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钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

王惠 曾文珺 张海萍 郭瑞威

王惠, 曾文珺, 张海萍, 郭瑞威. 钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
引用本文: 王惠, 曾文珺, 张海萍, 郭瑞威. 钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响[J]. 昆明医科大学学报, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
Hui WANG, Wenjun ZENG, Haiping ZHANG, Ruiwei GUO. Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
Citation: Hui WANG, Wenjun ZENG, Haiping ZHANG, Ruiwei GUO. Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation[J]. Journal of Kunming Medical University, 2023, 44(4): 16-22. doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423

钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423
基金项目: 云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项重点基金资助项目(202102AY070001-030);联勤保障部队中坚人才培养基金资助项目(20220105)
详细信息
    作者简介:

    王惠(1989~),女,四川南充人,医学硕士,主治医师,主要从事血管平滑肌细胞的增殖机制研究工作

    通讯作者:

    郭瑞威,E-mail:grw771210@163.com

  • 中图分类号: R54

Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation

  • 摘要:   目的  探讨钙库操纵型钙通道Orai3对冠状动脉血管平滑肌细胞(CASMC)增殖的影响。  方法  培养原代冠状动脉血管平滑肌细胞(coronary vascular smooth muscle cells,CASMC),对CASMC中Orai3分子实施干扰和过表达干预,QPCR实验和Western Blot检测Orai3表达量,CCK8实验和细胞计数检测CASMC增殖情况。  结果  CCK8实验和细胞计数实验显示无血清组较10%血清组CASMC增殖速率下降(P < 0.05),CASMC中Orai3表达量下降(P < 0.05)。干扰Orai3后与对照组相比CASMC增殖速率下降(P < 0.05),过表达Orai3后与对照组相比细胞增殖速率升高(P < 0.05)。  结论  钙库操纵型钙通道组成分子Orai3在CASMC增殖中发挥重要作用。
  • 图  1  无血清组及10%血清组CASMC细胞增殖情况

    A:CCK8实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC增殖情况;B:细胞计数实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较,**P < 0.01。

    Figure  1.  The coronary vessel smooth muscle cell proliferation difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

    图  2  无血清组及10%血清组Orai3表达量情况

    A:血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图;B:Western Blot实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC增殖情况;C:QPCR实验分别检测无血清组(FBS-)和10%血清组(FBS+)培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。

    Figure  2.  Orai3 expression difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

    图  3  干扰Orai3后CASMC细胞增殖情况

    A :干扰Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图。B:干扰Orai3后Western Blot实验检测干扰效率;C:干扰Orai3后QPCR实验检测干扰效率;D:干扰Orai3后CCK8实验检测CASMC增殖情况;E:干扰Orai3后细胞计数实验检测CASMC增殖情况;siOrai3-NC:Orai3干扰阴性对照组;siOrai3:Orai3干扰组。与FBS+比较,**P < 0.01。

    Figure  3.  Orai3 interfering and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation.

    图  4  过表达Orai3后CASMC细胞增殖情况

    A:过表达Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图;B:过表达Orai3后Western Blot实验检测干扰效率;C:过表达Orai3后QPCR实验检测干扰效率;D:过表达Orai3后CCK8实验检测CASMC细胞增殖情况;E:过表达Orai3后细胞计数实验检测CASMC细胞增殖情况;oe-NC:Orai3干扰阴性对照组即空白载体;oe-Orai3:Orai3干扰组。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。

    Figure  4.  Orai2 over-expression and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation

    表  1  CCK8检测CASMC增殖[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  1.   Growth curve of CASMC cells by CCK8 assay [($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)FBS+FBS−tP
    0 0.0634 ± 0.0291 0.0804 ± 0.0310 0.8947 0.3971
    24 0.3662 ± 0.1092 0.2629 ± 0.0645 1.8200 0.1062
    48 1.0450 ± 0.0942 0.4709 ± 0.0642 11.2700 < 0.0001**
    72 1.6350 ± 0.1015 0.5659 ± 0.0946 17.2300 < 0.0001**
    96 1.9710 ± 0.1611 0.5015 ± 0.0905 17.7800 < 0.0001**
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+组比较,**P < 0.01。
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    表  2  CASMC细胞计数(1×104)[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  2.   Growth curve of CASMC cells by cell counting assay (1×104)[($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)FBS+FBS−tP
    0 1.3400 ± 0.3209 1.6000 ± 0.4183 1.1030 0.3022
    24 4.9000 ± 0.7416 3.3500 ± 0.4183 4.0700 0.0036**
    48 11.7000 ± 0.9747 4.4500 ± 0.9083 12.1700 < 0.0001**
    72 13.5500 ± 1.0950 4.7000 ± 0.8909 14.0100 < 0.0001**
    96 14.3500 ± 0.9618 3.5500 ± 1.0370 17.0800 < 0.0001 **
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。 与FBS+比较,**P < 0.01。
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    表  3  CASMC的Orai3相对表达量[($\bar x \pm s $),n = 3]

