钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

王惠; 曾文珺; 张海萍; 郭瑞威

doi:10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423

钙库操纵型钙通道Orai3分子对冠状动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

doi: 10.12259/j.issn.2095-610X.S20230423

解放军联勤保障部队第920医院心血管内科，云南昆明　650032

基金项目: 云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项重点基金资助项目（202102AY070001-030）；联勤保障部队中坚人才培养基金资助项目（20220105）

详细信息

作者简介:
王惠（1989～），女，四川南充人，医学硕士，主治医师，主要从事血管平滑肌细胞的增殖机制研究工作

通讯作者:
郭瑞威，E-mail：grw771210@163.com

中图分类号: R54
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出版历程
- 收稿日期: 2023-01-30
- 网络出版日期: 2023-04-18
- 刊出日期: 2023-04-25

Effects of Store-operated Calcium Channel Molecule Orai3 on Rat Coronary Artery Smooth Muscle Cells Proliferation

Dept. of Cardiology，920th Hospital of Joint Logistics Support Force，PLA， Kunming Yunnan 650032，China

摘要

摘要: 目的探讨钙库操纵型钙通道Orai3对冠状动脉血管平滑肌细胞（CASMC）增殖的影响。方法培养原代冠状动脉血管平滑肌细胞（coronary vascular smooth muscle cells，CASMC），对CASMC中Orai3分子实施干扰和过表达干预，QPCR实验和Western Blot检测Orai3表达量，CCK8实验和细胞计数检测CASMC增殖情况。结果 CCK8实验和细胞计数实验显示无血清组较10%血清组CASMC增殖速率下降（P < 0.05），CASMC中Orai3表达量下降（P < 0.05）。干扰Orai3后与对照组相比CASMC增殖速率下降（P < 0.05），过表达Orai3后与对照组相比细胞增殖速率升高（P < 0.05）。结论钙库操纵型钙通道组成分子Orai3在CASMC增殖中发挥重要作用。
- 冠状动脉血管平滑肌细胞 /
- 细胞增殖 /
- Orai3 /
- 钙库操纵型钙通道
Abstract: Objective To investigate the effect of calcium store-operated calcium channel Orai3 on the proliferation of coronary artery smooth muscle cells （CASMC）. Methods Coronary artery smooth muscle cells （CASMC） were cultured, and Orai3 molecule in CASMC was interfered and over-expressed. QPCR and Western Blot were used to detect the expression of Orai3, and CCK8 and cell counts were used to detect the CASMC proliferation. Results CCK8 assay and cell counts showed that the proliferation rate of CASMC in serum-free group was lower than that in 10% serum group （P < 0.05）, and also the expression of Orai3 in CASMC was decreased （P < 0.05）. Compared with the control group, the proliferation rate of CASMC decreased after interference with Orai3 （P < 0.05）, and the proliferation rate of CASMC increased compared with the control group after over-expression of Orai3 （P < 0.05）. Conclusion The store-operated calcium channel constituent molecule Orai3 plays an important role in CASMC proliferation.
- Coronary artery smooth muscle cell /
- Cell proliferation /
- Orai3 /
- Store-operated calcium channel

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图 1 无血清组及10%血清组CASMC细胞增殖情况

A：CCK8实验分别检测无血清组（FBS-）和10%血清组（FBS+）培养下CASMC增殖情况；B：细胞计数实验分别检测无血清组（FBS-）和10%血清组（FBS+）培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较，^**P < 0.01。

Figure 1. The coronary vessel smooth muscle cell proliferation difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

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图 2 无血清组及10%血清组Orai3表达量情况

A：血清组（FBS-）和10%血清组（FBS+）培养下CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图；B：Western Blot实验分别检测无血清组（FBS-）和10%血清组（FBS+）培养下CASMC增殖情况；C：QPCR实验分别检测无血清组（FBS-）和10%血清组（FBS+）培养下CASMC细胞增殖情况。与FBS+比较，^*P < 0.05，^**P < 0.01。

Figure 2. Orai3 expression difference between 0%FBS medium cultured group and 10% FBS medium cultured group

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图 3 干扰Orai3后CASMC细胞增殖情况

A ：干扰Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图。B：干扰Orai3后Western Blot实验检测干扰效率；C：干扰Orai3后QPCR实验检测干扰效率；D：干扰Orai3后CCK8实验检测CASMC增殖情况；E：干扰Orai3后细胞计数实验检测CASMC增殖情况；siOrai3-NC：Orai3干扰阴性对照组；siOrai3：Orai3干扰组。与FBS+比较，^**P < 0.01。

Figure 3. Orai3 interfering and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation.

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图 4 过表达Orai3后CASMC细胞增殖情况

A：过表达Orai3后CASMC细胞提取蛋白Western Blot检测Orai3表达量条带图；B：过表达Orai3后Western Blot实验检测干扰效率；C：过表达Orai3后QPCR实验检测干扰效率；D：过表达Orai3后CCK8实验检测CASMC细胞增殖情况；E：过表达Orai3后细胞计数实验检测CASMC细胞增殖情况；oe-NC：Orai3干扰阴性对照组即空白载体；oe-Orai3：Orai3干扰组。与FBS+比较，^*P < 0.05，^**P < 0.01。

Figure 4. Orai2 over-expression and the Coronary vessel smooth muscle cell proliferation

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表 1 CCK8检测CASMC增殖[（$\bar x \pm s $），n = 5]

Table 1. Growth curve of CASMC cells by CCK8 assay [（$\bar x \pm s $），n = 5]

