（1.25） 4（3.60） 1（0.90） 8（7.21） 6月龄～4岁组 953 327（34.31） 9（2.75） 12（3.67） 194（59.32） 46（14.07） 7（2.14） 1（0.31） 58（17.74） 4～14岁组 493 146（29.61） 13（8.90） 37（25.34） 37（7.51） 40（27.40） 3（2.05） 1（0.68） 15（10.27） χ2 − 8.392 4.291 3.868 7.513 5.325 1.092 0.000 1.015 P − 0.031* 0.046* 0.049* 0.031* 0.036* 0.743 1.000 0.193 *P < 0.05。 2.3 公众防护前与公众防护后原体七联检阳性率比较
公众防护前甲型流感病毒阳性率为5.95%；呼吸道合胞病毒阳性率为14.05%；而公众防护后甲型流感病毒阳性率为0.29%；呼吸道合胞病毒阳性率为18.91%；公众防护前后乙型流感病毒抗原、腺病毒抗原、副流感病毒Ⅰ型、副流感病毒Ⅱ型、副流感病毒Ⅱ型检出率差异无统计意义（P > 0.05），见表3。
表 3 公众防护前与公众防护后呼吸道病原体检出阳性率比较[n（%）]Table 3. Comparison of positive rate of respiratory pathogens detected before and after public protection [n（%）]时间段 样本数
（n）阳性数 甲型流感
病毒抗原乙型流感
病毒抗原呼吸道合胞
病毒抗原腺病毒
抗原副流感病毒
Ⅰ型抗原副流感病毒
Ⅱ型抗原副流感病毒
Ⅲ型抗原公众防护前 370 95（25.67） 22（5.95） 5（1.35） 52（14.05） 9（2.43） 2（0.54） 0（0.00） 5（1.35） 公众防护后 1396 489（35.02） 4（0.29） 48（3.44） 264（18.91） 81（5.80） 12（0.86） 3（0.21） 77（5.52） χ2 − 27.149 74.143 1.494 16.103 16.919 0.927 1.124 20.835 P − 0.001* 0.001* 0.222 0.001* 0.181 0.336 0.289 0.231 *P < 0.05。 3. 讨论
呼吸道感染属于是一种全球性、持续性的公共卫生问题，好发于儿童人群中，主要由于患儿年龄相对较小，身体器官尚未完全发育，导致病毒抵抗力相对较差[18-20]。武迪研究表明[21]：病毒是引起呼吸道感染的重要病原体，且全球每年约有儿童57万死于呼吸道感染，由于多数儿童感染病毒后，缺乏特异性临床表现，单一的症状难以实现病原学的鉴别，再加上病毒传播速度相对较快并不断演化，均会增加临床甄别难度。本研究中，入组患儿呼吸道感染病毒检测阳性584例，阳性率为33.07%。呼吸道病毒病原体检出主要以呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒III型为主，分别为316例、90例、82例；从本研究结果看出，安宁地区住院患儿呼吸道病毒病原体检出阳性率较高，且以呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒III型为主。因此，加强儿童呼吸道感染病毒病原学检测，明确呼吸道感染病原对早期诊断、合理治疗及降低静脉输液及抗生素使用具有重要意义[22-23]。
目前，临床上对于呼吸道病毒的测定方法包括：病毒的分离培养、间接、直接免疫荧光法等[24-25]。病毒分离培养属于传统的测定方法，并将其视为“金标准”，临床使用时常需要结合流行病学季节、临床特征等推测。但是该方法检查所需时间较长，难以实现大样本的鉴别与测定[26-27]。而间接免疫荧光法能同时实现多种类型病毒的测定及筛查，但是该方法敏感度较低，测定过程中受到的干扰相对较多。因此，本研究中以直接免疫荧光法完成呼吸道病毒的测定，并完成患儿年龄与季节的分组，结果表明：安宁地区住院患儿呼吸道感染病毒病原体阳性主要集中在 < 6月龄组、6月龄～4岁组，检出阳性率分别为34.69%、34.31%，不同年龄段呼吸道病毒病原体检出阳性率具有统计意义（χ2 = 8.392，P = 0.031）；从本研究结果看出，安宁地区住院患儿呼吸道病毒病原体阳性与年龄存在紧密的联系。主要是由于患儿年龄小，部分患儿断奶后丧失母体的保护性抗体保护作用，再加上儿童免疫系统发育不完全、免疫功能较低有关，接触的人群与生活环境相对复杂，再加上户外活动增多等，均会增加呼吸道病原体检出率[28-29]。本研究中，公众防护前甲型流感病毒阳性率、呼吸道合胞病毒阳性率分别为5.95%、14.05%，公众防护后分别为0.29%、18.91% ，公众防控后甲型流感病毒阳性率得到明显降低，可能与新冠肺炎防控期间大众戴口罩、洗手、减少集聚等有关，甲型流感为丙类传染病，对患儿危害较大，有传播流行趋势，因此，坚持公众戴口罩、洗手、减少集聚等公众防护措施对甲型流感预防有重要意义。临床上应根据安宁地区呼吸道病毒感染的年龄、发病季节等，采取相应的措施预防、干预，对于不适患儿应尽早就医，做好相应的防护措施，避免流行性爆发，促进患儿早期恢复[30]。
综上所述，坚持公众戴口罩、洗手、减少集聚等公众防护对甲型流感预防有重要意义，安宁地区住院患儿呼吸道病毒病原体阳性率较高，加强儿童呼吸道感染病毒病原学检测，明确呼吸道感染病原对早期诊断、合理治疗具有重要意义。
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表 1 三七总黄酮对骨质疏松大鼠股骨骨密度和骨矿含量的影响（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）Table 1. Effects of TFPN on BMD and BMC of femur in osteoporotic rats（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）组别 剂量（mg/kg） BMD（mg/cm3） BMC（mg） 正常组 — 378 ± 37 7.9 ± 1.1 模型组 — 267 ± 22* 5.2 ± 0.6* 高剂量组 275 377 ± 31∆ 7.7 ± 0.5∆ 中剂量组 137.5 326 ± 11∆ 6.5 ± 0.6∆ 低剂量组 68.75 300 ± 11∆ 5.5 ± 0.5 F 32.449 25.040 P 0.000 0.000 与正常组比较，*P < 0.05；与模型组比较，∆P < 0.05。 