    Table  3.   Orai3 expression of CASMC cells [($\bar x \pm s $),n = 3]

    Orai3FBS+FBS-tP
    蛋白表达量1.0270 ± 0.29250.2036 ± 0.14347.0090 0.0060**
    RNA表达量1.0150 ± 0.20650.1498 ± 0.01677.54500.0171*
      FBS+为10%血清的完全培养液培养,FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
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    表  4  CCK8检测siOrai3干扰后CASMC增殖情况[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  4.   Growth curve of siOrai3 CASMC cells by CCK8 assay[ ($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)siOrai3-NCsiOrai3tP
    24 0.0801 ± 0.0288 0.0985 ± 0.0418 0.8098 0.4415
    48 0.4464 ± 0.0603 0.1966 ± 0.0130 9.0590 < 0.0001**
    72 0.8322 ± 0.1142 0.6127 ± 0.0842 3.4590 0.0086**
    96 1.4200 ± 0.0547 0.6499 ± 0.1201 13.0400 0.0034**
      siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组,siOrai3为转染siOrai3实验组。与siOrai3-NC比较,**P < 0.01。
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    表  5  siOrai3干扰后CASMC细胞计数(1×104)($\bar x \pm s $n = 3)

    Table  5.   Growth curve of siOrai3 CASMC cells by cell counting assay (1×104)($\bar x \pm s $n = 3)

    时间(h)siOrai3-NCsiOrai3tP
    24 2.0830 ± 1.0100 1.2500 ± 0.2500 1.3870 0.2378
    48 8.1670 ± 1.2580 4.4170 ± 0.6292 4.6170 0.0099 **
    72 12.0000 ± 1.0000 7.0000 ± 0.5000 7.7460 0.0015**
    96 14.0000 ± 1.0000 7.8330 ± 0.7638 8.4880 0.0011**
      siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组,siOrai3为转染siOrai3实验组。与NC组比较,**P < 0.01。
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    表  6  CCK8检测oe-Orai3转染后CASMC增殖情况[($\bar x \pm s $),n = 5]

    Table  6.   Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by CCK8 assay [($\bar x \pm s $),n = 5]

    时间(h)oe-NCoe-Orai3tP
    24 0.0621 ± 0.0143 0.0640 ± 0.0062 0.2802 0.7865
    48 0.4469 ± 0.0564 1.1080 ± 0.0712 16.2700 < 0.0001**
    72 0.8993 ± 0.0979 1.8710 ± 0.1437 12.4900 < 0.0001 **
    96 1.4570 ± 0.0842 2.0770 ± 0.0820 11.7800 < 0.0001**
      oe-NC为转染阴性对照组,Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体;oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组,oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较,**P < 0.01。
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    表  7  oe-Orai3转染后CASMC细胞计数(1×104)[($\bar x \pm s $),n = 3]

    Table  7.   Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by cell counting assay[ ($\bar x \pm s $),n = 3]

    时间(h)oe-NCoe-Orai3tP
    24 2.5000 ± 0.8660 5.9170 ± 2.0050 2.7090 0.0536
    48 10.0800 ± 1.8430 24.1700 ± 2.0210 8.9190 0.0009 **
    72 17.0800 ± 1.7740 26.6700 ± 2.0820 6.0690 0.0037**
    96 19.7500 ± 3.4370 30.1700 ± 3.2150 3.8340 0.0186*
      oe-NC为转染阴性对照组,Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体;oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组,oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-01-30
  • 网络出版日期:  2023-04-18
  • 刊出日期:  2023-04-25

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