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miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

李京辉 朱明 曲海 李秋宇 吴玉娟 杨贺英 王郁竹 李妍平

李京辉, 朱明, 曲海, 李秋宇, 吴玉娟, 杨贺英, 王郁竹, 李妍平. miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化[J]. 昆明医科大学学报, 2021, 42(3): 10-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210305
引用本文: 李京辉, 朱明, 曲海, 李秋宇, 吴玉娟, 杨贺英, 王郁竹, 李妍平. miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化[J]. 昆明医科大学学报, 2021, 42(3): 10-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210305
Jing-hui LI, Ming ZHU, Hai QU, Qiu-yu LI, Yu-juan WU, He-ying YANG, Yu-zhu WANG, Yan-ping LI. miR-490-3p Suppresses EMT of SW1990 Pancreatic Cancer Cells[J]. Journal of Kunming Medical University, 2021, 42(3): 10-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210305
Citation: Jing-hui LI, Ming ZHU, Hai QU, Qiu-yu LI, Yu-juan WU, He-ying YANG, Yu-zhu WANG, Yan-ping LI. miR-490-3p Suppresses EMT of SW1990 Pancreatic Cancer Cells[J]. Journal of Kunming Medical University, 2021, 42(3): 10-17. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210305

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20210305
基金项目: 昆明市卫生健康委员会卫生科研基金资助项目(2020-21-01-011);昆明市延安医院院内基金资助项目(yyky019-040)
详细信息
    作者简介:

    李京辉(1979~),男,河北衡水人,医学硕士,副主任医师,主要从事重症胰腺炎及营养支持、重型颅脑损伤临床及研究工作

    通讯作者:

    李妍平,E-mail:119021422@qq.com

  • 中图分类号: R737.31

miR-490-3p Suppresses EMT of SW1990 Pancreatic Cancer Cells

  • 摘要:   目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物(inhibitor)和miR-490-3p模拟物(mimic)以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后,通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测,流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时,用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  (1)与HPDE正常细胞相比,SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低(P = 0.215);(2)miR-490-3p 上调后,SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组(P < 0.0001),而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P < 0.0001)。miR-490-3p 下调后,SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组(P < 0.0001),而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组(P < 0.0001);(3)miR-490-3p 上调后,SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组(P < 0.0001),而E-cadherin的表达水平显著低于对照组(P < 0.0001);miR-490-3p 下调后,SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组(P < 0.0001),而E-cadherin的表达水平显著高于对照组(P < 0.0001);(4)HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT,从而影响胰腺癌的的发生发展进程,揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。
  • 图  1  miR-490-3p在SW1990细胞中表达降低

    A:miR-490-3p mRNA在不同细胞系中的表达;B:miR-490-3p转染水平验证。*P < 0.05;**P < 0.01;***P < 0.001。

    Figure  1.  The expression of miR-490-3p significantly decreased in SW1990

    图  2  miR-490-3p促进SW1990细胞凋亡

    A:细胞凋亡实验;B:细胞凋亡率;C:细胞活力。***P < 0.001;****P < 0.000 1。

    Figure  2.  miR-490-3p promoted SW1990 cell apoptosis

    图  3  miR-490-3p抑制SW1990细胞迁移和侵袭

    A:细胞划痕实验;B:细胞侵袭实验;C:细胞迁移率;D:侵袭细胞数。****P < 0.000 1。

    Figure  3.  miR-490-3p inhibited the invasion and migration of SW1990 cell

    图  4  miR-490-3p抑制SW1990细胞的EMT

    A:E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达;B:E-cadherin蛋白表达水平分析;C:N-cadherin蛋白表达水平分析。***P < 0.001;****P < 0.000 1。

    Figure  4.  miR-490-3p inhibited the EMT of SW1990 cell

    图  5  HMGA2和miR-490-3p的靶向关系验证

    A:HMGA2蛋白表达水平与胰腺癌预后分析;B:miR-490-3p与HMGA2相关性分析;C:miR-490-3p与HMGA2基因3′UTR结合位点示意图;D:293T细胞荧光素酶活性;E:HMGA2蛋白表达水平与表达水平分析。*P < 0.05;**P < 0.01;***P < 0.001。

    Figure  5.  Validation of targeting relationship between HMGA2 and miR-490-3p

    表  1  RT-qPCR扩增引物序列表

    Table  1.   Nucleotide sequences of the primers used for real-time quantitative PCR

    引物名称引物序列
    miR-490-3p forward 5′-CGTGGATCCTTCTTCAACCAACGGTGGTG-3′
    miR-490-3p reverse 5′-CCAGAATTCAAAGCAGGAAGAGTAAGACTTCC-3′
    U6 forward 5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAA-3′
    U6 reverse 5′-CGAATTTGCGTGTCATCCTT-3′
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  • 收稿日期:  2020-12-15
  • 刊出日期:  2021-04-09

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