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孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

杨霄彦 郝春光 张志坚

杨霄彦, 郝春光, 张志坚. 孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(10): 35-42. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221022
引用本文: 杨霄彦, 郝春光, 张志坚. 孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(10): 35-42. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221022
Xiaoyan YANG, Chunguang HAO, Zhijian ZHANG. Mechanisms of Progesterone on Proliferation and Migration of Human Ovarian Cancer Cells via HOXA9[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(10): 35-42. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221022
Citation: Xiaoyan YANG, Chunguang HAO, Zhijian ZHANG. Mechanisms of Progesterone on Proliferation and Migration of Human Ovarian Cancer Cells via HOXA9[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(10): 35-42. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221022

孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20221022
基金项目: 内蒙古自治区自然科学基金资助项目(2020MS08095)
详细信息
    作者简介:

    杨霄彦(1980~),女,山西长治人,硕士,主治医师,主要从事临床病理诊断,女性生殖及消化系统肿瘤诊断工作

    通讯作者:

    张志坚,E-mail:zzjbgyy@163.com

  • 中图分类号: R737.31

Mechanisms of Progesterone on Proliferation and Migration of Human Ovarian Cancer Cells via HOXA9

  • 摘要:   目的  探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。   方法  (1)按照孕激素醋酸甲羟孕酮(MPA)药物浓度梯度(0.1、1、10、50、100 μmol/L)培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、 48 h 、72 h后,光学显微镜观察细胞形态; CCK-8检测细胞存活率,确定IC50; Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。(2)将细胞分为H0-8910细胞4组:(1)NC组;(2)孕激素组;(3)孕激素+si-HOXA9组;(4)孕激素+ov-HOXA9组。H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR 和Western blot 分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白 (Vimentin,N-cadherin,E-cadherin)的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验用于检测细胞侵袭能力。   结果  (1)孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制(P < 0.0001),且细胞凋亡率上升(P < 0.0001);(2)通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC50值为2.680 μmol/L;(3)相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达(P < 0.01),HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达(P < 0.001);(4)孕激素可抑制HOXA9的表达(P < 0.0001),敲降HOXA9 后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显(P < 0.0001),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱(P < 0.0001);(5)孕激素使E-cadherin蛋白表达上升(P < 0.01),而Vimentin,N-cadherin蛋白表达下降(P < 0.001);敲降HOXA9 后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显(P < 0.05),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱(P < 0.05)。  结论  孕激素通过抑制HOXA9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程。
  • 图  1  HO-8910细胞经不同浓度MPA处理72h后细胞形态变化(10×)

    A:MPA 0.1 μmol/L 作用HO-8910细胞;B:MPA 1 μmol/L 作用HO-8910细胞;C:MPA 10 μmol/L 作用HO-8910细胞;D:MPA 100 μmol/L 作用HO-8910细胞。

    Figure  1.  Cell morphology of HO-8910 after 12h treatment with different concentrations of pregestational hormone (10×)

    图  2  不同浓度MPA对HO-8910细胞增殖以及凋亡影响

    A:不同浓度MPA刺激下的HO-8910细胞增殖率;B:通过AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度的MPA刺激下HO-8910的细胞凋亡状况;C:不同浓度MPA刺激下的HO-8910细胞凋亡率。* P < 0.05;****P < 0.0001。

    Figure  2.  Effects of different concentrations of pregestational hormoneon proliferation and apoptosis of HO-8910 cell line

    图  3  HOXA9在人卵巢癌细胞株中高表达

    A:HOXA9在正常卵巢上皮细胞CP-H055,人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3的相对mRNA表达;B,C:HOXA9在正常卵巢上皮细胞CP-H055,人卵巢癌细胞株HO-8910的相对蛋白表达。**P < 0.01,****P < 0.0001。

    Figure  3.  HOXA9 was highly expressed in human ovarian cancer cell lines.

    图  4  si-HOXA9质粒以及pcDNA-HOXA9质粒转染效率验证

    A:qPCR验证HOXA9的mRNA表达水平;B~C:Western blot验证HOXA9的蛋白表达水平。*P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001。

    Figure  4.  Validation of transfection efficiency of si- HOXA9 plasmid and pcDNA-HOXA9 plasmid

    图  5  MPA通过降低HOXA9表达抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭

    A,B:划痕实验验证MPA刺激下HOXA9对HO-8910细胞株侵袭能力的影响;C,D:Transwell实验验证MPA 刺激下HOXA9对HO-8910细胞株迁移能力的影响。*P < 0.05,***P < 0.001,****P < 0.0001。

    Figure  5.  MPA inhibited migration and invasion of human ovarian cancer cell line by reducing HOXA9 expression

    图  6  MPA通过降低HOXA9表达抑制人卵巢癌细胞EMT进程

    A: Westernblot检测HO-8910细胞株中EMT相关蛋白 Vimentin,N-cadherin,E-cadherin的表达变化;B:HO-8910细胞株中Vimentin的相对蛋白表达;C:HO-8910细胞株中N-cadherin的相对蛋白表达;D:HO-8910细胞株中E-cadherin的相对蛋白表达。*P < 0.05,**P < 0.01,***P < 0.001。

    Figure  6.  MPA repressed EMT in human ovarian cancer cells by reducing HOXA9 expression

    表  1  抗体信息表

    Table  1.   information of antibodies

    抗体(公司)抗体稀释比例
    HOXA9抗体(abcam ab140631)1∶1 000
    Vimentin抗体(CST 5741)1∶1 000
    E-cadherin抗体(CST 14472)1∶1 000
    N-cadherin抗体(CST 13116)1∶1 000
    GAPDH抗体(abcam ab8245)1∶500
    通用二抗(CST 7074)1∶2 000
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-06-17
  • 网络出版日期:  2022-10-09
  • 刊出日期:  2022-10-31

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