时间（h）	FBS+	FBS−	t	P
0	0.0634 ± 0.0291	0.0804 ± 0.0310	0.8947	0.3971
24	0.3662 ± 0.1092	0.2629 ± 0.0645	1.8200	0.1062
48	1.0450 ± 0.0942	0.4709 ± 0.0642	11.2700	< 0.0001^**
72	1.6350 ± 0.1015	0.5659 ± 0.0946	17.2300	< 0.0001^**
96	1.9710 ± 0.1611	0.5015 ± 0.0905	17.7800	< 0.0001^**
FBS+为10%血清的完全培养液培养，FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+组比较，^**P < 0.01。

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表 2 CASMC细胞计数（1×10⁴）[（$\bar x \pm s $），n = 5]

Table 2. Growth curve of CASMC cells by cell counting assay （1×10⁴）[（$\bar x \pm s $），n = 5]

时间（h）	FBS+	FBS−	t	P
0	1.3400 ± 0.3209	1.6000 ± 0.4183	1.1030	0.3022
24	4.9000 ± 0.7416	3.3500 ± 0.4183	4.0700	0.0036^**
48	11.7000 ± 0.9747	4.4500 ± 0.9083	12.1700	< 0.0001^**
72	13.5500 ± 1.0950	4.7000 ± 0.8909	14.0100	< 0.0001^**
96	14.3500 ± 0.9618	3.5500 ± 1.0370	17.0800	< 0.0001^**
FBS+为10%血清的完全培养液培养，FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+比较，^**P < 0.01。

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表 3 CASMC的Orai3相对表达量[（$\bar x \pm s $），n = 3]

Table 3. Orai3 expression of CASMC cells [（$\bar x \pm s $），n = 3]

Orai3	FBS+	FBS-	t	P
蛋白表达量	1.0270 ± 0.2925	0.2036 ± 0.1434	7.0090	0.0060^**
RNA表达量	1.0150 ± 0.2065	0.1498 ± 0.0167	7.5450	0.0171^*
FBS+为10%血清的完全培养液培养，FBS-为无血清的不完全培养基培养。与FBS+比较，^P < 0.05，^*P < 0.01。

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表 4 CCK8检测siOrai3干扰后CASMC增殖情况[（$\bar x \pm s $），n = 5]

Table 4. Growth curve of siOrai3 CASMC cells by CCK8 assay[ （$\bar x \pm s $），n = 5]

时间（h）	siOrai3-NC	siOrai3	t	P
24	0.0801 ± 0.0288	0.0985 ± 0.0418	0.8098	0.4415
48	0.4464 ± 0.0603	0.1966 ± 0.0130	9.0590	< 0.0001^**
72	0.8322 ± 0.1142	0.6127 ± 0.0842	3.4590	0.0086^**
96	1.4200 ± 0.0547	0.6499 ± 0.1201	13.0400	0.0034^**
siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组，siOrai3为转染siOrai3实验组。与siOrai3-NC比较，^**P < 0.01。

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表 5 siOrai3干扰后CASMC细胞计数（1×10⁴）（$\bar x \pm s $，n = 3）

Table 5. Growth curve of siOrai3 CASMC cells by cell counting assay （1×10⁴）（$\bar x \pm s $，n = 3）

时间（h）	siOrai3-NC	siOrai3	t	P
24	2.0830 ± 1.0100	1.2500 ± 0.2500	1.3870	0.2378
48	8.1670 ± 1.2580	4.4170 ± 0.6292	4.6170	0.0099^**
72	12.0000 ± 1.0000	7.0000 ± 0.5000	7.7460	0.0015^**
96	14.0000 ± 1.0000	7.8330 ± 0.7638	8.4880	0.0011^**
siOrai3-NC为转染siOrai3阴性对照组，siOrai3为转染siOrai3实验组。与NC组比较，^**为P < 0.01。

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表 6 CCK8检测oe-Orai3转染后CASMC增殖情况[（$\bar x \pm s $），n = 5]

Table 6. Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by CCK8 assay [（$\bar x \pm s $），n = 5]

时间（h）	oe-NC	oe-Orai3	t	P
24	0.0621 ± 0.0143	0.0640 ± 0.0062	0.2802	0.7865
48	0.4469 ± 0.0564	1.1080 ± 0.0712	16.2700	< 0.0001^**
72	0.8993 ± 0.0979	1.8710 ± 0.1437	12.4900	< 0.0001^**
96	1.4570 ± 0.0842	2.0770 ± 0.0820	11.7800	< 0.0001^**
oe-NC为转染阴性对照组，Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体；oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组，oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较，^**为P < 0.01。

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表 7 oe-Orai3转染后CASMC细胞计数（1×10⁴）[（$\bar x \pm s $），n = 3]

Table 7. Growth curve of oe-Orai3 CASMC cells by cell counting assay[ （$\bar x \pm s $），n = 3]

时间（h）	oe-NC	oe-Orai3	t	P
24	2.5000 ± 0.8660	5.9170 ± 2.0050	2.7090	0.0536
48	10.0800 ± 1.8430	24.1700 ± 2.0210	8.9190	0.0009^**
72	17.0800 ± 1.7740	26.6700 ± 2.0820	6.0690	0.0037^**
96	19.7500 ± 3.4370	30.1700 ± 3.2150	3.8340	0.0186^*
oe-NC为转染阴性对照组，Orai2、Orai3阴性对照组为同一空白载体；oe-Orai2为过表达Orai2质粒DNA组，oe-Orai3为过表达Orai3质粒DNA组。与NC组比较，^P < 0.05，^*P < 0.01。

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