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表 2 三七总黄酮对骨质疏松大鼠股骨骨小梁结构的影响（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）Table 2. Effects of TFPN on trabecular structure of femur in osteoporotic rats（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）组别 剂量（mg/kg） Tb.Th.（mm） Tb.N.（1/mm） Tb.Sp.（mm） Con.den.（1/mm3） 正常组 — 0.101 ± 0.014 3.86 ± 0.10 0.162 ± 0.020 57.8 ± 8.9 模型组 — 0.067 ± 0.003* 2.81 ± 0.13* 0.285 ± 0.020* 33.6 ± 2.7* 高剂量组 275 0.098 ± 0.010∆ 3.87 ± 0.25∆ 0.165 ± 0.023∆ 56.9 ± 5.0∆ 中剂量组 137.5 0.083 ± 0.002∆ 3.48 ± 0.11∆ 0.202 ± 0.010∆ 46.6 ± 1.6∆ 低剂量组 68.75 0.076 ± 0.002 3.12 ± 0.07 0.245 ± 0.008 41.3 ± 1.6 F 27.005 82.360 80.573 38.071 P 0.000 0.000 0.000 0.000 与正常组比较，*P < 0.05；与模型组比较，∆P < 0.05。
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表 3 三七总黄酮对骨质疏松大鼠股骨BS/BV和BV/TV的影响（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）Table 3. Effects of TFPN on BS / BV and BV / TV of femur in osteoporotic rats（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）组别 剂量（mg/kg） BS/BV（1/mm） BV/TV 正常组 — 20.5 ± 2.7 0.382 ± 0.066 模型组 — 29.8 ± 1.8* 0.194 ± 0.018* 高剂量组 275 20.5 ± 2.2∆ 0.374 ± 0.052∆ 中剂量组 137.5 24.4 ± 1.4∆ 0.288 ± 0.014∆ 低剂量组 68.75 25.5 ± 1.8∆ 0.242 ± 0.015∆ F 32.176 36.566 P 0.000 0.000 与正常组比较，*P < 0.05；与模型组比较，∆P < 0.05。
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表 4 三七总黄酮对骨质疏松大鼠血清Ca、P水平及ALP活性的影响（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）Table 4. Effects of TFPN on serum Ca, P and ALP in osteoporotic rats（
$\bar x \pm s$ ，n = 9）组别 剂量（mg/kg） Ca（mmol/L） P（mmol/L） ALP（U /L） 正常组 — 2.55 ± 0.10 2.43 ± 0.37 43 ± 2 模型组 — 2.23 ± 0.06* 3.74 ± 0.51* 63 ± 5* 高剂量组 275 2.54 ± 0.09∆ 2.43 ± 0.27∆ 44 ± 3∆ 中剂量组 137.5 2.41 ± 0.02∆ 2.91 ± 0.05∆ 50 ± 2∆ 低剂量组 68.75 2.35 ± 0.02 3.33 ± 0.26 53 ± 2 F 37.370 29.737 70.863 P 0.000 0.000 0.000 与正常组比较，*P < 0.05；与模型组比较，∆P < 0.05。
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![](data:image/svg+xml,<svg xmlns='http://www.w3.org/2000/svg' width='210' height='179'><foreignObject width='2000' height='100%'><div xmlns='http://www.w3.org/1999/xhtml' style='font-size:16px;font-family:Helvetica'><table>
<thead><tr><td class="table_top_border" style="padding-left:10pt;height:16pt;" align="left" valign="middle">组别</td><td class="table_top_border" style="height:16pt;" align="center" valign="middle">剂量（mg/kg）</td><td class="table_top_border" style="height:16pt;" align="center" valign="middle">BMD（mg/cm<sup>3</sup>）</td><td class="table_top_border" style="height:16pt;" align="center" valign="middle">BMC（mg）</td></tr></thead>
