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HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

刘倩 哈提拉·吐尔逊 阿仙姑·哈斯木

刘倩, 哈提拉·吐尔逊, 阿仙姑·哈斯木. HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(7): 46-54. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220714
引用本文: 刘倩, 哈提拉·吐尔逊, 阿仙姑·哈斯木. HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用[J]. 昆明医科大学学报, 2022, 43(7): 46-54. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220714
Qian LIU, Tuerxun HATILA, Hasimu AXIANGU. HLA-G Enhances the Killing Effect of NK Cells on Cervical Cancer Cells by Promoting the Expression of Activated Receptor[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(7): 46-54. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220714
Citation: Qian LIU, Tuerxun HATILA, Hasimu AXIANGU. HLA-G Enhances the Killing Effect of NK Cells on Cervical Cancer Cells by Promoting the Expression of Activated Receptor[J]. Journal of Kunming Medical University, 2022, 43(7): 46-54. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220714

HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20220714
基金项目: 新疆维吾尔自治区自然科学基金青年项目(2019D01C190)
详细信息
    作者简介:

    刘倩(1988~),女,新疆乌鲁木齐人,在读博士研究生,讲师,主要从事宫颈癌分子机制及免疫研究工作

    通讯作者:

    阿仙姑·哈斯木,E-mail:axiangu75@126.com

  • 中图分类号: R730.3

HLA-G Enhances the Killing Effect of NK Cells on Cervical Cancer Cells by Promoting the Expression of Activated Receptor

  • 摘要:   目的  探索宫颈癌细胞中HLA-G表达差异对NK细胞表面活化性受体的影响。  方法  实时定量PCR(real-time PCR)及免疫印迹法(Western-Blot WB)检测宫颈癌细胞及正常宫颈细胞中 HLA-G的表达差异。利用慢病毒载体构建 HLA-G稳定下调的宫颈癌细胞株,并与 NK 细胞共培养,CCK8法检测共培养后宫颈癌细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡水平。同时,流式细胞术检测共培养后NK细胞表面活化性受体NKG2D、NKP30的表达水平及颗粒素(Granzyme)、穿孔酶(Perforin)的表达差异。  结果  RT-PCR及WB法检测结果显示:与H8细胞相比,C33a、SiHa细胞中HLA-G的表达显著升高(P < 0.05)。CCK8法检测结果显示:HLA-G下调后,C33a及SiHa细胞与NK细胞共培养,C33a及SiHa细胞的增殖能力显著减弱(P < 0.05),同时,C33a及SiHa细胞的凋亡水平显著升高(P < 0.05)。流式细胞术检测结果显示:C33a及SiHa细胞HLA-G下调后,与其共培养的NK表面NKG2D表达显著升高(P < 0.05),与C33a共培养的NK细胞表面NKP30及Granzyme、Perforin表达显著升高(P < 0.05),与SiHa共培养的NK细胞表面NKP30及Granzyme、Perforin表达存在升高趋势,但差异均无统计学意义(P > 0.05)。  结论  HLA-G在宫颈癌细胞中高表达,HLA-G表达升高可促进活化性受体的表达,增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用。
  • 图  1  NK 细胞流式纯度检测

    Figure  1.  Purity detection of NK cells by flow cytometry

    图  2  HLA-G在宫颈癌及正常宫颈上皮细胞系中的表达差异

    A:RT-PCR 检测结果;B:WB检测结果。*P < 0.05;**P < 0.01;****P < 0.001。

    Figure  2.  Difference in HLA-G expression between cervical cancer and normal cervical epithelial cell lines

    图  3  慢病毒转染宫颈癌细胞系后HLA-G表达情况

    A:C33a细胞系;B:SiHa细胞系。*P < 0.05;**P < 0.01;***P < 0.001。

    Figure  3.  HLA-G expression after transfection in cervical cancer cell lines

    图  4  CCK8法检测各组宫颈癌细胞增殖能力

    A:C33a细胞株;B:SiHa细胞株。****P < 0.0001。

    Figure  4.  CCK8 was used to detect the proliferation of cervical cancer cells

    图  5  HLA-G下调后NK细胞与C33a及SiHa细胞共培养,肿瘤细胞凋亡程度

    A:C33a 细胞;B:SiHa 细胞。*P < 0.05;**P < 0.01;****P < 0.0001。

    Figure  5.  After HLA-G transfection,NK cells were co-cultured with C33a and SiHa cells,detection the degree of apoptosis of tumor cells

    图  6  HLA-G下调后,NK细胞与宫颈癌细胞共培养,NK细胞表面激活性受体及杀伤介质的表达

    A:NKG2D;B:NKP30;C:Granzyme;D:Perforin。*P < 0.05;**P < 0.01;****P < 0.0001。

    Figure  6.  After HLA-G transfection,NK cells were co-cultured with cervical cancer cells,the expression of NK cell surface activating receptor and killing agent was observed

    表  1  RT-PCR引物序列

    Table  1.   RT-PCR primer sequence

    基因引物序列
    HLA-G F:GAGAGGAGCAGAGATACATGTG
    R:TCAATCTGAGCTCTTCTTCCTC
    GAPDH F:GAGAAGGCTGGGGCTCATTTGC
    R:GCTGATGATCTTGAGGCTGTTGTC
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-04-13
  • 网络出版日期:  2022-06-25
  • 刊出日期:  2022-07-14

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