<tbody><tr><td class="table_top_border2" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">正常组</td> <td class="table_top_border2" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">—</td> <td class="table_top_border2" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">378 ± 37</td> <td class="table_top_border2" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">7.9 ± 1.1</td> </tr><tr><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">模型组</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">—</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">267 ± 22<sup>*</sup></td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">5.2 ± 0.6<sup>*</sup></td> </tr><tr><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">高剂量组</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">275</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">377 ± 31<sup>∆</sup></td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">7.7 ± 0.5<sup>∆</sup></td> </tr><tr><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">中剂量组</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">137.5</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">326 ± 11<sup>∆</sup></td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">6.5 ± 0.6<sup>∆</sup></td> </tr><tr><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">低剂量组</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">68.75</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">300 ± 11<sup>∆</sup></td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">5.5 ± 0.5</td> </tr><tr><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;"><i>F</i></td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;"> </td><td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">32.449</td> <td valign="middle" align="left" style="padding-left:10pt;height:16pt;">25.040</td> </tr><tr><td class="table_bottom_border" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left"><i>P</i></td> <td class="table_bottom_border" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left"> </td><td class="table_bottom_border" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">0.000</td> <td class="table_bottom_border" style="padding-left:10pt;height:16pt;" valign="middle" align="left">0.000</td> </tr></tbody>
<tfoot><tr><td colspan="4" align="left" valign="middle"> 与正常组比较，<sup>*</sup><i>P</i> < 0.05；与模型组比较，<sup>∆</sup><i>P</i> < 0.05。</td></tr></tfoot>
</table></div></foreignObject></svg>)
